薯蓣皂苷片对类风湿性关节炎大鼠血清OPG/RANKL水平表达的干预作用

目的观察薯蓣皂苷片对类风湿性关节炎模型大鼠血清骨保护素(OPG)、核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)表达水平的影响。方法 SD大鼠,随机分为6组,每组10只,其中选取10只作为正常组,其余大鼠采用弗氏完全佐剂复制类风湿性关节炎动物模型,并将造模成功的类风湿性关节炎大鼠随机分为模型组、阳性组(甲氨蝶呤组,3.8mg·kg~(-1))、薯蓣皂苷片高、中、低剂量组(10 mg·mL~(-1)、20 mg·mL~(-1)、30mg·mL~(-1)),连续灌胃给药治疗24 d后处死,采用ELISA法检测血清OPG、RANKL水平。结果薯蓣皂苷片各剂量组大鼠血清OPG、RANKL水平分别为(95.27±4.24)、(76.44±4.09)、(69.26±5.63)pmol·L~(-1)和(96.07±4.94)、(85.41±3.75)、(67.53±2.23)pmol·L~(-1),与模型组((53.92±2.83)pmol·L~(-1)和(116.18±3.02)pmol·L~(-1))相比均有显著性差异(P0.05);OPG/RANKL比值显著高于模型组。结论薯蓣皂苷片可能通过调整OPG/RANKL动态平衡而对破骨细胞功能产生影响,从而防止骨破坏。     

薯蓣皂苷对培养乳鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤的保护作用

目的研究薯蓣皂苷对培养乳鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤的保护作用并探讨其作用机制。方法采用体外培养乳鼠心肌细胞，建立缺氧／复氧损伤模型，以薯蓣皂苷进行干预。心肌细胞随机分为5组：空白对照组（C组）；缺氧／复氧组（A／R组）；薯蓣皂苷（Dioscin）低、中、高剂量干预组（Dioscin＋A／R组）。分别观察各组心肌细胞搏动频率；MTr法测细胞存活率；用Rhl23荧光探针标记线粒体，检测荧光强度以反映线粒体膜电位（△ψm）变化；Fluo-3负载心肌细胞，激光扫描共聚焦显微镜观察细胞内钙离子浓度变化。结果薯蓣皂苷干预组心肌细胞搏动频率、细胞存活率、△ψm与A／R组比较明显升高；细胞内平均钙离子荧光强度显著低于A／R组。结论从细胞水平初步证实薯蓣皂苷预处理心肌细胞对A／R损伤有一定保护作用，保护机制可能涉及对线粒体膜保护和防止细胞内钙超载等。     

穿山龙超声波醇提工艺研究

目的：研究穿山龙超声波醇提最佳提取工艺。方法采用超声波醇提工艺提取穿山龙中的有效成分,用高效液相色谱（ HPLC）测定薯蓣皂苷含量,以薯蓣皂苷含量为考察指标,采用L9（3^4）正交试验法考察提取因素对有效物质含量的影响,考察因素为提取溶剂乙醇的浓度、提取温度、提取的时间,从中优选出穿山龙超声波醇提最佳提取工艺条件。结果最佳的提取工艺用80％的乙醇提取2次,每次提取时间为30min,提取温度为70℃。提取的薯蓣皂苷平均含量1．89mg· g－1,RDS为3．592％,结论该提取工艺稳定、可靠。     

基于网络效应的薯蓣皂苷类成分调控糖代谢作用机制研究

目的:基于网络药理学方探讨薯蓣皂苷类成分调控糖代谢的潜在作用机制。方法:利用文献挖掘及数据库检索获得薯蓣皂苷类成分调控糖代谢的活性成分、作用靶点及与糖代谢相关的疾病靶点,利用STRING、Cytoscape3.5.1中的BiNGO、MCODE及CluGO插件对潜在靶点分别进行GO生物过程、聚类模块及KEGG信号通路富集分析,构建薯蓣皂苷类“成分-靶点-通路-疾病”网络。结果:本研究筛选得到11种薯蓣皂苷类活性成分,协同作用于AKT1、STAT3、VEGFA等22个关键靶点,主要参与蛋白激酶级联调控、免疫反应、白细胞趋化性调控等7类生物过程及HIF-1信号通路、糖尿病并发症的AGE-RAGE信号通路、长寿信号通路、脂肪细胞脂解调控、肾素-血管紧张素系统等25条信号通路综合调控糖代谢。结论:本研究初步揭示了薯蓣皂苷类成分的潜在活性成分及其可能的降糖机制,薯蓣皂苷类成分调控糖代谢作用是多靶点、多层次,多途径的,并且可以推测HIF-1信号通路可能是其发挥作用最为重要的信号通路,为薯蓣皂苷类成分进一步的开发和临床应用提供了理论依据。     

薯蓣皂苷对人结肠癌细胞凋亡的作用及机制研究

目的:探究薯蓣皂苷（Dioscin）诱导人结肠癌HCT-116细胞、RKO细胞凋亡的作用及机制。方法:通过将体外培养的HCT-116细胞和RKO细胞分为对照组和不同浓度的药物组,采用CCK-8实验分析Dioscin对细胞增殖的抑制作用,可见分光光度法检测细胞LDH活性的变化;借助DNA含量检测法、Annexin V-FITC/PI双染法和流式细胞术检测细胞凋亡情况;DCFH-DA荧光探针法检测细胞活性氧簇（ROS）含量的变化;采用荧光探针法和可见分光光度法分别检测细胞超氧化物含量及细胞超氧化物歧化酶（SOD）活性的变化,Western 印迹法检测凋亡相关蛋白的表达情况。结果: 在24 h、48 h处理时间下,与对照组相比,HCT-116细胞Dioscin组（2、4、6、8、10 μmol/L）、RKO细胞Dioscin组（5、10、15、20、25 μmol/L）都明显抑制了结肠癌细胞的增殖活性（均P＜0.05）,且HCT-116、RKO细胞经Dioscin处理后,细胞膜破坏,细胞LDH释放量较对照组增多（P<0.05,P<0.01）;与对照组相比,Dioscin作用HCT-116、RKO细胞后,DNA含量暴露增多（P＜0.05,P＜0.001）,细胞凋亡率上调（P＜0.001,P＜0.01）,ROS水平升高（P<0.05,P<0.001）,超氧化物含量增多（均P<0.001）,SOD表达降低（P＜0.05,P＜0.001）;Western 印迹结果表明,与对照组相比,Dioscin可以抑制HCT-116、RKO细胞蛋白p-Akt（P<0.01,P<0.001）、Nrf2（均P<0.001）、Bcl-2（均P<0.001）的表达,促进蛋白cleaved Caspase-9（P<0.001,P<0.01）的表达。结论:薯蓣皂苷可能通过PI3K/Akt/Nrf2信号通路激活氧化应激反应,从而抑制结肠癌细胞生长,促进其凋亡。     

穿龙薯蓣总皂苷中甾体皂苷的分离与鉴定

目的 研究穿龙薯蓣总皂苷中水溶性甾体皂苷，寻找新的活性化合物。方法 用硅胶柱色谱、薄层色谱及高效液相色谱等进行分离，通过酸水解、理化常数和波谱学分析（IR，NMR，MS，HMQC，HMBC）鉴定化合物结构。结果 从穿龙薯蓣总皂苷中分得2个甾体皂苷（1个水难溶性皂苷和1个水溶性皂苷），其化学结构分别鉴定为薯蓣皂苷元－3－O－{α-L-鼠李糖（1→2）－[β-D-葡萄糖（1→3）]}-β－D－葡萄糖皂苷（I），薯蓣皂苷元－3－O－[α－L－鼠李糖（1→3）－α-L-鼠李糖（1→4）－α－L－鼠李糖（1→4）]-β－D－葡萄糖皂苷（Ⅱ）。结论 Ⅱ为首次从穿龙薯蓣中分离得到的新化合物，命名为穿龙薯蓣皂苷Dc。     

薯蓣皂苷对K562细胞的细胞毒作用及对DNA影响的研究

目的研究薯蓣皂苷的细胞毒作用和对遗传物质DNA损伤效应。方法利用MTT法测定薯蓣皂苷对白血病细胞株(K562细胞)的体外抑制作用,用彗星实验法检测薯蓣皂苷元对K562细胞的DNA损伤。结果薯蓣皂苷对K562细胞的生长有抑制作用,有量效关系。薯蓣皂苷可以导致K562细胞DNA发生断裂,随薯蓣皂苷的浓度梯度增大(1～500μg/ml),细胞的拖尾率、DNA尾部百分率、尾长、尾矩和Olive尾矩增加。结论薯蓣皂苷元对K562细胞的生长具有抑制作用,并会引起DNA断裂,可能会引起细胞DNA损伤,或者诱导细胞凋亡。     

薯蓣素抑制口腔鳞状细胞癌的机制研究

目的 研究薯蓣素对人口腔鳞状细胞癌的抑制作用。方法 薯蓣素处理TSCCa 和TCa8113 细胞,MTS 和软琼脂集落实验检测薯蓣素对口腔鳞状细胞癌增殖的影响。蛋白质免疫印迹检测薯蓣素对口腔鳞状细胞癌 糖酵解调控蛋白及凋亡调控分子表达的影响。检测过表达己糖激酶HK2 对薯蓣素诱导细胞凋亡的作用。结果 薯蓣素抑制TSCCa 和TCa8113 细胞的增殖具有剂量和时间依赖性（P <0.05）。薯蓣素抑制口腔鳞状细胞癌 糖酵解（P <0.05）,并下调HK2 和葡萄糖转运蛋白Glut1 的表达。薯蓣素能诱导口腔鳞状细胞癌Caspase-3 和 PARP 剪切体表达上调,过表达HK2 抑制薯蓣素诱导的细胞凋亡。结论 薯蓣素对口腔鳞状细胞癌的抑制作用 与其下调HK2 和对糖酵解的抑制有关。     

薯蓣属植物化学成分的研究——Ⅹ.蜀葵叶薯蓣中甾体皂甙和皂甙元的分离和鉴定

蜀葵叶薯蓣(Dioscorea althaeoides Kunth)为我国特有薯蓣品种,主产于四川、云南等省。根茎含薯蓣皂甙元。我们在系统研究国产薯蓣属植物化学成分的工作中,对蜀葵叶薯蓣中的甾体皂甙和皂甙元进行分离和鉴定。     

薯蓣皂苷对缺氧/复氧心肌细胞损伤的抗氧化作用研究

目的评价薯蓣皂苷对心肌细胞的抗氧化保护作用。方法对培养的乳鼠心肌细胞造成缺氧/复氧损伤模型,比较正常对照组、缺氧/复氧损伤组、以及薯蓣皂苷各组(10ml/L、30ml/L、100ml/L)培养液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)含量。结果缺氧/复氧损伤组SOD活性明显降低,MDA和NO含量较正常显著升高;而薯蓣皂苷中、高剂量组上述指标都有不同程度的改善。结论薯蓣皂苷对缺氧/复氧造成的心肌细胞损伤具有保护作用,并呈现剂量依赖关系,作用机制与增强细胞抗氧化作用、减轻自由基和脂质过氧化物导致的细胞膜损伤有关。