杜仲炮制工艺对其质量的影响及化学成分与药理研究进展

杜仲是一种传统中药材,中医常以生品和盐制品入药,入肝、肾经,起到补肝肾,强筋骨的作用。笔者在文献考证的基础上,论述了杜仲的炮制方法、工艺对质量的影响,以及所含的化学成分与药理作用的最新研究进展,为杜仲饮片的规范化、标准化研究奠定基础。     

杜仲叶提取物所含四种主要成分体外抗非酒精性脂肪肝活性研究＊

目的 研究杜仲叶所含4种主要成分体外抗非酒精性脂肪肝（Non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）活性。方法 首先用UPLC-MS检测杜仲叶提取物中绿原酸、杜仲苷、京尼平苷酸、车叶草苷含量；以HepG2细胞为载体，建立NAFLD细胞模型，设正常组、模型组、绿原酸组、杜仲苷组、京尼平苷酸组、车叶草苷组；油红O染色检测细胞内脂质；微量法检测细胞内甘油三酯（Triglyceride，TG）、胆固醇（Total cholesterol，TC）、高密度脂蛋白（High-density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白（Low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）含量；微量法检测细胞培养液中谷草转氨酶（Aspartate aminotransferase，AST）、谷丙转氨酶（Alanine aminotransferase，ALT）含量。结果 杜仲叶提取物主要含绿原酸、杜仲苷、京尼平苷酸和车叶草苷，其中京尼平苷酸的含量最高；杜仲叶提取物所含四种主要成分可明显降低细胞内TG、TC、LDL-C含量，其中京尼平苷酸效果最为显著；绿原酸、杜仲苷，京尼平苷酸可显著降低细胞培养液中AST、ALT含量，其中京尼平苷酸效果最好。结论 杜仲叶提取物所含四种主要成分可不同程度降低HepG2细胞内脂质含量，其中京尼平苷酸效果较好。     

杜仲醇提取物可促进根尖周炎模型大鼠骨组织的愈合

文题释义：杜仲：杜仲是中国传统的中药药材，其具有增加机体免疫性、强身健骨的疗效，研究表明杜仲可以促进成骨细胞的增殖并且可以促进骨组织的愈合。近年来对于杜仲的研究主要集中于其有效成分的提取及分析。 杜仲醇：是杜仲的主要有效成分之一，可以增强关节炎大鼠骨组织的强度，并且具有降血压以及促进伤口愈合的能力。 背景：目前关于杜仲的研究主要集中于其治疗骨关节炎能增强骨组织的愈合能力，但是关于杜仲对根尖周炎骨破坏的修复作用尚未见报道。 目的：探讨杜仲醇提取物对根尖周炎大鼠组织蛋白酶K的影响。 方法：选取24只SD大鼠随机分为根尖周炎组20只及对照组4只，根尖周炎组于右侧下颌第一磨牙开髓后建立根尖周炎模型，对照组不做任何处理。饲养4周后，取根尖周炎组及对照组各4只拍摄MICRO-CT，计算根尖周炎骨破坏量，确认大鼠根尖周炎动物模型构建成功。饲养第5周，将剩余16只根尖周炎大鼠随机分为杜仲醇提取物组及生理盐水组，每组8只，每天灌胃杜仲醇提取物5 mL/kg或等量生理盐水。灌胃4周后，每组取4只大鼠拍摄MICRO-CT，分析杜仲醇提取物对根尖周骨组织的修复能力，另外取4只大鼠采用免疫组化染色观察右下颌第一磨牙牙槽骨组织蛋白酶K的表达。 结果与结论：①MICRO-CT结果显示，对照组骨吸收体积为(0.223±0.009) mm³，根尖周炎组骨吸收体积为(0.945±0.037) mm³，两组骨吸收量比较差异有显著性意义(P=0.00)，说明大鼠根尖周炎模型构建成功；②灌胃4周后，MICRO-CT结果显示杜仲醇提取物组骨吸收体积较灌胃前减小，差异有显著性意义(P < 0.05)；③灌胃4周后，免疫组化结果显示杜仲醇提取物根尖周炎骨破坏标志因子组织蛋白酶K的表达较灌胃前降低，差异有显著性意义(P < 0.05)；④结果表明，杜仲醇提取物可以抑制骨破坏标志因子组织蛋白酶K的表达，并且可以促进大鼠根尖周炎骨组织的愈合。 ORCID: 0000-0001-5450-7016(吴大雷) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程     

杜仲TIFY转录因子鉴定与表达分析

目的 从全基因组水平对杜仲（Eucommia ulmoides）TIFY基因家族进行鉴定与表达分析,以期为EuTIFYs基因功能深入研究奠定基础。方法 以杜仲基因组数据库为基础,通过美国国立生物技术信息中心（NCBI）,MEME,PlantCare,白质分析专家系统（ExPASy）及TBtools等生物信息学分析软件,对杜仲TIFY基因家族进行鉴定,系统分析该基因家族的理化性质、系统进化、基因结构、启动子顺式作用元件及其在叶片发育及杜仲胶形成中的表达模式。结果 该研究从杜仲基因组中共鉴定到14个EuTIFYs（EuTIFY1~EuTIFY14）,氨基酸数目介于102~357,理论等电点分布在4.99~10.06,相对分子质量区域为10.8~39.14 kDa,亚细胞定位预测在细胞核中,均为亲水性蛋白,14个EuTIFYs分布在13条染色体上。系统进化分为TIFY,JAZ,ZML和PPD 4个亚家族,分别包含3个,4个,5个和2个EuTIFYs蛋白。EuTIFYs启动子区域含有多种光周期及非生物胁迫响应元件,参与植物杜仲生长发育和非生物胁迫。表达模式分析显示,EuTIFYs在杜仲叶片不同发育时期存在表达差异,大部分基因在叶片发育的早期阶段表达量较高,正调控杜仲胶的形成,EuTIFYs蛋白间存在多种互作关系。结论 该研究从杜仲全基因组水平鉴定到14个EuTIFYs,对其结构特点和表达模式进行全面的生物信息学分析,为进一步研究杜仲TIFYs基因功能提供参考。     

盐制对杜仲治疗去卵巢大鼠骨质疏松症影响的研究

目的：研究杜仲及其盐制品对去卵巢大鼠骨质疏松症的治疗作用,并探讨盐制对其治疗作用的影响。方法40只SD雌性大鼠分为伪手术组、模型对照组、杜仲生品治疗组和杜仲盐制品治疗组,除假手术组施行假手术外,其余均行手术彻底摘除卵巢,术后4周开始杜仲生品及盐制品水提液灌胃给药（4．0 g／kg?d）,实验过程称体质量,连续给药12周后,颈动脉取血,测定血钙（S－Ca）、血磷（S－P）含量,ELISA试剂盒双抗体夹心法测定血清碱性磷酸酶（ALP）、骨钙素（OCN）、雌二醇（E2）含量;动物处死后剥取完整子宫称重,采用HE染色法进行子宫病理学检查,剥离双侧股骨,双能X射线衍射法测定大鼠股骨骨密度。 HE染色法观察股骨骨小梁形态和成骨细胞数量,micro－CT扫描观察股骨骨小梁微体系结构。结果杜仲生品及盐制品能有效抑制去卵巢所致的大鼠体重增加,升高血清钙、雌二醇的含量,降低血磷、碱性磷酸酶和骨钙素的含量。增加大鼠股骨骨密度,改善股骨骨小梁微体系结构,增加股骨骨小梁成骨细胞数量,且长期用药对子宫无明显刺激作用。结论杜仲生品及盐制品对于大鼠去卵巢所引起的骨质疏松症有良好治疗作用,且盐制品效果优于生品。     

地黄杜仲汤联合羟基脲对老年慢性粒细胞白血病患者的临床疗效及对预后的影响

目的:探讨地黄杜仲汤联合羟基脲对老年慢性粒细胞白血病患者的临床疗效以及对预后产生的影响。方法:选取2012年3月至2015年7月在沈阳军区总医院接受治疗的老年慢性粒细胞白血病患者70例作为本次研究对象,采用随机数表法将他们分为治疗组和对照组各35例,对照组患者给予地黄杜仲汤治疗,治疗组患者给予地黄杜仲汤联合羟基脲治疗,比较2组患者治疗后的临床疗效、生存率以及不良反应发生情况。结果:治疗后,治疗组患者的总缓解率为94.28%高于对照组68.57%,2组比较差异有统计学意义(P0.05);治疗组患者治疗后的≥6年生存率为80.00%,对照组为34.28%,治疗组高于对照组,2组比较差异有统计学意义(P0.05);治疗组患者治疗后出现恶心呕吐、白细胞低、肾功能异常以及肝功能异常等不良反应的发生率明显低于对照组患者,2组患者进行比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论:地黄杜仲汤联合羟基脲治疗老年慢性粒细胞白血病临床效果显著,降低不良反应,延长患者的生存期。     

杜仲超微粉体理化特性及体外溶出性能研究

目的研究杜仲Eucommia ulmoides不同粒径粉体理化特性及体外溶出行为的差异,为杜仲超微粉体的粒径控制与应用提供实验依据。方法采用超微粉碎机制备杜仲不同粒径的超微粉体,激光粒度仪测定粉体的粒径,显微镜观察显微结构,通过破壁率来衡量超微粉碎的破壁效果;利用HPLC法测定不同粒径粉体有效成分提取效率及在不同溶出介质的溶出度。结果杜仲超微粉体在显微结构、破壁率、休止角及堆密度等方面与普通粉体差异显著;超微粉体的提取率以及在水、人工胃液、人工肠液中有效成分的溶出度均高于普通粉体。结论适度的微粉化能提高杜仲细胞破壁率,促进杜仲有效成分的溶出,其溶出度还受到溶出介质的影响,超微粉碎技术应用于杜仲具有可行性。     

Effects of Eucommia ulmoides Extract on Longitudinal Bone Growth Rate in Adolescent Female Rats

Eucommia ulmoides is one of the popular tonic herbs for the treatment of low back pain and bone fracture and is used in Korean medicine to reinforce muscles and bones. This study was performed to investigate the effects of E. ulmoides extract on longitudinal bone growth rate, growth plate height, and the expressions of bone morphogenetic protein 2 (BMP‐2) and insulin‐like growth factor 1 (IGF‐1) in adolescent female rats. In two groups, we administered a twice‐daily dosage of E. ulmoides extract (at 30 and 100 mg/kg, respectively) per os over 4 days, and in a control group, we administered vehicle only under the same conditions. Longitudinal bone growth rate in newly synthesized bone was observed using tetracycline labeling. Chondrocyte proliferation in the growth plate was observed using cresyl violet dye. In addition, we analyzed the expressions of BMP‐2 and IGF‐1 using immunohistochemistry. Eucommia ulmoides extract significantly increased longitudinal bone growth rate and growth plate height in adolescent female rats. In the immunohistochemical study, E. ulmoides markedly increased BMP‐2 and IGF‐1 expressions in the proliferative and hypertrophic zones. In conclusion, E. ulmoides increased longitudinal bone growth rate by promoting chondrogenesis in the growth plate and the levels of BMP‐2 and IGF‐1. Eucommia ulmoides could be helpful for increasing bone growth in children who have growth retardation. Copyright © 2014 John Wiley & Sons, Ltd.     

一测多评法同时测定不同采收期杜仲叶中4种黄酮

目的建立一测多评法同时测定不同采收期杜仲叶中槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯糖-(1→2)-β-D-葡萄糖苷、芦丁、异槲皮苷和紫云英苷的含有量。方法杜仲叶50%甲醇提取物的分析采用Thermo BDS HYPERSIL C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相乙腈-0.1%磷酸溶液,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长360 nm。以槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯糖-(1→2)-β-D-葡萄糖苷为内标,计算芦丁、异槲皮苷、紫云英苷的相对校正因子,计算其他3种成分的相对校正因子,再测定其含有量。结果槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯糖-(1→2)-β-D-葡萄糖苷、芦丁、异槲皮苷、紫云英苷分别在5.37~161.00(r=0.999 9)、0.43~12.84(r=0.999 9)、1.58~47.33(r=0.999 8)、0.42~12.65(r=0.999 7)μg/mL范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为97.27%、96.10%、95.30%、96.72%,RSD分别为1.90%、1.12%、1.07%、1.37%。一测多评法所得结果接近于外标法。结论该方法准确稳定,重复性好,可用于杜仲叶的质量控制。     

Potential role of the compound Eucommia bone tonic granules in patients with osteoarthritis and osteonecrosis: A retrospective study

BACKGROUND Osteoarthritis is a major source of pain,disability,and socioeconomic cost worldwide.Osteonecrosis is a disabling disorder that frequently occurs in the younger population aged from 20-50 years.The compound Eucommia bone tonic granules,a traditional Chinese medicine,can alleviate the damage of osteoarthritis and osteonecrosis.AIM To investigate the potential role of the compound Eucommia bone tonic granules(Eucommia)in the treatment of patients with osteoarthritis and osteonecrosis.METHODS One-hundred forty osteoarthritis and osteonecrosis cases admitted to our hospital from January 2013 to December 2017 were selected.Patients were divided into two groups:Eucommia-meloxicam group and meloxicam group.Clinical efficacy and the Western Ontario and McMaster Universities Arthritis Index(WOMAC)score were evaluated according to the evaluation criteria of orthopedic diseases.The levels of bone-GLA protein,interleukin-17,recombinant human S100 calcium binding protein A12,sphingosine 1-phosphate,cystatin C,creatinine,and hemoglobin in peripheral blood were determined.RESULTS The total effective rate in the two osteoarthritis groups was not different,but the total effective rate in the two osteonecrosis groups was significantly different.The overall efficacy of Eucommia-meloxicam group was superior to that of the meloxicam group.WOMAC showed that pain,stiffness,and dysfunction in the two groups of osteoarthritis and osteonecrosis before and after treatment were significantly different.The concentration of recombinant human S100 calcium binding protein A12,sphingosine 1-phosphate,cystatin C,creatinine,and hemoglobin before and after treatment in the Eucommia-meloxicam group and meloxicam group of osteoarthritis and osteonecrosis were significantly different,and the two treatment groups were significantly different from each other for osteoarthritis.CONCLUSION Our findings indicate that Eucommia can effectively enhance the curative effect of meloxicam,and the combination of Eucommia and meloxicam is superior to meloxicam alone.