乙酰肝素酶及其相关因子mRNA在白血病细胞中的表达

目的 观察乙酰肝素酶(HPA)及其相关因子mRNA在白血病细胞中的表达,研究白血病细胞表面止血平衡改变.方法 选取白血病患者40例(研究组),缺铁性贫血患者20例(对照组).采用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定受试者骨髓单个核细胞组织因子(TF)、尿激酶型纤溶酶原激活物受体(uPAR)、HPA mRNA的含量.结果 研究组骨髓中单个核细胞TF、uPAR、HPAmRNA的表达与对照组相比均升高(均P＜0.05),35例初发白血病患者中急性髓系白血病(AML)组(23例)骨髓中单个核细胞TF、uPAR、HPA mRNA高于慢性粒细胞白血病(CML)组(4例)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)组(3例)、急性淋巴细胞白血病(ALL)组(5例)(对照组、AML组、CML组、ALL组、CLL组TF分别为0.66±0.03、2.56±0.37、1.33±0.06、1.93±0.08、1.23±0.07,uPAR分别为0.53士0.02、1.89±0.26、0.92±0.15、1.44±0.01、1.19±0.16,HPA分别为2.37±0.24、1.42±0.13、1.68±0.09、1.54±0.12,均P＜0.05).结论 白血病细胞中HPA、TF、uPAR mRNA表达增高;不同类型白血病表达水平不同.提示TF、uPAR、HPA可能影响白血病细胞表面止血平衡,不同类型白血病细胞表面止血平衡改变不同.     

反义肝素酶基因对胰腺癌细胞体外增殖和侵袭的抑制作用

目的:研究反义肝素酶基因对人胰腺癌SW1990细胞体外增殖和侵袭能力的抑制作用．方法:反义肝素酶基因转染胰腺癌sW1990细胞,并设空载体对照组和空白对照组,以流式细胞仪检测细胞周期;免疫组化、Western blot及RT-PCR检测肝素酶蛋白和mRNA表达;平板克隆形成实验检测细胞增殖活性,Transwell侵袭小室模型检测细胞体外侵袭能力．结果:与空白组和空载组比较,反义组细胞周期中S期比例明显减少(18.8％±2．5％vs 36．3％±2．2％,33．2％±2．1％,P<0．01),G1期细胞比例明显升高(66．0％±2．7％vs30．7％±3．2％,39．8％±4．9％,P<0．01);肝素酶蛋白及mRNA表达分别降低34．3％和37．8％:细胞克隆形成数目减少(12．2±2．8 vs 30．8±4．4,28．3±2．7,P<0．01);Transwell侵袭小室中24 h穿膜细胞数减少(13．0±3．5 vs 34．8±5．8,29．4±5．6．P<0．01)．结论:反义肝素酶基因抑制人胰腺癌SW1990细胞体外增殖及侵袭能力．     

血清乙酰肝素酶与2型糖尿病代谢性指标的相关性研究

目的 探讨血清乙酰肝素酶(HPSE)与2型糖尿病(T2DM)患者代谢指标(包括血糖、血压、血脂、腰围等)间的关系.方法 选取120例T2DM患者,收集性别、年龄、病程等一般临床资料;测定空腹血糖(FBG)、餐后血糖(PBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)等指标的水平;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测患者血清HPSE水平.对相关临床资料进行统计分析.结果 T2DM患者血清HPSE水平与糖尿病代谢指标[腰围、体质指数(BMI)、FBG、PBG、HbA1c、收缩压、舒张压、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)]均无相关性( P ＞0.05).T2DM患者血清HPSE水平在FBG≥5.6 mmol/L组显著高于FBG＜5.6 mmol/L组[(1.52±1.41)U/L与(0.92±1.25)U/L],差异有统计学意义( P ＜0.05);而其他糖尿病代谢指标分层间血清HPSE水平比较,差异均无统计学意义( P ＞0.05).结论 FBG升高伴随有血清HPSE水平升高,提示血糖可能是T2DM患者血清HPSE升高的重要危险因素.     

HPA反义寡核苷酸对人食管癌EC9706细胞中HPA蛋白表达的影响

目的　探讨乙酰肝素酶 (HPA)反义寡核苷酸 (ASODN)对人食管癌 EC970 6细胞中 HPA蛋白表达的影响。方法　将食管癌 EC970 6细胞体外分组贴壁培养 ,实验组分别用设计合成的 10、2 0、30 μm ol/ L 三种浓度的 4条封闭肝素酶不同基因位点的 ASODN(ASODN- t1 、ASODN- t2 、ASODN- t3、ASODN- t4 )。对照 组为 1条无关寡核苷酸 (N - ODN)转染 EC970 6细胞 ,对照 组为无转染。采用免疫组化 (SP)法检测各组 EC970 6细胞中HPA蛋白表达情况。结果　实验组中 3种浓度的 4条 HPA- t2 效应最强。不同浓度的 4条 HPA ASODN对EC970 6细胞中 HPA蛋白表达的影响无统计学意义 (P >0 .0 5 ) ,但均低于对照 组及对照 组 (无转染 )(P<0 .0 5 )。结论　HPA ASODN可抑制食管癌 EC970 6细胞中 HPA蛋白表达。     

硼替佐米对多发性骨髓瘤细胞乙酰肝素酶表达及迁移能力的影响

目的: 研究硼替佐米对多发性骨髓瘤细胞株U266的乙酰肝素酶(HPA)表达及迁移能力的影响,并探讨其作用机制。方法: 体外培养U266细胞,以不同浓度的硼替佐米进行处理,采用CCK-8检测细胞活力,用RT-PCR方法检测HPA mRNA水平的变化,用Western blotting方法检测HPA蛋白及IκB表达水平的变化,以Transwell方法检测细胞迁移能力的变化。结果: U266细胞表达HPA,以0、3.125、12.5及50 nmol/L浓度的硼替佐米处理U266细胞48 h,HPA mRNA及蛋白的表达逐渐减少(P<0.01),而细胞迁移能力逐渐减弱(P<0.01)。同时,HPA的蛋白表达水平与IκB的表达水平呈负相关(P<0.01)。结论: 硼替佐米通过抑制HPA的表达抑制骨髓瘤细胞的迁移能力,其机制可能是通过NF-κB信号途径进行调控的。     

Normal colon tissue and colon carcinoma show no difference in heparanase promoter methylation

Introduction

Heparanase, the sole heparan sulfate degrading enzyme, has a role in cellular invasion. Accordingly, a large number of studies have demonstrated an association between heparanase expression and tumor stage and patients' prognosis. In colon carcinoma, heparanase shows increased expression in tumor compared to normal tissue and its expression correlates with the presence of metastasis. One of the regulatory mechanisms of heparanase expression is de-methylation on its promoter. In the present study we evaluated the role of heparanase promoter methylation in colon carcinoma.

Material and methods

Analysis of heparanase promoter methylation was done on 32 samples of colon carcinoma as well as 30 samples of normal colonic mucosa. DNA was extracted from FFPE tissue and subjected to bisulfite conversion. The relative fraction of methylated and unmethylated DNA was evaluated using quantitative real-time PCR.

Results

The fraction of methylated DNA was 1 ± 3.4% in the colon carcinoma group, and 2.5 ± 3.3% in the normal colon group (P = 0.11). Only one case in the normal group and one case in the tumor group showed more than 10% methylation in the heparanase promoter.

Conclusion

We did not find any significant difference in heparanase promoter methylation between colon carcinoma and normal colonic mucosa, suggesting that heparanase overexpression in colon carcinoma is mediated by other mechanisms.     

乙酰肝素酶表达与宫颈鳞癌组织微血管微淋巴管生成、癌细胞增殖、浸润转移及预后的关系

目的探讨宫颈鳞癌组织乙酰肝素酶（heparanase,HPA）表达及临床意义。方法采用免疫组织化学法检测28例正常宫颈上皮（normal cervical epithelium,NCE）、36例宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasm,CIN）和68例宫颈鳞癌（squamous carcinoma of cervix,SCC）组织HPA的表达情况,并检测CD34标记的微血管密度（microvessel density,MVD）、VEGFR-3标记的微淋巴管密度（lymphatic microvessel density,LMVD）和MIB-1标记的增殖指数（proliferation index,PI）。结果 HPA在NCE、CIN及SCC组的表达水平分别为0.0646±0.0166、0.0968±0.0155及0.1175±0.0212。从NCE到CIN再到SCC,HPA表达水平显著升高（P〈0.01）。在CIN组,HPA高表达者MVD及LMVD均分别显著高于低表达者（P〈0.05）,HPA在CIN组表达分别与MVD及LMVD显著正相关（MVD：r=0.625,P=0.000;LMVD：r=0.380,P=0.022）,而与PI无关（r=0.300,P=0.075）。在SCC组,HPA高表达者MVD显著高于低表达者（P〈0.05）,HPA在SCC组表达与MVD显著正相关（r=0.330,P=0.006）,而分别与LMVD及PI无关（LMVD：r=0.124,P=0.314;PI：r=-0.077,P=0.533）。HPA在SCC组表达分别与盆腔淋巴结转移及脉管浸润密切相关,宫颈鳞癌有盆腔淋巴结转移和脉管浸润者HPA表达水平显著高于无盆腔淋巴结转移及无脉管浸润者（P〈0.01）。宫颈鳞癌突破深肌层间质浸润者HPA表达水平明显高于浸润深度在浅肌层间质以内者,但未达统计学意义（t=1.946,P=0.056）。宫颈鳞癌HPA高表达患者生存率明显低于低表达组,但未达统计学意义（log rank检验,P=0.0607）。结论 HPA可能在宫颈鳞癌的发生发展过程发挥重要作用。HPA在CIN组表达上调可能促进微淋巴管生成,在SCC组表达上调可能促进血管新生及癌细胞浸润转移。HPA过度表达可能是宫颈鳞癌患者的一个不良预后因素。     

乙酰肝素酶与头颈部鳞状细胞癌侵袭、转移和血管生成的关系

目的 探讨乙酰肝素酶(HPA)mRNA与头颈部鳞状细胞癌(HNSCCs)侵袭、转移和血管生成之间的关系.方法 应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测HPA mRNA在70例HNSCCs组织、20例癌旁黏膜组织中的表达情况,免疫组织化学染色(SP法)检测70例HNSCCs组织中CD34的表达情况,并结合HNSCCs临床病理特征,分析HPA mRNA与HNSCCs侵袭,转移和肿瘤微血管密度(MVD)之间的关系.结果 70例HNSCCs组织中HPA mRNA阳性表达41例,30例癌旁组织中仅3例HPA mRNA呈微弱表达,不同组织中HPA的表达差异有统计学意义(P＜0.05).HPA mRNA阳性表达与HNSCCs病理分级、侵袭程度和颈淋巴结转移有关(P＜0.05),即原发肿瘤分化程度越差、侵袭程度越深,HPA阳性表达率就越高;有颈淋巴结转移者HPA阳性表达率显著高于无颈淋巴结转移者.HPA mRNA阳性者的MVD值(57.65±4.46)显著高于阴性者(35.23±4.16,P＜0.05).结论 HPA促进HNSCCs的侵袭、转移和血管生成,可作为反应HNSCC生物学行为的客观指标.