染料木黄酮对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制

本研究拟探讨染料木黄酮对前列腺癌细胞LNCaP和CWR22RV1的增殖、迁移和侵袭能力的影响。一、材料与方法1.材料:前列腺癌细胞株LNCaP和CWR22RV1(中国科学院上海生命科学研究院);Genistein(天津科瑞泰科技有限公司);RPMI 1640、胎牛血清(FBS)、胰蛋白酶(美国Gibco公司);E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin,Abcam公司);聚氰基丙烯酸正丁酯(BCA)试剂盒、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)上样缓冲液(×5)及蛋白质印迹法(Western blot)试剂盒(上海市碧云天生物公司);2.实验方法:采用噻唑蓝(MTT)实验、划痕实验和Transwell实验检测Genistein对细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。采用Western blot检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、CD44和Oct-4的表达水平。     

利用规律间隔成簇短回文重复序列/相关蛋白9系统敲减α2δ1对人肝癌细胞系Hep-12干性的影响

目的 通过规律间隔成簇短回文重复序列/相关蛋白9(CRISPR/Cas9)系统敲减人肝癌细胞系Hep12中电压依赖性钙离子通道 α2δ1的表达，观察α2δ1敲减后对肝癌细胞干性的影响。方法 设计3对靶向α2δ1的向导 (sgRNA)，长度为20 bp，构建到lenti CRISPRv2-puro载体上，然后在体外检测sgRNA切割活性，利用慢病毒包装系统包装含有sgRNA的重组质粒，将包装好的病毒感染Hep-12细胞，2 d后加入嘌呤霉素筛选。利用Western blotting验证α2δ1的敲减效果和干性相关基因的表达。通过成球实验检测其体外自我更新能力的变化。结果 测序结果显示，sgRNA成功插入载体质粒；体外切割实验显示，3条sgRNA均有切割活性；Western blotting结果显示，α2δ1基因的表达显著降低，干性相关基因B细胞特异性莫洛尼白血病病毒插入位点1(BMI1)和Nanog的表达显著被抑制；无血清培养基成球实验结果表明，敲减α2δ1导致Hep-12细胞的体外自我更新能力减弱。结论 利用CRISPR/Cas9技术成功构建敲除α2δ1基因的Hep-12细胞系；敲除α2δ1基因后能抑制Hep-12细胞肿瘤干细胞样特性。     

长春西部地区1258例过敏原特异性IgE检测结果分析

目的了解长春西部地区过敏原特异性IgE分布情况。方法应用免疫印迹法检测1 258例患者的19种吸入性及食物性过敏原特异性IgE抗体,统计过敏原结果及种类。结果 1 258例患者,检出至少一种特异性IgE阳性率为34.0%。男性阳性率为33.5%;女性阳性率为34.5%。男女间阳性率差异无统计学意义(P> 0.05)。吸入性过敏原阳性率由高到低依次为:普通豚草14.2%、艾蒿11.4%、屋尘螨/粉尘螨8.1%、猫毛3.8%、狗上皮2.4%、柳树/杨树/榆树2.1%,屋尘1.6%、蟑螂1.6%、点青霉/分枝孢霉/烟曲霉/交链孢霉1.2%、葎草1.1%。食物性过敏原阳性率由高到低依次为:鸡蛋白2.9%、鳕鱼/龙虾/扇贝2.7%、牛奶2.3%、黄豆1.9%、蟹1.5%、虾1.3%、牛肉1.2%、花生1.0%、羊肉0.8%。混合过敏达到了相当高的比例。结论长春西部地区吸入性过敏原以普通豚草、艾蒿和屋尘螨/粉尘螨为主;食物性过敏原以鸡蛋白、鳕鱼/龙虾/扇贝、牛奶为主,明确过敏原,对过敏性患者的预防和治疗有重大意义。     

蛋白激酶CβⅡ诱导上皮-间质转化及血管新生促进肝癌发展

目的 探讨蛋白激酶CβⅡ（PKCβⅡ）在肝细胞癌(HCC)发展中的作用机制。方法 免疫印迹法观察PKCβⅡ在肝细胞系L02和肝癌细胞系SK-hep1、HepG2、BEL-7404、7721、Hep3B和huh7中的表达，构建稳定高表达PKCβⅡ的细胞系，倒置相差显微镜下观察细胞形态变化，免疫荧光观察E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）表达的变化；通过免疫印迹法、实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和放线菌酮（CHX）追踪实验，观察PKCβⅡ调控E-cadherin、N-cadherin和Snail表达的分子机制；小室迁移和侵袭实验(transwell assay)以及裸鼠尾静脉注射观察PKCβⅡ对肝癌细胞转移的影响；成管实验观察PKCβⅡ对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）血管形成能力的影响，酶联免疫吸附法（ELISA）观察PKCβⅡ对肝癌细胞上清中血管内皮生长因子A（VEGFA）含量的影响。结果 PKCβⅡ在肝癌细胞系中的表达高于肝细胞系L02，PKCβⅡ促进肝癌细胞形态从鹅卵石样上皮细胞向梭行间质样细胞的转变，通过mRNA水平下调E-cadherin（P<0.05）和上调N-cadherin（P<0.01）的蛋白表达，通过翻译水平上调Snail蛋白表达，PKCβⅡ还促进了肝癌细胞的迁移、侵袭（P<0.01）以及VEGFA的分泌（P<0.01）和血管新生（P<0.01）。结论 蛋白激酶CβⅡ诱导上皮-间质转化及血管新生在肝癌的发展中有重要作用。     

病毒载量检测在102例HIV抗体不确定样本诊断中的应用

  目的  探讨病毒载量检测在HIV抗体不确定样本诊断中的应用价值。  方法  选取2016年1月至2019年12月期间昆明市第三人民医院门诊及住院102例HIV抗体不确定病例，1周内进行COBAS TaqMan HIV-1 Test v2.0病毒载量检测和CD4细胞计数，2～4周后随访蛋白印迹实验（western blotting，WB）检测，综合比对分析两种方法的检测结果。  结果  102例HIV抗体不确定病例，病毒载量检测结果大于20 IU/mL的84例样本随访均转阳，2例病毒载量检测结果低于检测下限20 IU/mL，随访结果最终为阳性，病毒载量检测结果为TND的16例病例，随访结果为阴性。  结论  高精度病毒载量检测对HIV抗体不确定结果能快速准确鉴别，缩短随访复查的时间，提早对病情准确判断，核酸检测作为补充实验可用于艾滋抗体确证试验不确定样本的判定。     

冠心病患者接受经皮冠状动脉介入治疗时分别使用低分子量肝素和普通肝素的疗效和安全性的差异比较

目的分析冠心病患者接受经皮冠状动脉介入治疗时分别使用低分子量肝素和普通肝素的疗效和安全性的差异。方法选取在本院就诊的冠心病患者126例,分为两组。均开展经皮冠状动脉介入治疗,分别予以低分子量肝素及普通肝素,分析组间治疗效果差异。结果观察组治疗后总有效率93.65%显著高于对照组的80.95%(P <0.05);观察组治疗后ACT显著低于对照组(P <0.05);观察组治疗后PCT、CRP、Hcy及IL-6水平显著低于对照组(P <0.05);观察组治疗后心脑血管不良事件发生稍低于对照组(P> 0.05);观察组治疗后不良反应发生率稍低于对照组(P> 0.05)。结论冠心病患者接受经皮冠状动脉介入治疗时分别使用低分子量肝素及普通肝素均可获得一定的临床疗效,而接受低分子量肝素后的临床疗效及安全性更好。     

桑色素-Cu2+配位分子印迹聚合物制备及其固相萃取应用

目的 制备桑色素-Cu²⁺配位分子印迹聚合物，对桑枝中桑色素进行分离富集。方法 在Cu²⁺存在下，丙烯酰胺为功能单体，在水-甲醇极性溶剂中制备桑色素-Cu²⁺配位分子印迹聚合物，以该聚合物为填料固相萃取桑枝中桑色素。结果 所制备配位分子印迹聚合物对桑色素具有较强的特异性、选择性吸附，最大吸附量82 μmol/g，远大于以氢键为作用力的传统印迹聚合物及非印迹聚合物；对桑色素结构类似物大豆素、儿茶素的分离因子分别为4.81、4.02。对比桑枝固相萃取淋洗液、洗脱液组成，所制备配位印迹聚合物对桑枝中桑色素表现出明显的富集效果。结论 制备的桑色素配位分子印迹聚合物环境适应性好，选择性吸附能力强，是适用于天然产物有效成分桑色素分离富集的良好材料。