镇心省睡益智方及其精油对AD模型小鼠学习记忆的影响

目的:观察镇心省睡益智方水提液及其精油对β淀粉样前体蛋白基因/早老素基因(APP/PS1)双转基因小鼠学习记忆的影响并探讨其可能机制。方法:采用APP/PS1双转基因痴呆小鼠及同月龄相同遗传背景C57BL/6JNju小鼠2种小鼠。C57BL/6JNju小鼠作为正常组,APP/PS1双转基因痴呆小鼠随机分为模型组,镇心省睡益智方精油低、高质量浓度组(12.13,48.50 mg·L~(-1)),镇心省睡益智方水提液组(0.46 g·kg~(-1)),每组12只。每天给药1次,连续给药22 d。给药结束后采用跳台实验、Morris水迷宫实验对小鼠行为学能力进行检测,采用尼氏染色观察海马CA1区神经元变化,采用硫磺素(Th S)染色观察海马DG区老年斑(SP)沉积,采用免疫组化法检测小鼠脑组织中葡萄糖转运蛋白1(GLUT1),胰岛素受体底物-1(IRS-1)的表达,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测小鼠海马组织中乙酰胆碱(ACH),γ-氨基丁酸(GABA),谷氨酸(GLU)含量的变化。结果:与正常组比较,模型组小鼠跳台实验潜伏期显著缩短,错误次数显著增加(P0.01),Morris水迷宫实验定位航行逃避潜伏期明显延长(P0.05,P0.01),海马CA1区神经元出现缺失,DG区出现明显的老年斑沉积(P0.05),ACH,GLUT1含量均显著下降(P0.01),GABA,GLU水平及IRS-1的表达均显著升高(P0.01);与模型组比较,各给药组均可显著延长小鼠跳台实验潜伏期、减少跳台错误次数(P0.01),明显降低定位航行小鼠逃避潜伏期(P0.05,P0.01),可一定程度保护小鼠海马CA1区神经元,减少DG区老年斑沉积(P0.05,P0.01),明显增加小鼠脑组织中ACH,GLUT1表达(P0.05,P0.01),显著降低GABA,GLU水平及IRS-1的表达(P0.01)。结论:镇心省睡益智方水提液及其精油能够改善APP/PS1小鼠的学习记忆行为,保护神经元,增加脑组织GLUT1的表达,减少脑组织IRS-1的表达,减少老年斑沉积,升高ACH含量,降低GABA,GLU含量,可能是其防治阿尔茨海默症的机制。     

益智逐瘀颗粒治疗血管性痴呆48例

目的观察益智逐瘀颗粒治疗痰血瘀阻型血管性痴呆的临床疗效。方法将96例血管性痴呆患者随机分为两组,对照组48例给予西药单唾液酸四己糖神经节苷脂钠治疗,治疗组48例在西药单唾液酸四己糖神经节苷脂钠治疗的基础上加服益智逐瘀颗粒,10d为一个疗程,两组均连续治疗2个疗程后判定疗效。结果治疗组总有效率为91.67%,对照组总有效率为64.58%,两组疗效比较,差异有显著性(P0.05)。结论益智逐瘀颗粒治疗痰血瘀阻型血管性痴呆疗效显著。     

Box-Behnken响应面法优选海马益智方提取工艺

目的：利用Box-Behnken响应面法优选海马益智方提取工艺。方法：以远志酮Ⅲ和3,6'-二芥子酰基蔗糖含量及复方浸膏得率为评价指标,采用多指标综合评分法,以加水量、提取时间、提取次数作为考察因素,在单因素试验基础上运用Box-Behnken响应面法对海马益智方的提取工艺进行优化,并进行验证试验。结果：优选得出的最佳提取工艺为：加水量10倍,提取时间1.5 h,提取次数2次。验证试验中预测综合评分为98.66,而实际综合评分均值为97.34,与预测值间的差异较小。结论：优选的海马益智方提取工艺稳定可行、重现性良好,可为海马益智方的研究开发提供参考依据及技术支持。     

八珍益智合剂3种成分的含量测定及稳定性考察

目的 建立一测多评法同时测定八珍益智合剂中甘草苷、芹糖甘草苷和橙皮苷3种成分的含量，并对八珍益智合剂3种成分的稳定性进行考察。方法 采用HPLC-DAD法，以橙皮苷为参照物，测定其他2种成分的相对校正因子和相对保留时间，并计算各成分含量；以外标法为对照，比较一测多评法（single marker，QAMS）与外标法（external standard method，ESM）实测值的差异，探讨一测多评法的可行性。同时测定八珍益智合剂在高温、强光照射、加速试验和长期室温条件下的稳定性，为其贮藏条件和保质期提供数据。结果 经过方法学验证，3种成分在4.512~108.2，10.13~101.30，4.496~107.90 μg·mL^-1内线性关系良好（r>0.999）；平均加样回收率为95.9%~104.7%，RSD ≤ 3%；2种成分相对橙皮苷的相对校正因子分别为0.49和0.38，且在不同实验条件下相对校正因子重复性良好；含量测定QAMS计算结果与ESM实测值无明显差异。稳定性考察结果表明，在高温条件下长时间放置芹糖甘草苷和橙皮苷含量下降速度较快，甘草苷含量下降较为平缓，提示中药合剂在高温条件下不宜放置过长时间。结论 本研究所建方法准确可靠、重复性好，可用于八珍益智合剂的质量控制，本合剂应密封置阴凉处保存。     

益智膏治疗小儿智力低下34例临床观察

[目的]观察应用益智膏配合针刺改善肾精不足型智力低下患儿智能水平的临床疗效。[方法]将68例入组患儿按照随机数字表法分成治疗组和对照组,治疗组34例给予服用益智膏、针刺、康复训练,对照组34例给予针刺、康复训练;采用中国韦氏幼儿、儿童智力量表进行评分,应用尼莫地平法计算智商(IQ)分值提高率。[结果]益智膏配合针刺治疗肾精不足型智力低下有效,临床总体疗效优于对照组,两组比较具有统计学意义(P0.05)。[结论]益智膏配合针刺治疗肾精不足型智力低下临床疗效确切。     

海马补肾丸对小鼠学习记忆障碍的改善作用

目的考察海马补肾丸对小鼠学习记忆障碍的改善作用,并探讨其作用机制。方法小鼠随机分为对照组、模型组、吡拉西坦组、龟龄集组和海马补肾丸组。采用腹腔注射东莨菪碱制备小鼠记忆获得性障碍模型,计算学习正确率,测定蛋白含量和乙酰胆碱酯酶活力。采用腹腔注射亚硝酸钠制备小鼠记忆巩固性障碍模型,计算训练、测定学习正确率,测定蛋白含量、去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)以及丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量。结果海马补肾丸2.20 g/kg组能显著增加小鼠学习记忆的正确率(P0.05),显著降低乙酰胆碱酯酶活力(P0.01)。测定时,与模型组比较,海马补肾丸1.10、2.20 g/kg组能显著增加小鼠学习记忆正确率(P0.05),能不同程度增加小鼠大脑SOD含量,降低MDA含量(P0.05、0.01)。结论海马补肾丸能明显改善小鼠的记忆获得、记忆巩固障碍,推测其作用机制主要是通过降低乙酰胆碱酯酶活性,增加脑内乙酰胆碱的含量,改善记忆获得能力;通过抗脑组织的氧化损伤,增加大脑SOD含量,降低MDA含量,改善记忆巩固能力。     

补肾益智方治疗阿尔茨海默病斑马鱼模型的作用及机制研究

目的 通过阿尔茨海默病斑马鱼模型,探讨补肾益智方的作用机制。方法 选取6月龄斑马鱼,随机分成5组,分为空白对照组（n=12）、模型组（n=10）、阳性药组（n=10）、补肾益智方高剂量组（n=11）和低剂量组（n=12）。除空白对照组,其余各组均用AlCl₃·6H₂O配制成浓度为100 μg/L的溶液持续浸泡斑马鱼30 d,每天更换一半的染毒培养液。染毒结束后利用T迷宫实验剔除染毒失败的斑马鱼。造模结束后,分别给予阳性药组多奈哌齐20 μg/mL,高、低剂量组补肾益智方30、10 μg/mL浸泡14 d。给药结束后,通过T迷宫实验检测斑马鱼学习记忆能力;免疫组化染色观察神经元变化;qPCR检测相关基因的表达;Western blot检测相关蛋白的表达。结果 ①在T迷宫测试第4天,模型组潜伏时间为（198.00±45.78）s,补肾益智方低剂量组为（12.75±2.29）s,补肾益智方高剂量组为（7.27±0.90）s,补肾益智方治疗组斑马鱼的潜伏时间明显低于模型组,差异有统计学意义（P<0.05）;②补肾益智方治疗组斑马鱼的端脑神经元数量较模型组明显增多、排列变整齐,星型胶质细胞增多;③补肾益智方组斑马鱼脑ACHE活力显著降低（P<0.01）、ChAT活力显著增加（P<0.05）;④补肾益智方治疗组斑马鱼脑组织中appb、bace1表达显著降低（P<0.01）,sod、cat、nrf2基因表达显著增加（P<0.01）,keap1基因表达显著降低（P<0.01）;⑤补肾益智方治疗组斑马鱼脑组织蛋白表达情况与qPCR结果一致,APP、BACE1表达显著降低（P<0.01）,Nrf2表达显著增加（P<0.01）,Keap1表达显著降低（P<0.01）。结论 补肾益智方能有效改善AD斑马鱼的学习记忆能力,减少Aβ生成,减轻氧化应激。      

Clinical Experience in Treatment of Alzheimer''s Disease with Jiannao Yizhi Formula (健脑益智方) and Routine Western Medicine

Objective: To investigate the long-term therapeutic effects of the Chinese medicine Jiannao Yizhi Formula(健脑益智方, JYF) in the treatment of Alzheimer's disease(AD). Methods: Sixty mild-to-moderate AD participants were recruited and randomly allocated to the treatment(30 with JYF) and the control groups(30 with donepezil) for 6 months with the random numbers. The primary outcomes were scores of Alzheimer's Disease Rating Scale-Cognitive(ADAS-Cog) and Chinese Medicine Symptom Scale(CM-SS). The secondary outcomes were scores of Mini Mental State Examination(MMSE), Montreal Cognitive Assessment(MoCA), and Activities of Daily Living(ADL). Safety assessments were conducted at baseline and the 6 th month of treatment. Serum levels of acetylcholine(Ach), amyloid-β protein 42(Aβ_(42)), and the microtubule-associated protein tau(Tau) were also determined by enzyme-liked immunosorbent assay. Results: Fifty-one participants were included in the final analyses(JYF n=27; donepezil n=24). Compared with baseline, both JYF and donepezil increased the MoCA and MMSE scores and decreased the ADAS-Cog and CM-SS scores(P0.05 or P0.01). Both drugs increased the serum levels of Ach and decreased the serum levels of Aβ_(42) and Tau(all P0.05). There was no significant difference in these variables between the two groups, which showed that JYF was not inferior to donepezil. No obviously significant changes were observed in the ADL. No severe adverse events were observed in both groups. Conclusion: The effect and safety of JYF for the treatment of AD were not inferior to those of donepezil.     

基于网络药理学和分子对接技术研究八珍益智方治疗阿尔茨海默病的潜在作用机制

目的 利用网络药理学方法及分子对接技术,研究八珍益智方治疗阿尔茨海默病（Alzheimer's disease,AD）的潜在药效物质基础和作用机制,为其临床应用提供理论依据。方法 通过TCMSP、BATMAN-TCM、TCMID、中国知网（CNKI）和Pubmed数据库检索八珍益智方8味组方药材化学成分和作用靶点;通过GeneCards、OMIM数据库查询AD的相关靶点;利用R语言3.6.3得到药物和疾病的交集靶点;借助String数据库和Cytoscape 3.7.2软件构建PPI网络,筛选核心靶点;通过DAVID数据库进行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析;利用AutoDock tools 1.5.6、AutoDock vina 1.1.2进行分子对接。结果 八珍益智方共收集到200个化学成分和226个靶点,Cytoscape 3.7.2软件筛选出包括AKT1、MAPK3、IL-6、VEGFA、CASP3等37个核心靶点,槲皮素、山柰酚、柚皮苷、豆甾醇、7-甲氧基-2-甲基异黄酮等15个核心化合物。GO富集分析得到1 331个条目（P<0.05）,KEGG通路富集得到相关通路65条（P<0.05）。分子对接结果显示15个核心化合物和AKT1、MAPK3、IL-6、VEGFA、CASP3具有较好的亲和力。结论 八珍益智方治疗AD的通路主要涉及癌症的途径、MAPK信号通路、前列腺癌、神经活性配体-受体相互作用、钙信号通路等,研究结果为八珍益智方治疗AD作用机制的进一步阐明提供了指引。