基于网络药理学和分子对接技术研究黄芪-赤芍治疗COPD的作用机制＊

目的 基于网络药理学和分子对接技术探究黄芪-赤芍配伍对治疗慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease，COPD）的作用机制。方法 利用TCMSP，Pharmmaper数据库，筛选黄芪-赤芍治疗COPD的活性成分和潜在靶点；结合Genecards数据库挖掘的COPD相关靶点，对黄芪-赤芍药对与COPD靶点进行PPI网络构建，交互处理得到黄芪-赤芍药对治疗COPD的关键靶点，并进行GO分析和KEGG通路富集分析；并采用分子对接技术将主要活性成分与TNF-α（肿瘤坏死因子），IL-6（白细胞介素6）等进行分子对接；最后利用A549炎症细胞与人脐静脉内皮细胞缺氧损伤模型进行体外细胞实验对结果加以验证。结果 黄芪-赤芍药对中44个有效成分作用于COPD，核心成分为：槲皮素、山奈酚、丁子香萜、芍药苷、（2R，3R）-4-methoxyl-distylin、二氢异黄酮；黄芪-赤芍药对通过IL6、PTGS2、TNF等113个靶蛋白，调控Ras、PI3KAkt、IL-17等多条信号通路治疗COPD，且分子对接结果显示槲皮素、山奈酚、丁子香萜、芍药苷与IL-6、PTGS2、TNF大分子蛋白有良好的结合性，体外细胞试验证实，槲皮素与山奈酚均能减少IL-8，MMP-9炎症因子的分泌，具有不同程度的抗炎效果；芍药苷有明显的扩血管、抗血栓之效。结论 黄芪-赤芍药对治疗COPD具有多成分、多靶点、多通路、整体调节的作用特点。初步揭示了黄芪-赤芍药对通过抑制炎症反应、调节上皮细胞生长增强保护屏障等预测出黄芪-赤芍药对治疗COPD的潜在作用机制，以期为其活性成分的药效物质基础提供理论研究和思路。     

从六对论治谈国医大师吕仁和应用芍药经验

辨证论治是中医学治疗的特色。吕仁和教授提出的“六对论治”辨证思路，包括对病论治、对病辨证论治、对病分期辨证论治、对症论治、对症辨证论治和对症辨病与辨证论治相结合，为临床辨证提供了完善的思路。芍药为吕仁和教授临床常用中药，以其应用经验为切入点，结合病案系统介绍吕仁和教授“六对论治”学术思想。介绍将四逆散化裁，赤、白芍同用以柔肝养血、活血化瘀，针对肝气郁滞证候；以“三丹汤”中牡丹皮、丹参、赤芍同用，针对肾脏病“微型癥瘕”病机；以赤、白芍大剂量生用通便泻浊对症治疗等临床用药经验。     

白芍与赤芍种质问题探讨

白芍与赤芍均来源于芍药Paeonia lactiflora Pall.，通常认为加工方法是导致2种药材功效差异的本质原因，仅根据加工方法而不考虑药材种质，就会出现药材的性状、活性成分含量不能很好吻合药材的质量标准。芍药具有丰富的遗传多样性，从白芍和赤芍的本草考证、种质差异及药材化学成分差异的影响3个方面阐明了白芍和赤芍药材的种质存在的差异，白芍应为古人从野生芍药中选育出的栽培品种P.lactiflora ′Baishao′。白芍与赤芍基原问题的澄清可为优质药材生产提供参考。     

赤芍总苷诱导K562细胞凋亡及对线粒体膜电位和Ca2+的影响

目的:赤芍总苷能诱导鼠HepA和S180细胞凋亡,但赤芍总苷能否抑制K562细胞增殖及其诱导K562细胞凋亡的机制尚不明确.观察赤芍总苷诱导人红白血病细胞株K562细胞凋亡及线粒体膜电位与Ca2 水平的变化,以探讨凋亡机制.方法:实验于2007-03-02/2007-10-20在北京中医药大学细胞生化实验室,国家重点实验完成.①实验材料:赤芍总苷由西安奥晶科技发展有限公司提供,批号:060417,纯度>95%.人红白血病K562细胞株购自上海中科院细胞库.②实验方法:取对数生长期的K562细胞,培养24 h后加入50 mg/L赤芍总苷进行干预,光镜下观察细胞形态.MTT显色法检测25,50,75,100,150,200,400 mg/L赤芍总苷对K562细胞增殖的抑制作用,以仅加入无血清培养基培养的为对照.③实验评估:采用Annexin V/PI双标记法检测凋亡效应,罗丹明123(Rh123)染色流式检测线粒体膜电位和荧光染料Fluo-3AM流式检测K562细胞内游离Ca2 浓度.结果:①50 mg/L 赤芍总苷作用K562细胞24 h后,出现核固缩、核碎裂和凋亡小体等形态学改变.②与对照组相比,不同质量浓度赤芍总苷能明显抑制K562细胞的增殖(P < 0.01),并具有量效关系,呈时间和剂量依赖性.③细胞线粒体经Rh123染色呈现明亮绿,不同质量浓度赤芍总苷干预组荧光强度均较对照组明显减弱,膜电位水平较高.④赤芍总苷可引起细胞线粒体膜电位下降.不同质量浓度赤芍总苷组细胞内游离Ca2 浓度均升高, 线粒体膜电位下降,与对照组比较差异显著(P < 0.01).结论:赤芍总苷诱导K562细胞凋亡的可能机制是通过减低细胞内线粒体膜电位及提高游离Ca2 水平,从而导致细胞凋亡.     

赤芍总甙对犬急性缺血心肌的保护作用

目的：从电生理学、酶学、定量组织学方面探讨赤芍总甙对犬急性心肌缺血的保护作用.方法：[1]实验于2004-06/2004-10在吉林大学基础医学院机能科学实验中心实验室完成.选用健康成年杂种犬30只.结扎麻醉开胸制备犬左冠状动脉前降支缺血急性心肌缺血模型,将造模后大鼠30只随机分为5组：空白对照组,复方丹参组,赤芍总甙1.5,3.0,6.0 mg/kg组,每组6只.[2]空白对照组静注等容量的生理盐水,复方丹参组静注复方丹参注射液2.0 mg/kg,赤芍总甙1.5,3.0,6.0 mg/kg组静注赤芍总甙1.5,3.0,6.0 mg/kg.[3]记录结扎即刻、给药后10,30,45,60,90,120 min心外膜电图,以ST段升高总mV数表示缺血程度,以ST段升高≥2 mV的导联数为缺血范围.[4]计算心肌梗死面积（梗死心肌质量/左心室质量&;#215;100%）.[5]根据试剂盒说明操作测定血清磷酸肌酸激酶、乳酸脱氢酶、谷草转氨酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物活性及游离脂肪酸、过氧化脂质含量.[6]计量资料差异性比较采用t检验.结果：犬30只均进入结果分析.[1]赤芍总甙对急性心肌梗死犬缺血程度的影响：赤芍总甙1.5 mg/kg组和复方丹参组给药后30～120 min缺血程度明显低于对照组（t=2.273～3.963,P＜0.05～0.01）.赤芍总甙3.0和6.0 mg/kg组给药后10～120 min缺血程度均明显低于对照组（t=2.684～5.233,P＜0.05～0.01）.[2]赤芍总甙对急性心肌梗死犬心肌缺血范围的影响：赤芍总甙1.5 mg/kg组和复方丹参组在给药后30～120 min心肌缺血范围明显小于对照组（t=2.527～3.178,P＜0.05）.赤芍总甙3.0和6.0 mg/kg组给药后10～120 min心肌缺血范围明显小于对照组（t=2.564～5.195,P＜0.05～0.01）.[3]赤芍总甙对犬梗死面积和心肌酶学指标的影响：复方丹参注射液组,赤芍总甙1.5,3.0,6.0 mg/kg组心肌梗死面积、血清磷酸肌酸激酶、乳酸脱氢酶、谷草转氨酶活性均明显低于对照组（P＜0.05～0.01）.[4]赤芍总甙对急性心肌梗死犬血清游离脂肪酸和抗氧化酶活性和影响：赤芍总甙3.0,6.0 mg/kg组和复方丹参注组血清游离脂肪酸及过氧化脂质含量明显低于对照组（t=2.919～4.640,P＜0.05～0.01）,超氧化物歧化酶及谷胱甘肽过氧化物酶活性明显高于对照组（t=2.331～3.544,P＜0.05～0.01）.赤芍总甙1.5 mg/kg组血清游离脂肪酸含量明显低于对照组（P＜0.05）.结论：[1]赤芍总甙可减少心肌缺血程度,降低缺血范围和心肌酶学指标的活性,说明赤芍总甙具有抗心肌缺血作用.[2]赤芍总甙能明显抑制血清游离脂肪酸含量升高,降低过氧化脂质,通过增加血清超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物活性.表明赤芍总甙是通过改善心外膜电图,提高心肌供血,对抗脂质过氧化反应,稳定细胞膜,保护内源性抗氧化酶活性发挥抗心肌缺血作用.     

灯盏细辛与赤芍配伍对永久性脑缺血损伤大鼠的保护作用

目的探讨灯盏细辛与赤芍配伍药对脑缺血性损伤大鼠的保护作用及可能机制。方法方法 48只成年SD雄性大鼠随机分为4组:假手术组、脑缺血组、配伍药物治疗组、阻滞剂组,每组12只。采用线栓法制作大脑中动脉闭塞模型。于缺血后24 h后行神经功能缺损评分,断头取脑行TTC染色检测脑梗死面积,实时荧光定量PCR法、蛋白质免疫印记法测缺血区脑皮质SHH、Patched-1、Gli-1mRNA及蛋白的表达。结果配伍药物组缺损评分、脑组织梗死面积显著低于脑缺血组和阻滞剂组。脑组织shh、Patched-1、Gli-1 mRNA及蛋白表达量显著高于脑缺血组,阻滞剂组Gli-1mRNA及蛋白表达量显著低于配伍药物组。结论灯盏乙素与芍药苷配伍对大鼠局灶性脑缺血损伤具有一定的保护作用,其机制与上调Sonic Hedgehog(Shh)通路关键蛋白分子表达量有关。     

HPLC同时测定赤芍和白芍中没食子酸等6种成分的量

目的建立同时测定赤芍Paeoniae Rubra Radix和白芍Paeoniae Alba Radix中没食子酸、没食子酸甲酯、芍药内酯苷、芍药苷、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖、苯甲酰芍药苷的HPLC方法,测定和比较32批不同产地和收集地赤芍和白芍中6种化学成分的量。方法采用HPLC法进行测定,流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,体积流量0.8 m L/min,柱温30℃,检测波长为230 nm和270 nm。结果结果显示,没食子酸、没食子酸甲酯、芍药内酯苷、芍药苷、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖、苯甲酰芍药苷分别在0.783~50.10、1.094~70.00、2.367~151.5、7.823~500.6、3.125~200.0和0.348~22.25μg/m L内具有良好的线性关系(r2=0.999),平均回收率分别为102.1%、98.88%、99.25%、100.4%、104.2%、100.6%。结论赤芍和白芍药材样品中芍药内酯苷、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖、没食子酸和没食子酸甲酯的量差异较显著,除芍药苷外,单萜苷类成分在白芍中量明显较高,而多元酚类化合物在赤芍特别是川赤芍中量普遍居高。     

芍麦合剂质量标准的研究

目的:研究制定芍麦合剂质量控制指标。方法:采用薄层色谱法对芍麦合剂中延胡索、赤芍及白芍进行定性鉴别。采用高效液相色谱法对制剂中的橙皮苷进行含量测定。结果:延胡索、赤芍及白芍薄层色谱清晰,无干扰,重现性良好;橙皮苷含量测定准确度良好,回收率达到98.91%,RSD=1.80%,重复性良好,RSD=1.37%,在0.04~0.64μg范围内呈良好的线性关系。结论:该方法简便,专属性强,可作为该制剂的质量控制指标。     

赤芍总苷、川芎总酚酸组分组成结构对缺氧损伤人脐静脉内皮细胞的影响

目的: 研究赤芍总苷、川芎总酚酸组分不同组成结构对连二亚硫酸钠(Na₂S₂O₄)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)缺氧损伤模型的保护作用,并参照基线等比增减法,设计不同组分组成结构,优化出最佳的组分结构。 方法: 采用 Na₂S₂O₄ 体外诱导HUVEC,建立细胞损伤模型。采用MTT比色法测定细胞活力,试剂盒测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量、乳酸脱氢酶(LDH)含量、一氧化氮(NO)含量,通过Western blot检测了各组细胞Bcl-2,Bax蛋白的表达量。 结果: 与模型组比较,赤芍总苷组分、川芎总酚酸组分不同组成结构可显著提高SOD活力,降低MDA,LDH,NO含量 (P<0.01,P<0.05)。芍芎组分可以下调Bax蛋白的表达量,上调Bcl-2蛋白的表达量,Bcl-2/Bax显著升高(P<0.01,P<0.05),抑制细胞凋亡。结果显示赤芍总苷、川芎总酚酸组分组成结构比例为8:2时,对缺氧损伤的内皮细胞保护作用最好。 结论: 芍芎组分可以减轻HUVEC的缺氧损伤,8:2组分组成时保护作用最为明显,其机制可能与其抗氧化和抑制细胞凋亡 有关。