PDE5基因siRNA对人阴茎海绵体平滑肌细胞cGMP的影响

目的:观察PDE5基因小干扰RNA(siRNA)对人阴茎海绵体平滑肌细胞环磷酸鸟苷(cGMP)的影响,为阴茎勃起功能障碍(ED)的基因治疗提供实验依据。方法:使用美国Amb ion公司提供的设计软件设计并合成人PDE5基因的siRNA序列,合成3对PDE5 siRNA和1对阴性对照siRNA,转染人阴茎海绵体平滑肌细胞,同时设定空白转染组为对照组。以酶联免疫法分别检测转染后不同时间(24、48、72、96 h)点海绵体平滑肌细胞内cGMP浓度变化,观察PDE5 siRNA对海绵体平滑肌细胞内cGMP的影响。结果:siRNA1、siRNA2和siRNA3转染后人阴茎海绵体平滑肌细胞cGMP水平显著高于阴性对照siRNA组和空白对照组(P<0.05),在转染后72 h最为显著,siRNA1、siRNA2、siRNA3、阴性对照siRNA和空白对照组cGMP测定值分别为:5.89±0.19、3.52±0.16、2.88±0.08、0.72±0.12、0.60±0.16 pmol/m l,siRNA1组明显高于siRNA2、siRNA3组(P<0.05)。结论:体外化学合成的PDE5 siRNA能有效地增加海绵体平滑肌细胞内cGMP的水平,不同序列siRNA增加cGMP水平的能力不同,为ED的基因治疗提供了新思路。     

骨形成蛋白2基因修饰的老年大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化能力的研究

目的观察年龄因素对骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cells, MSCs)成骨分化能力的影响;了解基因治疗对老年大鼠MSCs成骨分化能力的影响. 方法 1月龄(幼年组)、9月龄(成年组)及24月龄(老年组)雄性Wistar大鼠各6只,取MSCs经体外分离、培养及携带骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP-2)基因的腺病毒载体(Ad-BMP-2)转染后,定量检测BMP-2、碱性磷酸酶(alkaline phosphate,ALP)表达,以及成骨细胞标志性蛋白:Ⅰ型胶原、骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)和骨桥素(osteopontin, OPN)的表达.将转染的各组MSCs分别与磷酸三钙(tricalcium phosphate, TCP)复合后植入裸鼠体内,3周后取材,比较各组诱导异位成骨能力. 结果 ELISA检测表明BMP-2基因修饰的MSCs可以有效表达BMP-2,且表达量在各年龄组间差异无统计学意义(P>0.05);各组ALP于诱导后第9天达高峰,但组间差异均无统计学意义(P＞0.05);诱导后第7天,RT-PCR半定量检测示各组均有成骨细胞特征性蛋白,即:Ⅰ型胶原、OPN及BSP的明显表达,表达量在各组间差异无统计学意义(P>0.05);BMP-2基因转染的MSCs与TCP复合后可诱导裸鼠体内异位成骨,各组成骨量差异无统计学意义(P>0.05). 结论 BMP-2基因修饰的老年大鼠MSCs可以恢复成骨分化能力,基因治疗可能为老年性骨骼疾病提供一种新的治疗途径.     

健康的生活方式是防治高血压病的基础

高血压病严重威胁人们的生命与健康，而且发病率高，致死、致残率也高。据统计，我国高血压病的病例达1亿6千万，城市人口高血压的患病率达18．8％，实在是一个不容忽视的事实。高血压病的发生有一定的遗传因素。遗传因素己经先天确定，寄希望今后的基因治疗。但高血压的发病更与不良的生活方式密切相关，所以预防高血压病主要还得从建立健康的生活方式入手。     

hTERT反义cDNA对人脑胶质瘤细胞的抑制作用

目的探讨人端粒酶催化亚基(hTERT)反义cDNA(pAdeasy-hTERT)在体外对胶质瘤细胞生长的抑制作用。方法将腺病毒介导的pAdeasy-hTERT作用于人胶质瘤细胞系U251,用MTT法检测细胞存活率、端粒酶重复序列扩增法测定端粒酶活性、Westem杂交鉴定hTERT蛋白的表达、RT-PCR法检测hTERT cDNA水平、PCNA观察肿瘤细胞的凋亡情况以及用流式细胞仪对转染后肿瘤细胞的周期进行分析。结果pAdeasy-hTERT在体外明显抑制肿瘤细胞生长,降低端粒酶活性,抑制hTERT表达。结论pAdeasy-hTERT显著抑制人胶质瘤细胞生长,可成为恶性胶质瘤基因治疗的靶基因。     

慢性乙型肝炎基因治疗的若干进展

全球约有3.5亿乙肝病毒携带。我国约1．3亿，其中1／4为慢性乙型肝炎，易发展为肝硬化、肝癌。目前主要依靠干扰素和核苷类似物治疗。但目前各种药物对共价闭合环状DNA（cccDNA）的清除均无良好的效果，难以彻底清除病毒。因此，研究其他治疗策略，仍然具重要意义。基因治疗是指将外源基因通过某种途径导入细胞而发挥治疗作用，是极具潜力的抗乙肝病毒治疗策略。本仅对部分慢性乙型肝炎基因治疗研究作一简要介绍。     

真菌源性CD::UPRT联合基因治疗脑胶质瘤的实验研究

目的研究5-FC/CD：：UPRT联合基因治疗策略对胶质瘤细胞C6的杀伤效应。方法扩增yCD：：UPRT融合基因并构建含yCD：：UPRT基因的重组表达载体；载体转染包装细胞PT67,所获重组病毒转染胶质瘤细胞C6,筛选并鉴定阳性转基因克隆；用MTT法检测不同浓度5-FC对CD：：UPRT转基因细胞的杀伤效应。结果PCR法扩增出全长CD：：UPRT基因,经测序证实序列正确,重组逆转录病毒表达载体pLXSN-yCD：：UPRT经双酶切获目的条带,载体转染包装细胞获重组逆转录病毒(滴度达3．5×10~6CFU/ml)并转染C6,经筛选获得转基因阳性克隆C6-yCD：：UPRT细胞株,检测显示该细胞株有效表达目的基因。当5-FC终浓度≥10μmol/L时,实验组与对照组的细胞增殖力出现显著差异(P＜0．01),5-FC作用96h后电镜观察到凋亡小体。结论5-FC/yCD：：UPRT联合基因治疗策略对胶质瘤细胞C6有明显的杀伤作用。     

基因治疗在充血性心力衰竭的应用进展

充血性心力衰竭 ( CHF)是大多数心血管疾病的终末阶段 ,发生率和死亡率逐渐增加。近年来治疗心衰药物的开发和合理利用 ,使心衰病人的症状有所缓解 ,但均未能达到根治的目的。而基因治疗有望能完全纠正 CHF病人的心功能 ,现就近年来基因治疗充血性心力衰竭的研究进展综述如下。1　基因治疗方法学及进展 [1～ 4]1 .1　基因治疗的概念　基因治疗指将正常和野生型的基因插入靶细胞的染色质基因组中 ,以补充缺失基因或置换致病基因 ,从而产生新的表型的一种治疗方法。基因治疗必须具备目的基因、靶细胞以及将目的基因导入靶细胞的转基因方法…     

E1A对HER—2／neu过度表达肿瘤治疗作用的研究进展

卵巢癌、肺癌、乳腺癌等多种恶性肿瘤常伴有ＨＥＲ－２／ｎｅｕ癌基因的扩增与过度表达，并与肿瘤恶性程度的增高、转移能力增强、预后不良等关系密切。     

联合应用IL—2和IL—3的基因疗法增强骨髓移植后骨髓细胞毒活…

探讨联合应用成纤维细胞介导和ＩＬ－２和ＩＬ－３的基因疗法对骨髓移植后荷瘤小鼠抗肿瘤作用的效果及机理。将分别转梁ＩＬ－２基因及ＩＬ－３基因的ＮＩＨ３Ｔ３的细胞以单独或联合方式移植至ＢＭＴ的荷瘤小鼠腹腔内８ｄ后，取出小鼠骨髓细胞检测杀伤活性的变化以及ＩＬ－２受体的表达，并观察荷瘤小鼠的存活期。结果：ＩＬ－３基因治疗虽然可加速ＢＭＴ后造血重建过程，但对骨髓细胞的ＮＫ，ＬＡＫ活性具有一定的抑制作用；     

IGF家族在脑肿瘤中的研究进展

本文就胰岛素样生长因子与脑肿瘤发生发展的关系及其在反义基因治疗等方面的研究进展作一个介绍。