金银花分子生物学研究进展

分子生物学(molecular biology)是从分子水平阐明生命现象和本质的科学,其发展为传统生药学的研究提供了新的生物技术和方法。金银花作为常用大宗药材之一,国内外学者在深入研究传统方法的基础上,采用分子生物学手段对其展开真伪鉴别、品质评价和控制等方面的相关研究,并取得了一定成果。该文主要综述了近年来分子生物学技术方法在金银花鉴别、有效成分生物合成的分子机制以及胁迫条件下次生代谢产物积累的分子机制研究,并针对基于杂交技术的标记(RFLP)、基于PCR的分子标记(RAPD,AFLP,SSR,ISSR)和基于DNA序列分析的SNP及DNA条形码对金银花的多样性识别、诊断、鉴定等方面进行了详细的总结,同时提出可以采用多组学技术,构建系统生物学技术和平台,建立次生代谢产物生物合成的相关模型,从而更好地研究金银花活性成分生物合成的分子机制以及药用植物在环境胁迫下的相关代谢产物的合成和积累等生命活动规律并进行调控,为进一步推动金银花现代化及其他中药资源的开发利用提供支撑与参考。     

丁香郁金配伍的药理研究

丁香郁金配伍属中药配伍禁忌“十九畏”之一，本文就二者单独使用和配伍后的抗炎、镇痛、止泻、抗溃疡等指标进行了动物药效学试验。二药配伍后镇痛、抗炎及止泻作用有下降趋势；抗溃疡作用不受影响；对试验动物胸腺指数和脾脏指数无明显影响。实验结果，二者配伍似属“相恶”。     

葛花、枳椇子及其配伍对小鼠急性酒精性胃黏膜损伤的保护作用及机制

目的 探讨葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性胃黏膜损伤的改善作用,为进一步开展葛花、枳椇子及其配伍防治酒精致多脏器损伤奠定基础。方法 采用多次灌胃给予56%红星二锅头白酒（15 mL·kg^-1）建立小鼠急性酒精性胃黏膜损伤模型,将120只ICR雄性小鼠随机分为空白组、模型组、奥美拉唑组（0.026 g·kg^-1）、葛花-枳椇子（配伍）高、中、低剂量组（29.2、14.6、7.3 g·kg^-1）、葛花组（19.5 g·kg^-1）、枳椇子组（19.5 g·kg^-1）共8个组,每组15只,动物适应性喂养1周后,按10 mL·kg^-1预给相应药物3 d,从第4天开始,给药1 h后按15 mL·kg^-1灌胃二锅头白酒,空白组给予相同体积去离子水,记录小鼠醉酒和醒酒时间,连续给药给酒3 d,末次给药1 h后摘眼球处死;气相色谱仪测定各组小鼠血清中乙醇体积分数,紫外-可见分光光度计检测各组小鼠胃黏膜中乙醇脱氢酶（ADH）活性;苏木素-伊红（HE）染色观察胃黏膜病理变化;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组小鼠血清中炎症因子含量;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测核转录因子-κB（NF-κB）p65和NF-κB抑制蛋白α（IκBα）mRNA表达。结果 与正常组比较,模型组血清中白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量升高（P<0.05）,胃黏膜组织NF-κB p65 mRNA表达升高（P<0.01）,IκBα mRNA表达降低（P<0.01）;与模型组比较,奥美拉唑组、配伍高、中剂量组、葛花组醉酒时间延长（P<0.05）,配伍高、中剂量组醒酒时间缩短（P<0.05）,配伍高剂量组血清中乙醇体积分数降低（P<0.05）,奥美拉唑组、配伍高、中剂量组胃黏膜中ADH活性升高（P<0.05）,配伍各剂量组、葛花组肉眼损伤评分降低（P<0.05）,奥美拉唑组、配伍各剂量组、葛花组病理损伤评分降低（P<0.01）,各给药组血清中IL-6表达降低（P<0.05）,奥美拉唑组、配伍各剂量组、枳椇子组血清中IL-1β表达降低（P<0.05）,配伍高、中剂量组血清中TNF-α表达降低（P<0.05）,各给药组胃黏膜组织NF-κB p65 mRNA表达降低（P<0.05）,奥美拉唑组、配伍各剂量组胃黏膜组织IκBα mRNA表达增加（P<0.05）;与高剂量组比较,配伍低剂量组与枳椇子组醉酒时间缩短（P<0.01）,葛花、枳椇子组醒酒时间延长（P<0.01）,配伍中、低剂量组、葛花组、枳椇子组血清中乙醇体积分数升高（P<0.05）,配伍中、低剂量组、枳椇子组肉眼损伤积分增加（P<0.05）,配伍中、低剂量组、葛花组、枳椇子组病理损伤积分增加（P<0.01）,配伍低剂量组、葛花组、枳椇子组血清中IL-1β含量升高（P<0.01）,葛花组与枳椇子组胃黏膜组织IκBα mRNA表达量降低（P<0.05）;与配伍中剂量组比较,枳椇子组醉酒时间缩短（P<0.05）,葛花组醒酒时间延长（P<0.05）,葛花组、枳椇子组病理损伤积分增加（P<0.01）,配伍低剂量组、葛花组、枳椇子组血清中IL-1β含量升高（P<0.05）;与配伍低剂量组比较,枳椇子组病理损伤积分增加（P<0.05）。结论 葛花、枳椇子及其配伍能起到对小鼠急性酒精性胃黏膜损伤的防治作用,可能与抑制胃黏膜NF-κB信号通路的表达有关,且配伍高剂量组药效最佳。     

不同产地、不同物候期金银花中绿原酸的动态变化研究

 目的探讨金银花中绿原酸随产地和物候期的变化规律。方法用高效液相色谱法对不同产地和物候期样品中绿原酸含量进行了系统分析。结果绿原酸含量随产地和物候期的变化差异显著。结论绿原酸的含量变化呈现一定的规律性，为道地药材的品质评价研究提供了可靠的依据。     

醒脑酊质量控制方法的研究

目的 :建立醒脑酊的质量控制方法。方法 :采用薄层色谱法对醒脑酊中的薄荷脑、丁香、冰片进行定性鉴别 ;并采用气相色谱法对该药中的薄荷脑进行含量测定。气相色谱条件 :以萘为内标物 ,填充玻璃柱 (2.1mm× 3.2m ,Shimadzu 7 G ,) ,载气N₂ ,流速 50mL·min^-1 ,柱温 145℃ ;进样口及检测器温度 180℃ ,不分流方式进样 ,进样量3μL。 结果 :薄层色谱图斑点清晰 ,阴性对照无干扰 ;气相色谱法精密度、重现性良好 ,平均加样回收率为 98.4% ,RSD=0.9%。结论 :本方法快速简便 ,结果准确 ,可用于控制醒脑酊的质量。     

从金银花中提取绿原酸生产工艺的改进

目的：对金银花的提取工艺进行改进，以提高得率及降低溶剂消耗量。方法：首先用少量乙醇水溶液润湿金银花，然后加沸腾热水搅拌提取。结果：绿原酸得率为7．89％，浸膏中绿原酸含量为16．7％，均高于传统醇提及水提，但乙醇用量仅为醇提的6％。结论：新工艺对绿原酸的提取具有较大的应用价值。     

正交试验优选金银花中总黄酮的最佳提取工艺

目的:探索金银花中总黄酮最佳提取工艺。方法:采用正交法考察乙醇浸泡浓度,萃取时间、乙醇洗脱浓度,物料比 4 个因素对金银花中总黄酮得率的影响。结果:金银花中总黄酮的最佳提取工艺;用 30 倍于样品重的 80%的乙醇浸泡 24h 后继用超声法提取 40min,以 60%的乙醇洗脱。结论 以超声波法提取的总黄酮含量高,操作简便,节省燃料和时间,提取较完全,此法宜工业化生产。     

甘肃金银花中绿原酸含量与抑菌作用的实验考察

目的：考察甘肃金银花的品质。方法：采用高效液相色谱法，测定绿原酸含量；以试管稀释法，考察其体外抑菌作用。结果：通过实验比较，甘肃金银花与流通的正品金银花中的绿原酸含量基本一致，其叶中绿原酸的含量也较高；甘肃金银花有显著的的体外抑菌作用。结论：甘肃金银花绿原酸含量较高，抑菌作用强，有良好开发前景。     

金银花药材高效液相色谱指纹图谱研究

目的:建立金银花药材HPLC指纹图谱.方法:用梯度洗脱法,对金银花药材进行HPLC测定,流动相为1%醋酸溶液-甲醇线性梯度洗脱,检测波长为254 nm.结果:运用梯度洗脱能很好分离金银花的各类成分;经方法学考察,HPLC指纹图谱具有良好的重现性:10批样品中11个特征指纹峰有专属性.结论:本研究建立的金银花药材HPLC指纹图谱分析法可用于金银花药材质量的综合评价.     

盆炎消凝胶中丹参、金银花的提取工艺

目的　探讨盆炎消凝胶处方中合并提取丹参和金银花的最佳条件。方法　采用正交设计,以丹参酮ⅡA和绿原酸为指标,优选醇提工艺。结果　乙醇浓度和提取时间都显著影响有效成分的提取率,最佳工艺条件为:80 %乙醇,6倍量,提取 2次,每次 1h。结论　通过正交设计实验优选的提取工艺条件稳定、可行。