JAK2/STAT3信号通路介导灯盏花乙素抗人心脏微血管内皮细胞缺氧-复氧损伤

Objective: To investigate the antagonistic cell injury effect and molecular mechanism of scutellarin(SCU)in hypoxia reoxygenation(HR) treated human cardiac microvascular endothelial cells(HCMECs).Methods: The method of 12 h hypoxia following by 12 h reoxygenation was used to culture HCMECs in vitro to built cell injury model. The groups were divided into control group, model(HR) group, and HR + SCU(0.1 μmol/L, 1 μmol/L, and 10 μmol/L) group. The cell viability was determined by MTT, and oxidative stress was detected by malondialdehyde(MDA) levels by biochemical assay kit. Protein expression of JAK2/p-JAK2 and STAT3/p-STAT3 were evaluated by Western blot.Results: The results of MTT and MDA showed that HR decreased the cell viability(P 0.05) and increased MDA level significantly(P 0.05), SCU played a contrary role in these processes. Western blot analysis indicates that, the expression of JAK2 and p-JAK2, STAT3, and p-STAT3 were increased in model group when compared with control group(P 0.05); Compared with model group, their expression were reduced by SCU(P 0.05).Conclusion: SCU took a protective effect on HR-treated HCMECs, and the molecular mechanism may be associated with the inhibition of JAK2/STAT3 signal transduction pathway.     

HPLC法测定蒙药地格达-4汤中秦皮乙素的含量

目的建立HPLC法测定蒙药地格达-4汤中秦皮乙素的含量。方法在单因素实验基础上,采用Box-Behnken响应面法优选出地格达-4汤中秦皮乙素的提取工艺,采用HPLC法测定地格达-4汤中秦皮乙素的含量。色谱条件:πNAP cosmosil C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);以甲醇-1 mL·L~(-1)磷酸(21∶79)为流动相;流速为1.0 mL·min~(-1);检测波长为345 nm;柱温为30℃。结果秦皮乙素质量浓度在3.47～888.00μg·mL~(-1)范围内线性关系良好(r=0.999 8);平均加样回收率为96.0%。结论该方法简便、准确,可有效控制地格达-4汤的质量。     

五味消毒饮口服液HPLC指纹图谱的建立及6种指标性成分定量测定

目的建立五味消毒饮口服液(WXOL)的HPLC法特征指纹图谱,并同时测定绿原酸、木犀草苷、木犀草素、蒙花苷、咖啡酸、秦皮乙素6种主要指标成分的量。方法采用Agilent 1260高效液相色谱仪进行色谱分析,色谱柱为Agilent TC-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为0.5%醋酸水溶液-甲醇,梯度洗脱:0~10 min,10%~32%甲醇;10~20 min,32%甲醇;20~25 min,32%~46%甲醇;25~31 min,46%~48%甲醇;31~41 min,48%~80%甲醇;体积流量为1 m L/min;检测波长为320 nm;柱温为30℃;采用国家药典委员会出版的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012年版)对10批WXOL化学成分指纹图谱进行相似度评价,并采用多成分同时测定法对6种指标性成分进行定量测定。结果 10批WXOL HPLC特征指纹图谱相似度均大于0.98,共17个共有峰,各峰分离度较好。通过对照品比对确定了其中绿原酸(5号峰)、秦皮乙素(7号峰)、咖啡酸(8号峰)、木犀草苷(12号峰)、蒙花苷(16号峰)、木犀草素(17号峰)6个成分,10批WXOL中绿原酸量为54.038 3~105.551 1μg/m L,秦皮乙素量为4.122 1~31.359 9μg/m L,咖啡酸量为2.413 0~4.420 7μg/m L,木犀草苷量为4.042 8~11.312 8μg/m L,蒙花苷量为3.866 3~46.271 9μg/m L,木犀草素量为0.990 8~2.126 8μg/m L。不同批次间各指标性成分量变化较小,样品质量较稳定。结论所建立的HPLC特征指纹图谱结合多指标成分定量测定的方法,稳定性、重复性较好,有利于保证WXOL质量均一,对其质量控制具有参考价值。     

UPLC同时测定秦皮配方颗粒中7种成分

目的:建立UPLC同时测定秦皮配方颗粒中7种成分(秦皮甲素、毛柳苷、秦皮乙素、丁香苷、秦皮苷、秦皮素和东莨菪内酯)的方法,比较不同厂家及批次秦皮配方颗粒中7种成分含量的差异,为秦皮配方颗粒的科学质量控制提供依据。方法:采用Waters超高效液相色谱仪,Waters ACQUITY UPLC BEH C_(18)色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm),以甲醇(A)-0.1%磷酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱(0~1 min,5%~10%A;1~10 min,10%~12%A),流速0.4 m L·min~(-1),进样量2μL,柱温38℃,检测波长220 nm。结果:色谱峰纯度结果表明方法专属性良好。秦皮甲素、毛柳苷、秦皮乙素、丁香苷、秦皮苷、秦皮素和东莨菪内酯分别在各自范围内峰面积与浓度呈良好的线性关系;平均回收率分别为100.0%(RSD 2.0%),99.5%(RSD2.1%),99.9%(RSD 1.5%),99.7%(RSD 2.2%),99.4%(RSD 1.4%),100.8%(RSD 1.8%),99.4%(RSD 2.6%)。结论:该方法简便、准确,适用于秦皮配方颗粒中7种成分的同时定量测定,分析时间明显缩短,并对秦皮配方颗粒中除秦皮甲素和秦皮乙素之外的多种成分首次进行了定量测定,不同厂家及批次的秦皮配方颗粒主要成分含量存在一定的差异。     

秦皮的临床应用及其用量探究

通过搜集古医籍及现代医家临床经验,总结出秦皮具有以下特点:汤剂中临床用量为3.75～41.4 g,常用剂量为6～30 g,丸剂用量为9.25 g.根据疾病、证型、症状寻求最佳用量,如清热燥湿治疗皮肤病(湿疹、黄水疮、尖锐湿疣等)、泌尿生殖系统疾病(尿路感染、睾丸炎、肾盂肾炎等)、代谢类疾病(痛风、高尿酸血症等)、小儿惊痫发热等,为3.75～30 g;收涩止痢治疗胃肠道疾病(溃疡性结肠炎、放射性直肠炎等)、生殖系统疾病(不育症、不孕症等)等,为6～41.4 g;除湿止带治疗带下病(盆腔炎、阴道炎等),为10～20 g,其中丸剂为9.25 g;清肝明目治疗眩晕耳鸣、眼疾(单纯疱疹病毒性角膜炎、玻璃体混浊等),为6～41.4 g.根据疾病、证型及症状,配伍相应中药,如清热燥湿常配伍灯芯草、苦参等;收涩止痢常配伍白头翁、黄连、乌梅等;除湿止带常配伍黄柏、苦参等;清肝明目常配伍白头翁、决明子等.     

鹅去氧胆酸浙贝乙素酯对H22荷瘤小鼠抑瘤作用*

目的研究新型化合物鹅去氧胆酸浙贝乙素酯(CDCA-Ver)对H22荷瘤小鼠体内肿瘤细胞生长和免疫器官的影响。方法采用鼠系肝癌细胞H22造荷瘤模型,将H22荷瘤小鼠40只,采用随机数字表法随机分成4组,每组10只,分别为模型对照组、环磷酰胺(CTX)组、CDCA-Ver腹腔注射组和CDCA-Ver静脉注射组。模型对照组按每日10 mL·kg-1无菌0.9%氯化钠溶液腹腔注射1次,CTX组按每日20 mg·kg-1剂量腹腔注射1次,CDCA-Ver腹腔注射组每日按20 mg·kg-1剂量腹腔注射1次,CDCA-Ver静脉注射组每日按20 mg·kg-1剂量小鼠尾静脉注射1次。接种24 h后给药,给药量为0.1 mL·(10 g)-1,连续给药10 d。以CTX为阳性对照药,考察CDCA-Ver(静脉注射和腹腔注射)对荷瘤小鼠肿瘤的生长抑制作用,评价CDCA-Ver对荷瘤小鼠的免疫脏器指数(胸腺指数和脾指数)的影响,采用组织病理学切片法研究CDCA-Ver对荷瘤小鼠瘤块组织病理学形态的影响。结果CDCA-Ver静脉注射和腹腔注射两种给药方式对荷瘤小鼠的肿瘤生长均具有良好的抑制作用,腹腔注射20 mg·kg-1剂量CDCA-Ver抑瘤率达48.3%,与模型对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),与CTX组作用相当。与模型对照组相比,CDCA-Ver腹腔注射组脾指数和胸腺指数没有显著变化(P＞0.05),而CTX组脾指数和胸腺指数均显著降低(P＜0.01),表明CDCA-Ver发挥体内抗肿瘤作用不会降低荷瘤小鼠的免疫功能。组织病理学结果也证实CDCA-Ver具有体内抗肿瘤作用。结论CDCA-Ver对H22荷瘤小鼠肿瘤生长具有明显的抑制作用。     

秦皮乙素对肾透明细胞癌增殖、周期和凋亡的影响

目的:探讨秦皮乙素对肾透明细胞癌增殖、周期和凋亡的作用。方法:选取肾透明细胞癌786-O和SN12-PM6细胞,分别给予秦皮乙素(0、12.5、25、50、100、200、400、800μg/mL),培养24 h或48 h后,通过MTS和平板克隆形成实验检测秦皮乙素对786-O和SN12-PM6细胞增殖能力的影响,通过流式细胞技术检测秦皮乙素对786-O和SN12-PM6细胞周期、凋亡的影响,通过Western Blot检测周期、凋亡相关蛋白表达情况。结果:秦皮乙素能够抑制肾透明细胞癌786-O和SN12-PM6细胞的增殖(P0.05),且呈浓度和时间依赖性,与空白组(0μg/mL)相比,秦皮乙素处理组(100、200μg/mL)S期比例明显减少,G_0/G_1期和G_2/M期比例明显增加,凋亡率也明显增加(P0.05,P0.01),与空白组(0μg/mL)相比,秦皮乙素处理组(100、200μg/mL)Cyclin D1、CDK4、CDK6、c-Myc表达明显减少,Caspase 3表达无明显差异,Cleaved Caspase 3表达明显增多(P0.05,P0.01)。结论:秦皮乙素可有效抑制肾透明细胞癌786-O和SN12-PM6细胞增殖,并抑制细胞周期及诱导凋亡。     

蓝萼乙素对三阴性乳腺癌 MDA-MB-231细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的:探讨蓝萼乙素对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其作用机制。方法:体外培养人乳腺癌细胞MDA-MB-231,加入不同浓度(0、2、4、8μmol/L)蓝萼乙素干预处理,采用MTT法检测细胞增殖能力;划痕实验考察细胞迁移能力;Transwell小室法考察细胞侵袭能力;Western blotting法检测细胞内p38MAPK、p-p38MAPK、FOXO3a及上皮-间质转化(EMT)相关标志物(E-cadherin、Vimentin及N-cadherin)的表达水平。结果:蓝萼乙素浓度为2、4、8μmol/L时,细胞增殖率分别为(83.2±6.90)%、(70.72±6.53)%、(45.43±7.51)%,较空白对照组[(100.00±7.84)%]降低;细胞侵袭数量分别为(300.54±24.91)、(255.44±23.59)、(208.66±36.18),较空白对照组(368.44±28.32)降低;细胞迁移距离分别为(487.11±53.00)μm、(394.93±61.91)μm、(312.88±35.42)μm,较空白对照组[(559.37±75.77)μm]降低;p-p38MAPK表达量分别为(1.38±0.11)、(1.69±0.13)、(2.23±0.19),较空白对照组(1.00±0.09)增加;FOXO3α表达量分别为(1.40±0.16)、(1.97±0.31)、(2.44±0.26),较空白对照组(1.00±0.18)增加;E-cadherin表达量分别为(1.15±0.11)、(1.77±0.22)、(1.86±0.15),较空白对照组(1.00±0.11)增加;Vimentin表达量分别为(0.86±0.04)、(0.49±0.05)、(0.54±0.04),较空白对照组(1.00±0.04)减少;N-cadherin表达量分别为(0.66±0.07)、(0.58±0.08)、(0.42±0.04),较空白对照组(1.00±0.12)减少,差异均有统计学意义(P 0.05)。结论:蓝萼乙素可通过介导p38MAPK/FOXO3a信号传导有效干扰肿瘤细胞EMT进程,发挥其抑制三阴性乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的作用。