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1.
植物凝集素的研究进展   总被引:11,自引:0,他引:11  
植物凝集素是一类具有高度特异性糖结合活性的蛋白,广泛分布于植物界。本文综述了植物凝集素近年来的研究概况,介绍了植物凝集素的分类、结构特性、功能、基因克隆及其应用。  相似文献
2.
 目的:用基因工程的方法获得人铜锌超氧化物歧化酶(hCu,Zn-SOD)的高产菌,通过发酵培养,最后纯化获得大量廉价的高纯度的hCu,Zn-SOD?方法:用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),扩增了人铜锌超氧化物歧化酶(hCu,Zn-SOD)的cDNA,将此正确测定的cDNA重组到分泌型表达载体pET-22b(+)中,重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中用5L全自动发酵罐表达hCu,Zn-SOD,表达产物用亲和层析一步法进行纯化?结果:hCu,Zn-SOD表达产物占菌体总蛋白的30%,发酵水平酶活力可达950u·ml-1培基,比活为1400u·mg-1,经亲和层析后纯度可达88%,活力回收率大于80%,比活大于5000u·mg-1?结论:我们开展人重组SOD的研究不仅大大丰富了应用酶学的内容,而且积极开展应用研究,实现产业化,意义重大?  相似文献
3.
丹参病毒病病原鉴定研究   总被引:7,自引:0,他引:7       下载免费PDF全文
目的 鉴定我国中草药丹参病毒病的病原及其种类。方法 从自然感染引起花叶、矮化、褪绿和斑驳的丹参植株上分离病毒病原,进行生物学接种、电镜观察、双抗体夹心酶联免疫吸附测定、逆转录聚合酶链式反应及基因克隆和序列分析。结果 通过指示植物症状、电镜下病毒粒体形状和血清学反应发现病毒分离物与黄瓜花叶病毒有较近的亲缘关系,初步将该病毒分离物鉴定为黄瓜花叶病毒。通过逆转录聚合酶链式反应及基因克隆和序列分析,证明该病毒分离物为一个黄瓜花叶病毒新株系。结论 感染丹参的病毒病原为黄瓜花叶病毒,这是首次在我国中草药丹参上发现黄瓜花叶病毒。  相似文献
4.
克隆肾虚证相关基因的思路与对策   总被引:5,自引:0,他引:5  
沈自尹院士是我国最早从事肾本质研究的学者 ,自 50年代开始从事肾阳虚证的研究 ,按照“异病同治”必有其物质基础的思路 ,循序探索 ,步步求证 ,取得一系列重大的成果 ,其研究发现尿 2 4h 1 7羟类固醇在肾阳虚证中有降低的趋向 ,其可以作为肾阳虚证的诊断标准之一。后来其研究又得出肾阳虚证与神经系统、内分泌系统、免疫系统等的改变密切相关 ,并发现肾阳虚证是垂体 -下丘脑 -性腺、甲状腺及肾上腺轴 3个靶腺轴功能紊乱 ,主要发病环节在下丘脑的初步结论 ,进一步以药测证 ,结果证明温补肾阳中药可直接提高下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素 (…  相似文献
5.
蚯蚓溶栓酶基因的克隆及非融合性表达   总被引:3,自引:0,他引:3       下载免费PDF全文
 目的克隆和表达我国特有的双胸蚓属蚯蚓(Lumbricus bimastus)体内一种具有纤溶活性的蛋白质。方法通过蛋白质N-末端测序、引物设计及合成、RT-PCR得其对应的cDNA,随后构建了pBV220-P30重组质粒,在大肠杆菌DH中进行非融合性表达,再经亲和色谱柱纯化复性,得到重组蚯蚓溶栓酶蛋白。结果 克隆cDNA全长888 bp,编码含242个氨基酸的成熟肽,SDS-PAGE电泳显示分子量在30×10-3左右,因此将其命名为P30,经活性测定,具有纤溶活性。结论P30为首次发现的新基因,在国际基因库的输入号为Genebank AF-109648,并获得国家专利,专利号为98102257.X。  相似文献
6.
水蛭抗凝多肽基因在大肠杆菌中的表达   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的:得到具有生物活性的水蛭素。方法:应用我国所产的吸血水蛭,通过逆转录酶和PCR技术,获取水蛭素基因,将此基因克隆进质粒pGEM-3Zf( )中,应用所得的水蛭素基因克隆进我国特有的表达载体pBV220中,并获得水蛭素的表达载体pBV—HV菌株。结果:该菌株通过发酵实验,已获得高效表达,并得到具有生物活性的水蛭素。结论:菌体粗提液经乙醇分级沉淀,分子筛柱层析和HPLC纯化得到纯品水蛭素,电泳结果证明是一条带。  相似文献
7.
人GPx1基因的克隆及其序列分析   总被引:2,自引:0,他引:2       下载免费PDF全文
 目的克隆中国人谷胱甘肽过氧化物酶(GPx1)的cDNA。方法用逆转录 聚合酶链反应(RT-PCR),以中国人胎盘组织总RNA为模板,扩增中国人谷胱甘肽过氧化物酶(GPx1)的cDNA,进行序列分析。计算机分析其二级结构并比较已发现的人GPx家族的5种GPx氨基酸序列。结果从中国人胎盘组织中克隆的GPx1基因,与国外文献报道相比,只有1个氨基酸残基发生变异,即leu22变为Val22,该变化不影响GPx1活性中心的结构;人GPx的硒结合区及活性中心区域的氨基酸序列是高度保守的。结论首次克隆了中国人体特异的胞质内GPx1基因,为其生物学活性及结构与功能的关系的研究创造了条件。  相似文献
8.
芍药肌动蛋白基因的克隆及表达分析   总被引:2,自引:2,他引:0       下载免费PDF全文
范丙友  李 芳  张文婷  史国安 《中草药》2013,44(15):2136-2142
目的 克隆芍药肌动蛋白(Actin)基因并应用RT-PCR技术分析Actin基因在芍药不同组织中的表达情况.方法 根据近缘物种Actin基因的保守序列设计一对PCR扩增引物,以“桃花飞雪”芍药根部总RNA反转录而成的cDNA为模板,采用RT-PCR的方法扩增出芍药Actin cDNA全长并克隆至pMD 18-T载体上,阳性克隆经菌落PCR、质粒PCR及酶切鉴定后进行测序.基于测序结果设计特异性PCR引物,应用RT-PCR技术分析Actin基因在芍药根、茎、花、叶不同组织中的表达情况.结果 测序结果表明芍药Actin基因全长l 134 bp序列,共编码377个氨基酸,GenBank登录号为JX310002;序列分析表明芍药Actin蛋白中存在3种肌动蛋白特征信号序列,与其他植物肌动蛋白氨基酸同源性达99%;基于同源模建预测的3D结构中含有4个结构域;生物信息学软件预测芍药肌动蛋白的相对分子质量为4.17×104,等电点(pI)为5.31,是一个定位于胞液、不含跨膜域、不含信号肽分子的亲水性、稳定蛋白;半定量RT-PCR技术分析表明Actin基因在芍药根、茎、叶、花组织中的表达量保持恒定.结论 首次从芍药中克隆了Actin基因,半定量RT-PCR表达分析结果表明Actin基因适合作为芍药功能基因表达分析的内标基因,为有效利用该基因奠定了基础.  相似文献
9.
球药隔重楼HMGR功能基因保守区序列的克隆与分析   总被引:2,自引:2,他引:0       下载免费PDF全文
目的研究球药隔重楼次生代谢产物甾体皂苷甲羟戊酸合成途径的一个关键酶即3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR)的基因,有助于对活性物质的合成进行调控,从而提高产量。方法比较NCBI上公布的11种植物11条HMGR基因mRNA的同源保守区域,设计简并引物,利用RT-PCR技术,以球药隔重楼新鲜茎总RNA反转录的cDNA为模板成功扩增出404 bp的保守区基因片段。结果序列分析表明,球药隔重楼HMGR基因片段与其他7种植物的一致性达到76%~81%,球药隔重楼HMGR氨基酸片段与其他植物有较高的同源性,经Genbank查询为一新的cDNA。结论通过蛋白质特征区、保守区以及进化树分析,初步确定该基因为HMGR基因,这是首次从药用植物球药隔重楼中克隆得到甲羟戊酸途径关键酶HMGR的基因片段,也是百合科植物首次获得的HMGR基因。  相似文献
10.
膜荚黄芪苯丙氨酸解氨酶基因的克隆与序列分析   总被引:2,自引:2,他引:0       下载免费PDF全文
目的对膜荚黄芪苯丙氨酸解氨酶基因进行克隆及序列分析。方法应用RT-PCR和cDNA末端快速扩增法,以膜荚黄芪根总RNA为模板克隆PAL基因。结果所克隆的膜荚黄芪苯丙氨酸解氨酶基因命名为AmPAL,Genbank登录号为EF567076。序列分析表明,AmPAL全长为2650bp,含有一个完整的2154bp开放读码框。AmPAL是植物苯丙氨酸解氨酶家族的一个新成员,推测其编码718个氨基酸的多肽,相对分子质量为7.805×104,等电点为5.96,与豆科植物已知的PAL氨基酸序列的同源并且相似性都大于80%。结论首次成功地从膜荚黄芪中克隆出了PAL基因,为有效利用该基因调控药用植物苯丙烷代谢途径奠定了基础。  相似文献
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