miR-548d抑制骨肉瘤细胞的增殖和迁移

目的:探讨miR-548d对骨肉瘤细胞增殖和迁移的影响。方法:通过Real time PCR及Western blot检测miR-548d和KRAS在30例骨肉瘤组织以及293、MG63和U2OS细胞中的表达情况。对30例骨肉瘤组织中miR-548d和KRAS含量的相关性进行分析，随后通过报告基因实验印证miR-548d对KRAS的靶向作用。MG63细胞中分别过表达或沉默miR-548d后，通过Western blot实验分析KRAS的变化情况，MTT实验观察miR-548d对细胞增殖的影响，Transwell实验观察miR-548d对其迁移能力的影响。结果:骨肉瘤组织及细胞中miR-548d表达较低，KRAS表达较高。在骨肉瘤组织中miR-548d与KRAS的表达呈负相关。报告基因实验证明miR-548d可以直接打靶KRAS。Western blot指出miR-548d可以抑制KRAS的表达。最后MTT和Transwell实验指出miR-548d可以抑制MG63细胞的增殖与迁移。结论:miR-548d可以通过打靶KRAS抑制骨肉瘤细胞的增殖和迁移。     

柴胡皂苷A通过Wnt/β-catenin通路改变A549/DDP细胞耐药性

目的 探讨柴胡皂苷A（SSA）逆转人肺癌顺铂（DDP）耐药株A549/DDP的作用及机制。方法 细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测A549和A549/DDP对DDP的耐药性及SSA对A549和A549/DDP细胞活力的影响；流式细胞术检测A549/DDP凋亡率和细胞中活性氧（ROS）的变化；实时荧光定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测C-myc，B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3（Caspase-3） mRNA的表达情况；TopFish双荧光素酶报告基因检测β-连环蛋白（β-catenin）的转录活性；蛋白免疫印迹法（Western blot）法检测A549/DDP细胞中β-catenin蛋白的变化。结果 CCK-8检测结果显示，A549/DDP的耐药性是A549的12.82倍，差异具有统计学意义（P<0.05），SSA能够抑制A549的细胞活力，其半数抑制浓度（IC₅₀）为34.9 μmol·L^-1。SSA抑制 A549/DDP细胞的活力并具有浓度依赖性，在20 μmol·L^-1浓度时，对A549/DDP的抑制率<10%，选择20 μmol·L^-1作为逆转浓度；流式结果显示，与空白组比较，DDP组A549/DDP的凋亡比例明显升高，细胞内活性氧的累积明显增加（P<0.05），与DDP组比较，SSA+DDP组A549/DDP的凋亡比例明显升高，细胞内活性氧的累积明显增加；与空白组比较，DDP组A549/DDP细胞中C-myc，Bcl-2 mRNA表达明显降低，Caspase-3 mRNA表达明显升高（P<0.05），与DDP组比较，SSA+DDP组C-myc，Bcl-2 mRNA表达明显降低，Caspase-3 mRNA表达明显升高（P<0.05）；与空白组比较，DDP组β-catenin的转录活性明显降低（P<0.05），与DDP组比较，SSA+DDP组β-catenin的转录活性明显降低（P<0.05）；与空白组和DDP组比较，SSA+DDP组β-catenin蛋白表达明显降低，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 柴胡皂苷A可以提高A549/DDP细胞对DDP的敏感性，其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路激活有关。     

柴胡皂苷D通过诱导自噬抑制人结直肠癌细胞SW480增殖的实验

目的:研究柴胡皂苷D（saikosaponin-D，SSD）对人结直肠癌细胞SW480自噬的影响，并探讨诱导的自噬对细胞增殖的影响。方法:Western-blot检测SSD对自噬相关蛋白LC3A/B和p62表达的影响，LC3翻转实验和GFP-RFP-LC3荧光实验验证自噬流的发生。Western-blot检测3-MA对SSD所诱导自噬的抑制作用，MTT和细胞计数实验研究3-MA抑制自噬后SSD对SW480细胞增殖的影响。结果:SSD能够诱导SW480细胞发生自噬，表现在LC3A/B II及LC3A/B II/I比值的增高、自噬经典底物蛋白p62的减少、LC3翻转试验阳性以及LC3荧光实验中黄色和红色荧光颗粒的增多（P＜0.05）。自噬抑制剂3-MA能够抑制SSD所诱导自噬的发生（P＜0.05），且3-MA抑制自噬后，SSD对SW480的增殖抑制效应减弱（P＜0.05），提示SSD诱导的自噬对细胞的增殖起抑制作用。结论:SSD通过诱导自噬抑制人结直肠癌细胞SW480的增殖。     

过表达miR-520d 通过抑制自噬蛋白Beclin1 逆转三阴性乳腺癌细胞化疗耐药性

[摘要] 目的：探讨miR-520d 通过调控自噬逆转三阴性乳腺癌（TNBC）细胞化疗耐药的作用及分子机制。方法：以人TNBC细胞系MDA-MB-231 和MDA-MB-468 为亲本株细胞构建多西他赛（Doc）耐药细胞株MDA-MB-231/Doc 和MDA-MB-468/Doc，实验分为空白组（亲本细胞）、对照组（耐药细胞组）和过表达miR-520d 组。用qPCR检测空白组和耐药细胞组细胞中miR-520d 的表达水平，MTT实验检测过表达miR-520d 的耐药细胞对Doc 的敏感性，MDC染色后荧光显微镜观察细胞中自噬小体的发生情况、共聚焦显微镜观察过表达miR-520d 的耐药细胞中自噬相关蛋白LC3 阳性的细胞数。用荧光素酶报告基因实验验证miR-520d 与Beclin1 的靶向关系。用WB实验检测过表达miR-520 对细胞中自噬相关蛋白Beclin1 和LC3Ⅰ、LC3Ⅱ表达的影响。结果：TNBC耐药细胞中miR-520d 的表达水平明显低于空白组细胞（P<0.01）。过表达miR-520d 的耐药细胞对Doc的敏感性显著提高（P<0.01）、细胞的自噬活性明显降低（P<0.01）。荧光素酶报告基因实验证明Beclin1 是miR-520d 可能的靶分子。Doc 与miR-520d mimics 联合使用可降低TNBC耐药细胞中LC3-Ⅱ/Ⅰ比值和自噬蛋白Beclin1 的表达水平（均P<0.05）。结论：通过调控miR-520d 水平可能改变自噬蛋白Beclin1 表达，从而逆转TNBC细胞Doc化疗耐药性。     

柴胡皂苷D通过抑制EMT和细胞干性抑制人结直肠癌细胞SW480的迁移和侵袭

目的:研究柴胡皂苷D（saikosaponin-D，SSD）对人结直肠癌细胞SW480迁移和侵袭能力的影响，并初步探讨SSD抑制细胞迁移和侵袭的机制。方法:MTT检测SSD对细胞增殖的影响。划痕实验和Transwell迁移实验研究SSD对细胞迁移能力的影响。Transwell侵袭实验研究SSD对细胞侵袭能力的影响。Western-blot检测SSD对上皮间质转化（epithelial mesenchymal transformation，EMT）相关蛋白（E-cadherin、N-cadherin和Vimentin）表达的影响。克隆球形成实验研究SSD对细胞干性的影响。结果:在划痕实验和Transwell迁移实验中，SSD显著抑制SW480的迁移能力（P<0.05）。在Transwell侵袭实验中，SSD显著抑制SW480的侵袭能力（P<0.05）。SSD处理后，细胞E-cadherin的表达增高，N-cadherin和Vimentin的表达降低（P<0.05），同时SSD抑制SW480细胞克隆球的形成（P<0.05）。结论:柴胡皂苷D通过抑制EMT和细胞干性抑制人结直肠癌细胞SW480的迁移和侵袭。     

胱抑素C估算肾小球滤过率对人工肝治疗HBV相关性慢加急性肝衰竭短期预后的预测价值

  目的  探讨胱抑素C估算肾小球滤过率（cystatin C-based estimated glomerular filtration rate, eGFR-CysC）对人工肝治疗的乙型肝炎病毒相关性慢加急性肝功能衰竭（hepatitis B virus-related acute-on-chronic liver failure, HBV-ACLF）预后的预测价值。  方法  回顾性收集我院364例人工肝治疗的HBV-ACLF住院患者,根据28 d死亡率将患者分为存活组269例和死亡组95例,分析临床资料和实验室数据对患者短期预后的价值。  结果  多因素Cox回归分析显示,基线eGFR-CysC水平低是HBV-ACLF患者28 d死亡率的独立风险因素之一（风险比=0.987;95%置信区间:0.979～0.996,P=0.003）。基线eGFR-CysC水平与终末期肝病模型评分（the model for end-stage liver disease, MELD）（r=?0.439,P<0.001）、MELD联合血清钠评分（r=?0.481,P<0.001）和慢性肝衰竭联盟-慢加急性肝衰竭预后评分（Chronic Liver Failure Consortium ACLF, CLIF-C ACLF)（r=?0.340,P<0.001）呈负相关。受试者工作特性（receiver operating characteristic, ROC）曲线分析示基线值,第一次、第二次、第三次使用人工肝治疗后的eGFR-CysC值判断患者28 d死亡与否的曲线下面积分别为0.639、0.697、0.716、0.749（P<0.001）,eGFR-CysC最佳临界值分别为70.620、67.525、61.725、64.685 mL/(min·1.73 m2)。  结论  eGFR-CysC水平能辅助评价人工肝治疗HBV-ACLF患者短期死亡率,动态监测的临床应用价值更高。     

小叶黑柴胡野生居群生物学特性与活性成分含量对典型生境的响应

目的 探索不同微生境对小叶黑柴胡Bupleurum smithii var.parvifolium药材形成的影响,为其驯化栽培奠定基础。方法 通过样方调查对不同生境中小叶黑柴胡种群结构、优势物种、药用植物多样性及柴胡表观形态特征进行统计分析;采用烘干法对土壤水分含量进行测定,采用550℃烧失量法对土壤有机质含量进行测定;采用HPLC法对柴胡中代表组分柴胡皂苷成分含量进行测定。结果 哈思山地区野生小叶黑柴胡分布的典型生境有3个类型,分别为戈壁型、草甸型和灌丛型。戈壁型生境包括流石滩亚型和岩壁缝隙亚型,生境中无优势植物种群,戈壁型柴胡以匍匐型为主,地上部分生物量相对较少,地下生物量相对较多,活性成分含量相对较高;草甸型生境包括低海拔和高海拔2个亚型,低海拔草甸优势植物为地榆,高海拔草甸优势植物为珠芽蓼;灌丛型包括叉子圆柏灌丛、鲜黄小檗灌丛和峨眉蔷薇灌丛,草甸型和灌丛型柴胡以直立型为主,地上部分生物量相对较多,活性成分含量相对较低。结论 小叶黑柴胡是一种极具开发潜力且对恶劣生境适应性极强的药用植物,不同微生境条件下小叶黑柴胡的表观形态和药材品质不同,为其驯化栽培和野生资源保护奠定了一定基础。     

柴胡皂苷D抗肿瘤作用机制研究进展

柴胡皂苷D为传统中药柴胡的主要生物活性成分,具有抗炎、抗肿瘤、保护肝脏、调节免疫等作用,通过查阅近8年来国内外关于柴胡皂苷D抗肿瘤作用机制研究的相关文献,分别对阻滞细胞周期、抑制细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞侵袭和迁移、调控肿瘤细胞自噬及逆转肿瘤细胞多药耐药等作用进行阐述,以期为临床应用柴胡皂苷D治疗肿瘤提供确切的文献依据。