HPLC-ICP-MS测定泽泻、金银花、鸡血藤中可溶性价态砷及残留限度

目的 建立高效液相色谱-电感耦合等离子质谱(HPLC-ICP-MS)测定方法,分析金银花、泽泻、鸡血藤中4种不同价态砷,评估泽泻、金银花、鸡血藤中4种价态砷的残留情况,为制定相关残留限度提供依据。方法 采用0.05 mol·L^-1 EDTA溶液超声提取样品中可溶性砷,采用HPLC-ICP-MS分析样品中可溶性砷的形态。结果 As(Ⅲ)、DMA、MMA、As(Ⅴ)在5~200 μg·L^-1内线性良好,平均回收率(n=9)为105.1％~108.4％,方法检测限为0.01 mg·kg^-1。泽泻检出少量As(Ⅲ)、As(Ⅴ),金银花检出少量As(Ⅲ)、DMA、As(Ⅴ),鸡血藤则均未检出As(Ⅲ)、DMA、MMA、As(Ⅴ)。结论 该方法操作简便、结果准确、重复性好,能满足4种不同价态砷的残留限度分析。     

基于网络药理学研究络石藤-伸筋草药对治疗骨关节炎的作用机制

目的：运用网络药理学方法研究络石藤-伸筋草药对治疗骨关节炎的生物活性成分和潜在的作用机制。方法：从中药系统药理学数据库和分析平台（TCMSP）和中国科学院化学专业数据库（CASC）中收集已知的络石藤-伸筋草药对中的生物活性化学成分；使用Swiss Target Prediction网络服务器预测化合物的蛋白靶点；从疾病数据库中挖掘已知的骨关节炎相关靶点数据；利用收集到的数据分别构建蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络并提取其交集作为药物-疾病相互作用网络，通过网络拓扑学分析筛选出核心靶点；使用DAVID数据库对核心靶点进行GO注释分析和KEGG通路分析。结果：从TCMSP和CASC数据库中共收集到108个已知的络石藤-伸筋草药对中的化学成分，虚拟筛选后得到17个生物活性化合物，并预测出117个潜在的蛋白靶点；从疾病数据库中一共检索到191个骨关节炎相关靶点；对化合物和疾病的交集PPI网络进行网络拓扑学分析得到208个核心靶点，这些靶点主要富集到自噬、凋亡、炎性反应、雌激素相关的生物过程和信号通路。结论：络石藤-伸筋草药对可能通过多条生物途径发挥调节炎性反应、自噬、凋亡和类雌激素样作用发挥抗骨关节炎作用。     

乳腺增生丸质量标准研究

目的对乳腺增生丸的质量标准进行研究。方法采用薄层色谱法同时鉴别乳腺增生丸中鸡血藤、当归、蒲公英3味药材。采用HPLC法三波长同时测定乳腺增生丸中绿原酸、咖啡酸、芍药内酯苷、芍药苷、阿魏酸和丹酚酸B的含量。色谱柱C18(4.6 mm×250 mm,5μm);以乙腈-水(含0.1%磷酸)为流动相梯度洗脱,流速1.0 mL/min;检测波长:绿原酸、咖啡酸、阿魏酸为320 nm,芍药苷、芍药内酯苷为230 nm,丹酚酸B为280 nm;柱温35℃;进样量20μL。结果薄层色谱斑点清晰,阴性对照无干扰。绿原酸、咖啡酸、芍药内酯苷、芍药苷、阿魏酸、丹酚酸B分别在10.0⁷0.0、2070.0、20¹40、55140、55³85、42385、42²94、10.0294、10.0⁷5.0、25075.0、250¹ 750μg/mL范围内呈良好的线性关系,平均回收率、RSD分别为100.5%、5.9%,100.2%、3.8%,101.2%、1.4%,99.9%、5.1%,100.6%、1.9%,99.8%、3.7%。结论方法准确可靠、重现性好,能有效控制乳腺增生丸的药品质量,为完善和提高乳腺增生丸质量标准提供了依据。     

红藤颗粒剂对子宫内膜异位症大鼠异位内膜黏附分子相关基因表达及血管内皮生长因子mRNA表达的影响

目的:探讨中药红藤颗粒剂对正常大鼠与子宫内膜异位症(EMs)大鼠异位内膜黏附分子与细胞外基质蛋白差异表达基因的干预作用和对内膜血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)mRNA表达的影响。方法:将采用手术自体移植法成功建立的EMs模型大鼠随机分为6组:模型对照组(A组)、去势组(B组)、米非司酮组(5 mg/kg,C组)、红藤颗粒剂低剂量组(20 g生药/kg,D组)、中剂量组(40 g生药/kg,E组)和高剂量组(80 g生药/kg,F组)。连续灌胃给药21 d后,采用基因芯片法检测异位内膜黏附分子与细胞外基质蛋白基因的表达,实时定量PCR法(Real-time PCR)法检测红藤颗粒剂对异位内膜VEGFmRNA表达的影响。结果:①基因芯片检测结果显示模型大鼠与正常大鼠之间有27个基因差异表达,其中7个基因下调,20个基因上调,主要分为3类:黏附分子、细胞外基质蛋白、蛋白酶以及蛋白酶抑制剂。F组显示可改善EMs大鼠的差异基因表达,降低细胞间黏附分子的表达,降低蛋白酶的表达,使其趋于正常化。②B、C、E、F组均显著降低VEGFmRNA在大鼠异位子宫内膜细胞中的表达(P<0.01)。结论:中药红藤颗粒剂可能通过影响细胞外基质蛋白以及黏附分子基因的表达,抑制异位内膜VEGF的表达,从而抑制异位内膜黏附、侵袭、血管生成,抑制异位内膜的生长,使异位内膜萎缩。     

铁皮石斛中多糖和甘露糖含量测定方法的改进及与齿瓣石斛的比较研究

目的：改进铁皮石斛中多糖和甘露糖的含量测定方法并对铁皮石斛与齿瓣石斛中的多糖和甘露糖含量进行分析比较。方法：采用硫酸-苯酚法测定石斛中多糖的含量;采用高效液相色谱法测定石斛中甘露糖的含量。结果：多糖在2.54～12.87 mg· L-1范围线性关系良好（r＝0.9990）,平均回收率为99.02％,RSD为2.6％（n＝6）;甘露糖的平均回收率为101.5％,RSD为1.7％（n＝9）。6批铁皮石斛药材多糖平均含量为45.94％,甘露糖平均含量为32.33％;9批齿瓣石斛药材多糖平均含量为45.12％,甘露糖平均含量为37.88％。结论：所建方法操作比较简单,准确可靠,重现性好,可用于控制铁皮石斛的质量。铁皮石斛与齿瓣石斛多糖含量相当,齿瓣石斛甘露糖含量高于铁皮石斛。     

鸡血藤提取物对环磷酰胺致白细胞低下大鼠的影响

目的 利用环磷酰胺（CTX）致白细胞低下大鼠模型研究鸡血藤提取物的升白细胞作用，发现其升白细胞作用的有效部位。方法 采用CTX（100 mg/kg）单次sc的方法制备大鼠白细胞低下模型，给药后第7、9、11天采集大鼠的血液，测定白细胞总数及分类，并进行统计分析。结果 鸡血藤提取物A（50%乙醇提取，为总提取物）、B（50%乙醇提取-水洗脱）、C（50%乙醇提取-25%乙醇洗脱）组均未见明显升白细胞作用，而鸡血藤提取物D（50%乙醇提取-70%乙醇洗脱，总黄酮量大于55%）和阳性药利可君均具有明显的升白细胞作用，且鸡血藤提取物D的升白细胞作用具有量效关系，优于阳性药利可君。结论 鸡血藤提取物D可能是鸡血藤升白细胞作用的有效部位，推测其升白细胞作用的有效物质是总黄酮。     

铁皮石斛药材含量和检查项方法优化及不同产地品质的比较

目的 优化药典中甘露糖含量测定及甘露糖与葡萄糖面积比的色谱条件,同时比较浙江省不同产地铁皮石斛药材质量,为铁皮石斛适宜产地的选择提供依据。方法 以中国药典2010年版中铁皮石斛甘露糖含量测定方法为基础,对色谱条件进行优化,并用优化后的方法对不同产地铁皮石斛药材质量进行分析比较。结果 优化后的色谱条件：Diamonsil C₁₈(250 mm×4.6 mm,5 μm),以乙腈(A)-0.02 mol·L^-1的乙酸铵溶液(B)为流动相,梯度洗脱(0~60 min,14%A;60~61 min,14%→25%A;61~69 min,25%;69~70 min,25%→14%A;70→80 min,14%A),流速为1.0 mL·min^-1,检测波长为250?nm,柱温为30 ℃,进样量为10 μL。优化后的方法实现了PMP(1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮)与甘露糖,PMP与样品杂质,盐酸氨基葡萄糖与样品杂质的基线分离。浙江省不同产地铁皮石斛药材在甘露糖含量及检查项比值上有一定的差异,其中富阳铁皮石斛的甘露糖含量最高,为40.8%,萧山铁皮石斛甘露糖与葡萄糖比值最高,为3.9。结论 该方法重复性好,结果准确可靠,可以用于铁皮石斛药材的质量控制。浙江省内不同产地的铁皮石斛质量存在一定的差异,其中建德最适宜人工栽培。     

HPLC同时测定大血藤中绿原酸、咖啡酸和香草酸的含量

目的 建立同时测定大血藤各部位绿原酸、咖啡酸和香草酸含量的高效液相色谱方法。方法 色谱柱为Kromasil C₁₈柱(4.6 mm×250 mm,4.5 μm),流动相：A为1%冰醋酸,B为甲醇,以A∶B=68∶32等度洗脱;柱温：30 ℃;流速：1 mL·min^-1;检测波长：327 nm;进样量：20 μL。结果 在测定样品中,绿原酸和咖啡酸在乙酸乙酯部位含量最高,分别为4.52%,0.11%,香草酸在二氯甲烷部位含量最高,为5.8%。结论 该方法简便、准确、重复性高,可用于大血藤中绿原酸、咖啡酸、香草酸含量的测定。     

HPLC测定紫蒲痛风合剂中的绿原酸

目的 采用HPLC法测定紫蒲痛风合剂中绿原酸的含量.方法 采用Waters Symmetry Shield RP18色谱柱(250 mm×4.6 m1m,5μm),流动相为乙腈-0.4％磷酸溶液(10∶90),流速1.0 mL· min-1,检测波长327 nm.结果 67.2 ～ 806.4 ng绿原酸与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999),平均加样回收率为115.54％,RSD =0.92％ (n =6).结论 所用方法准确、简便、可靠,可用于该制剂的质量控制.     

铁皮石斛优良亲本杂交F1代苗期选择

目的:揭示铁皮石斛优良种源杂交F_1代苗期多糖与生物碱含量变异规律,早期选择F_1代优良家系。方法:利用4个种源26个优良亲本设计得到26个交配组合,用苯酚-硫酸法与酸性染料比色法分别测定F_1代苗期总多糖与总生物碱含量,结合前期农艺性状研究结果,运用相关性分析和聚类分析方法筛选优良家系。结果:不同交配组合间多糖与生物碱含量差异极显著(P0.01),半同胞家系间多糖含量差异显著(P0.05),生物碱含量差异不显著,全同胞家系内多糖与生物碱变异显著小于半同胞家系;铁皮石斛苗期叶片数量与多糖含量,叶长宽比、根冠比与生物碱含量呈显著正相关关系;26个交配组合划分为5个类群,其中类群Ⅱ植株综合性状表现较好。结论:铁皮石斛F_1代优良家系选择时,应同时重视父母本的选择,在全同胞家系间选择比半同胞家系能获得更好的遗传增益与家系内稳定性;结合前期农艺性状成果,筛选出6个苗期优良家系(66×9,68×2,91×69,66×65,69×91,66×17),表现出苗高,茎粗且分枝少,叶片大而狭长,根系较发达,多糖含量高等特点,为后期选择奠定了基础。