血人参总黄酮纯化工艺的优化及其对酪氨酸酶的抑制作用研究＊

目的 优化大孔吸附树脂分离纯化血人参总黄酮的工艺条件，研究血人参总黄酮对酪氨酸酶的抑制作用。方法 以吸附率、解吸率等为考察指标，采用静态吸附-解吸试验对6种不同型号的大孔吸附树脂进行筛选，优选最佳的树脂型号。采用单因素试验考察上样液pH、上样液浓度、上样体积、上样体积流量、洗脱溶剂、洗脱液体积流量、洗脱剂体积对血人参总黄酮纯化的影响，确定最佳纯化工艺；以L-酪氨酸、L-多巴为底物，测定血人参总黄酮对酪氨酸单酚酶和二酚酶的抑制作用，并对其抑制机理和抑制类型进行分析。结果 AB-8型大孔吸附树脂对血人参总黄酮的分离纯化效果最好。最佳纯化工艺参数为：上样液pH为4、上样体积为70 mL（4.7 BV）、上样体积流量为1 mL·min^-1、上样液浓度为5.38 mg·mL^-1、洗脱溶剂为70%乙醇、洗脱剂体积流量为3 mL·min^-1、洗脱剂体积为120 mL（8 BV），血人参总黄酮对酪氨酸单酚酶和二酚酶均有抑制作用，其最大半数抑制浓度分别为88.78 mg·L^-1和36.46 mg·L^-1，对二酚酶的抑制类型为可逆非竞争性抑制。结论 AB-8型大孔吸附树脂可用于纯化血人参总黄酮，纯化后血人参总黄酮的纯度为46.01%，建立的工艺条件稳定可靠。纯化后的血人参总黄酮对酪氨酸酶有抑制作用，抑制类型为可逆非竞争性抑制。     

荔枝核总黄酮对大鼠肝星状细胞增殖抑制作用及对PPARγ、C-ski表达的影响

目的:研究荔枝核总黄酮(total flavone from litchi,TFL)对大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)增殖的抑制作用及对过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome prolif-erator-activated receptor-γ,PPAR-γ)、C-ski表达的影响,探究荔枝核总黄酮抗肝纤维化的可能作用机制。方法:体外培养HSC,分为空白对照组、荔枝核总黄酮浓度20 mg·L~(-1)组、40 mg·L~(-1)组、80 mg·L~(-1)组、160 mg·L~(-1)组、200 mg·L~(-1)组,分别干预48 h后,通过CCK-8法检测每组细胞的增殖情况。再设置为空白组、PPARγ天然配体前列腺素J2(15-d-PGJ2)对照组(5μmol·L~(-1))、15-d-PGJ(2 5μmol·L~(-1))+TFL(100μmol·L~(-1))对照组、TFL组(100μmol·L~(-1)),ELISA法检测每组细胞中Smad3/4的含量;qPCR法检测每组细胞中PPAR-γ、C-ski mRNA的表达。结果:CCK-8结果显示,在作用时间相同的情况下,随着TFL作用剂量的增加,药物对细胞增殖的抑制率增高(P0.05);ELISA结果显示,TFL实验组中的Smad3/4含量明显降低(P0.05);qPCR结果显示,TFL实验组中PPARγ、C-ski mRNA的表达量均明显增加(P0.05)。结论:荔枝核总黄酮能够抑制HSC-T6细胞增殖,降低细胞外基质分泌,该机制可能与抑制HSC-T6细胞中的Smad3/4含量,上调PPAR-γ及C-ski mRNA表达相关。     

骨碎补总黄酮治疗绝经后骨质疏松症的Meta分析

目的系统评价骨碎补总黄酮(强骨胶囊)治疗绝经后骨质疏松症(PMOP)的疗效及安全性。方法计算机检索CNKI、CBM、VIP、万方数据库、PubMed、Embase、Cochrane图书馆,检索时间是自建库以来至2017年11月3日,按照纳排标准,收集强骨胶囊治疗PMOP的临床对照试验,依据Cochrane Handbook for Systematic Reviews of Interventions(version 5.35)质量评估,并使用RevMan5.3软件进行Meta分析。结果纳入6篇文献,8个研究。在有效率[RR=1.50,95%CI(1.04～2.17),P=0.03]和提高股骨骨密度[MD=0.04,95%CI(0.02～0.06),P=0.0002]方面,强骨胶囊联合常规治疗可能优于单独常规治疗;在提高腰椎骨密度[MD=0.02,95%CI(-0.01～0.05),P=0.28]、髋骨骨密度[MD=-0.05,95%CI(-0.09～0.00),P=0.05]、改善血钙[MD=0.01,95%CI(-0.06～0.08),P=0.77]、血磷[MD=0.02,95%CI(-0.05～0.09),P=0.58]、血碱性磷酸酶[MD=4.28,95%CI(-6.98～15.54),P=0.46]等指标方面,与常规治疗组相比,差异无统计学意义。强骨胶囊的不良反应包括便秘、口干、恶心、胃肠道反应,经对症处理后缓解,不需停药。结论强骨胶囊在改善患者症状及股骨骨密度方面,可能有一定的辅助治疗作用。而在改善血钙、血磷、血碱性磷酸酶、血骨钙素等客观指标方面,可能无明显优势,但具有较好的安全性。     

淫羊藿总黄酮改善自然衰老大鼠睾丸支持细胞分泌功能衰退的作用

目的研究淫羊藿总黄酮(TFE)对衰老睾丸支持细胞(Sertoli细胞)分泌功能衰退的影响,并从肌醇需酶1α(IRE1α)/X盒结合蛋白1(XBP1)信号通路探讨其分子机制。方法将36只SPF级18月龄SD雄性大鼠随机分为自然衰老组和TFE 10及40 mg·kg~(-1)组,每组12只;另取10只2月龄大鼠作为壮龄对照组。每天定时ig给TFE 1次,每5 d间隔2 d再继续ig给药,给药共计4个月。计算睾丸指数;HE染色观察睾丸组织形态;实时定量PCR和Western印迹法检测睾丸组织中胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、骨形态形成蛋白4(BMP4)及干细胞因子(SCF)mRNA和蛋白表达水平;检测睾丸组织中磷酸化IRE1α(p-IRE1α)和XBP1蛋白表达水平;免疫荧光法检测睾丸组织内Sertoli细胞数量和p-IRE1α定位。结果与壮龄对照组比较,自然衰老组大鼠睾丸指数显著降低(P<0.01);与自然衰老组相比,TFE 40 mg·kg~(-1)组睾丸指数显著升高(P<0.05)。HE结果显示,自然衰老组睾丸曲细精管的形态结构紊乱,部分生精细胞发生脱落;TFE给药组能改善睾丸曲细精管的形态结构。实时定量PCR结果显示,与壮龄对照组比较,自然衰老组Sertoli细胞分泌因子GDNF和SCF mRNA表达水平均显著下调(P<0.01);Western印迹结果显示,GDNF,BMP4和SCF蛋白显著下调(P<0.01)。与自然衰老组相比,TFE给药组分泌因子mRNA和蛋白表达水平均显著上调(P<0.05,P<0.01)。Western印迹结果显示,与壮龄对照组比较,自然衰老组睾丸组织中p-IRE1α和XBP1蛋白表达均显著下调(P<0.01);与自然衰老组相比,TFE给药组p-IRE1α和XBP1蛋白表达显著上调(P<0.01)。免疫荧光结果显示,壮龄对照组、自然衰老组和TFE给药组Sertoli细胞数量无显著差异。不仅在生精细胞胞质广泛表达,在Sertoli细胞胞质亦有表达。结论 TFE可显著改善自然衰老所致大鼠睾丸Sertoli细胞分泌功能衰退,其机制可能与调节IRE1α/XBP1信号通路有关。     

菊花总黄酮含药血浆对干眼症细胞模型Bax mRNA及Bcl-2mRNA表达的影响

目的观察菊花总黄酮含药血浆对大鼠泪腺上皮细胞干眼症模型中Bax mRNA及Bcl-2 mRNA表达的影响。方法将培养生长状态良好的大鼠泪腺上皮细胞随机分为无雄激素培养组(空白组)、雄激素培养组(雄激素组)、无雄激素培养黄酮组(菊花总黄酮组),分别加入空白血浆、丙酸睾酮、菊花总黄酮含药血浆干预48 h,然后加入100μmol/L H_2O_2继续培养60 min诱导细胞凋亡。RT-PCR法检测泪腺上皮细胞中Bax mRNA及Bcl-2 mRNA的表达情况。结果雄激素组和菊花总黄酮组Bax mRNA表达量均明显低于空白组(P均0.05),Bcl-2 mRNA表达量均明显高于空白组(P均0.05),雄激素组和菊花总黄酮组比较差异均无统计学意义(P均0.05)。结论菊花总黄酮含药血浆有可能通过抑制泪腺上皮细胞中Bax mRNA表达及促进Bcl-2 mRNA表达的途径,起到抑制泪腺上皮细胞凋亡的作用。     

韭菜籽总黄酮对痛经模型小鼠疼痛及生化指标的影响

目的:探讨韭菜籽总黄酮对苯甲酸雌二醇与冰水浴联合所致痛经模型小鼠疼痛及各生化指标的影响。方法:用苯甲酸雌二醇结合冰水浸泡制作小鼠痛经模型,观察并记录注射缩宫素致小鼠疼痛的扭体反应次数和扭体潜伏期。并采用酶联免疫法对小鼠子宫匀浆中的血管升压素(arginine vasopressin,AVP)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-PX)水平进行检测,对小鼠血清中的白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和β-内啡肽(β-eE ndorphin,β-EP)水平进行检测。结果:与空白组小鼠比较,模型组小鼠扭体次数显著增多,潜伏期显著缩短,β-EP和GSH-PX水平显著降低,IL-6和AVP水平显著升高。与模型组相比,大、中、小剂量韭菜籽总黄酮组和益母草颗粒组都能降低小鼠扭体次数,延长小鼠扭体潜伏期,显著升高β-EP及GSH-PX水平,显著降低IL-6及AVP水平。结论:韭菜籽总黄酮能够改善小鼠痛经情况,可以有效缓解痛经症状。     

响应面法优选鸡血藤总黄酮的提取工艺

目的采用响应面法优选鸡血藤总黄酮的提取工艺。方法通过中心组合方法,研究乙醇体积分数、料液比、提取时间及提取次数对鸡血藤总黄酮得率的影响。结果鸡血藤总黄酮的最佳提取工艺为:体积分数为50%的乙醇,料液比为1∶45,回流提取2次,每次2.5 h。结论在最佳提取工艺条件下,鸡血藤总黄酮得率为0.58%,该工艺条件可为鸡血藤总黄酮的工业生产提供依据。     

微波萃取葛根总黄酮工艺及其抗氧化活性研究

目的优化葛根总黄酮的微波萃取工艺,测定所得总黄酮的体外抗氧化活性。方法采用响应面法,考察液料比、醇浓度、微波功率、微波时间对微波萃取葛根总黄酮效率的影响,采用比色法测定其体外抗氧化活性。结果微波萃取葛根总黄酮的最佳工艺为:液料比43:1,、醇浓度42%、微波功率828 W、萃取时间23 min;葛根总黄酮对ABTS阳离子自由基清除率达81.7%,对DPPH自由基清除率最高达74.4%。结论建立的微波萃取总黄酮模型可靠,所得葛根总黄酮含量为11.74%,具有较强的抗氧化活性。     

9个不同产地菊茎叶中多类型资源性化学成分的分析与评价

目的:分析与评价不同产地菊茎叶中多类型资源性化学成分,为其资源化利用提供数据支撑。方法:采用紫外-可见分光光度法对不同产地菊茎叶中总黄酮、总酚、总多糖进行分析与评价;采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)对不同产地菊茎叶中单糖和寡糖组成及其含量进行分析与评价。结果:祁菊茎叶(QJ-JY)中总黄酮和总酚含量均最高,分别为(37.89±4.17)、(17.12±2.00) mg·g~(-1)。怀白菊茎叶(HBJ-JY)和射阳杭白菊茎叶(SYHBJ-JY)中总多糖平均含量较高,分别高达(70.84±1.08)、(70.32±2.90) mg·g~(-1)。菊茎叶中含有的单糖类成分主要是果糖和葡萄糖,双糖主要是蔗糖。其中果糖是菊茎叶中主要的糖类成分。福白菊茎叶(FBJ-JY)中果糖质量分数最高,为(94.22±6.20) mg·g~(-1)。相关性分析显示,总黄酮与总酚呈显著正相关性,中性多糖与总黄酮和总酚均呈负相关性,可溶性糖类成分之间均呈较强正相关性。结论:菊茎叶中含有丰富的总黄酮、总酚、可溶性总多糖、果糖和葡萄糖等资源性化学成分,且不同产地之间各类型成分的含量差异较为显著。研究结果为菊茎叶的精细化利用与产业化开发提供了科学依据。