银杏内酯B对动脉粥样硬化大鼠炎症细胞因子的影响

目的 探讨银杏内酯B对动脉粥样硬化（AS）大鼠血清炎症细胞因子的影响.方法 采用高脂饲料喂养和维生素D3腹腔注射的方法建立大鼠AS模型,分为正常组、模型组、阳性组（辛伐他汀5mg/kg）、银杏内酯B3个剂量组（8、4、2mg/kg）,每组10只.灌胃给药4周后,各组取主动脉,光镜下观察病理改变,进行病变分级评分;取血清,ELISA法测定TNF-α、IL-1和IL-6水平.结果 银杏内酯B能改善AS大鼠的主动脉病变,高剂量组与模型组比较差异有统计学意义（P＜0.05）.银杏内酯B各剂量可明显降低血清TNF-α和IL-6水平,与模型组比较差异均有统计学意义（P＜0.01）.银杏内酯B高、中剂量可降低血清IL-1水平,与模型组比较差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 银杏内酯B对大鼠AS具有一定的治疗作用,可能与抑制炎症因子的表达有关.     

银杏内酯B诱导骨髓间充质干细胞分化的神经样细胞的电生理及免疫学特征

目的 利用银杏内酯B(GB)诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)分化成熟,研究其分化的神经样细胞的电生理特征及免疫学特征.为临床治疗神经系统免疫性疾病提供最合适种子细胞.方法 应用倒置相差显微镜对GB诱导的细胞进行多个时间点观察其细胞形态学改变,并对诱导后细胞进行免疫荧光染色;应用膜片钳技术,采取全细胞记录方式,对由GB诱导的大鼠BMSC进行诱导前及诱导后多个时间点的电生理测定.结果 免疫荧光染色阳性细胞:CHAT:(34.8％,n=12);GFAP:(31.6％,n=12);NSE:(21.3％,n=12);膜电位随着时间的变化:未分化细胞的峰值电流(1.45 ±0.15PA/PF,n=10),诱导后的神经元样细胞(2.18 ±0.14 PA/PF,n=12)变化显著(P＜0.05).结论 大鼠BMSC经过GB诱导后免疫特性及膜电位均发生改变,显示诱导后细胞有神经干细胞的免疫学特点,可以作为一种调节神经免疫力及修复力的种子细胞.     

银杏内酯B抗缺血神经元凋亡的预适应作用

目的研究银杏内酯B(Ginkgolide B,GB)对缺血引起的神经元凋亡的影响,并从预适应角度探讨其可能的机制。方法原代培养的小鼠皮层神经元,经过短时缺血预适应(1%O2,无糖DMEM)或GB预处理(120μmol/L,24h)后,再进行严重缺血损伤,通过MTT比色法观察细胞的活性,Hoechst 33342荧光染色检测细胞的凋亡;Western-blot分析磷酸化糖原合成酶激酶-3β(phosphorylated glycogen synthase kinase-3β,p-GSK-3β)和活化的Caspase-3蛋白表达量的变化。结果神经元缺血后活性下降,凋亡比率增高;缺血预适应或银杏内酯B预处理可提高缺血神经元p-GSK-3β的表达,抑制Caspase-3的活化,提高缺血神经元的活性,降低凋亡比率。结论银杏内酯B对缺血诱导的神经元凋亡具有拮抗作用,其作用机制与缺血预适应相似,两者均能提高p-GSK-3β的表达,抑制Caspase-3的活化,银杏内酯B对神经元可发挥药理性预适应作用。     

银杏苦内酯B对重症急性胰腺炎大鼠胰腺组织G蛋白αi2亚单位mRNA表达的影响

目的观察重症急性胰腺炎(SAP)时G蛋折αi2亚单位Gαi2 mRNA在大鼠胰腺组织的表达变化及血小板活化因子(PAF)拮抗剂银杏苦内酯B(BN52021)的影响,从而探讨SAP发病过程中Gαi2与PAF信号转导途径及BN52021治疗机制的关系。方法雄性Wistar大鼠180只,随机分为阴性对照组(NC组),SAP模型组(SAP组)及BN52021治疗组(BN组),每组再分为6个时相点(1、2、3、6、12、24 h),每个时相点10只。观察各组大鼠胰腺组织病理学变化,采用全自动生化分析仪检测血浆淀粉酶,并以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)动态检测Gαi2 mRNA在各组大鼠胰腺组织的表达水平。结果各组大鼠胰腺组织均检测到了Gαi2 mRNA的表达信号。制模后12 h Gαi2 mRNA表达显著上调(t=-7．213,P=0．000),该上调持续到24 h以后(t=-8．597,P=0．000),BN52021治疗未改变这种上调趋势。结论Gαi2 mRNA在正常大鼠胰腺组织有稳定表达,Gαi2有可能参与了SAP的发病过程,但其与SAP时PAF信号转导通路及BN52021治疗SAP信号转导机制的关系尚不十分明确。     

银杏内酯B对神经干细胞分化的影响及其机制研究

目的观察银杏内酯B对体外培养的神经干细胞（NSCs）分化的影响。方法用含不同浓度银杏内酯B（20mg／L、40mg／L、60mg／L）的分化培养基培养NSCs 3d和7d，测量细胞突起长度和胞体面积，用免疫荧光检测神经丝蛋白-200（NF-200）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）及少突胶质细胞特异性蛋白（CC-1）、细胞因子信号抑制因子2（SOCS2）、DNA结合抑制因子2（Id2）的表达。结果银杏内酯B组细胞突起增长，胞体增大；NF阳性神经元样细胞百分率增加，GFAP阳性星形胶质样细胞百分率随银杏内酯B浓度增加而增加；SOCS2阳性细胞百分率（35．46％）较对照组（22．17％）明显增加（P〈0．01），银杏内酯B组Id2阳性细胞百分率（51．52％）较对照组（66．24％）明显减少（P〈0．01）。结论银杏内酯B可促进分化细胞成熟，促进NSCs向神经元分化；星形胶质细胞百分率的增高与银杏内酯B呈剂量依赖关系。     

银杏内酯B对胆固醇和载脂蛋白E4损伤海马神经元凋亡的保护作用

目的:探讨银杏内酯B对高胆固醇和apoE4致海马神经元凋亡的保护作用。方法:采用无血清培养基体外培养新生大鼠海马神经元,采用神经元特异性烯醇化酶免疫萤光进行鉴定。用160μg/mL银杏内酯B处理海马神经元16h,40μg/mL 25-OH-胆固醇和30μg/mL载脂蛋白E4继续处理24h。通过Hoechst试剂盒测定神经元的凋亡,实时定量RT-PCR测定bax和Bcl-2 mRNA的表达。结果:银杏内酯B抑制神经元凋亡,上调bcl-2 mRNA的表达,下调bax mRNA的表达。结论:银杏内酯B对高胆固醇和apoE4损伤海马神经元凋亡有保护作用,其机理可能与调节两种凋亡相关基因有关。     

银杏苦内酯B对重症急性胰腺炎大鼠血浆细胞因子的影响

目的:观察重症急性胰腺炎(SAP)大鼠血浆中TNF-α,血小板活化因子(PAF),IL-10, IL-12,sTNFR的水平变化及其银杏苦内酯B(BN52021)的影响.方法:实验选用Wistar♂大鼠45只,随机分成SAP模型组(SAP,n=15),BN52021治疗组(BN,n=15)和阴性对照组(NC,n=15)．前两组以50 g／L牛磺胆酸钠逆行注入主胰管制成SAP模型,NC组开腹后仅翻动十二指肠并触摸胰腺数次关腹．制模15 min后,SAP组经股静脉以5 mL／mg注射生理盐水;BN组以BN52021(5 mg／kg)代替生理盐水静注．制模后分别于1,6,12 h采血,应用ELISA技术测定血浆TNF-α,PAF,IL-10,IL-12和sTNFR水平．结果:SAP组,NC组和BN组大鼠血浆TNF-α和PAF水平相比,具有显著性差异,SAP组(746．2±374．1,82．5±35．4 ng／L)显著高于NC组(385．1±86．3．1．1±1．9 ng／L),BN组(503．7±177．9,39．9±29．9 ng／L)显著低于SAP组(P<0．05)．血浆sTNFR水平三组相比存在明显差异,SAP组(488．7±363．8 ng／L)显著高于NC组(50．0±21．0 ng／L),BN组(883．4±552．5 ng／L)显著高于SAP组(488．7±363．8 ng／L)(P<0．05)．血浆IL-12三组相比存在明显差异,SAP组(97．1±55．9 ng／L)显著高于NC组(20．4±19．4 ng／L),BN组在1 h时相点(133．5±33．4 ng／L)显著高于SAP组(55．9±14．7 ng／L)(P<0．05)．血浆IL-10三组相比不存在明显差异(P>0．05)．结论:SAP大鼠促炎细胞因子和抗炎细胞因子均显著升高．BN52021能降低血浆促炎因子含量,提高IL-12和细胞因子拮抗剂sTNFR含量．     

自微乳化释药系统对银杏内酯B在视网膜内药代动力学参数的影响

背景 银杏内酯B(GB)具有明确的神经保护和抗凋亡作用,可以有效拮抗视网膜内感光细胞的凋亡,达到治疗视网膜变性类疾病的目的,但GB的高疏水性和低生物利用度限制了其临床应用.自微乳化释药系统(SMEDDS)能有效提高难溶性药物的溶出度和生物利用度,因此可能提高GB在视网膜中的生物利用度. 目的研究自制GB-SMEDDS灌胃后在SD大鼠视网膜内的药代动力学及药时变化. 方法 采用随机数字表法将80只SD大鼠分为GB混悬液组和GB-SMEDDS组2个组,每组40只,分别给予40 mg/kg自制质量分数2.5％ GB-SMEDDS或GB混悬液(质量分数0.1％ DMSO溶解)灌胃,并于给药后15、30、45 min和1、2、4、8、12h分别处死5只大鼠,解剖显微镜下分离大鼠视网膜,制备大鼠视网膜上清液,经高效液相-电喷雾离子-质谱联用(HPLC-ESI-MS)法检测GB的质量浓度,并与标准曲线对比换算,药代动力学参数采用实用药物动力学程序3p87中的统计矩方法计算,计算出视网膜中的最大药物质量分数(Cmax,mg/g)、药物达峰时间(Tmax,h)、清除率(Ke/h)、吸收半衰期(t1/2)和药时曲线下面积[AUC0-∞,mg/(g·h)]. 结果 GB在1～ 32 mg/L时线性关系良好,线性回归方程为Y=0.0732X+0.056(r=0.992).GB-SMEDDS组和GB混悬液组大鼠灌胃后有着相似的药时曲线,但是除了给药后15 min视网膜中的药物质量分数两者一致外,其他各个时间点GB-SMEDDS组视网膜内药物质量分数均高于GB混悬液组.两组大鼠视网膜中Cmax分别为(15.83±1.84) mg/g和(2.65±0.10) mg/g,AUC0-∞分别为(15.30±0.11)mg/(g·h)和(6.42±0.19)mg/(g·h). 结论 HPLC-ESI-MS具有快速、准确、灵敏度高的特点,适合GB制剂在SD大鼠视网膜中药代动力学的研究.SMEDDS可以显著提高GB在视网膜中的含量,可能提高其生物利用度.     

银杏内酯B前体药物的抗血小板聚集活性研究

目的考察银杏内酯B前体药物(PGB)的抗血小板聚集作用。方法采用LC-MS/MS法测定PGB在体外和体内的降解情况,并以比浊法观察PGB体外、体内给药对PAF诱导兔血小板聚集的影响。结果 PGB在体外血浆中的降解反应为表观一级反应,体内外均能迅速水解出银杏内酯B(GB);在体外、体内均呈剂量依赖性抑制PAF诱导的兔血小板聚集,体外最大抑制率分别为8.67、20.01、50.60、73.01,体内最大抑制率分别为42.24、58.03,其作用强度接近于原药GB。结论 PGB通过分解出的GB拮抗PAF受体实现血小板聚集抑制作用,是一个具有良好前景的脑血管疾病治疗前体药物。