双重实时荧光PCR快速鉴别人参和西洋参＊

目的 建立一种能够快速鉴定人参和西洋参的双重实时荧光PCR方法。方法 通过对人参属及其近似种基因序列的分析比对，设计特异性的引物探针，建立双重实时荧光PCR检测方法。PCR反应体系为Premix Ex Taq （Probe qPCR） 10 μL，人参上下游引物各0.5 μL，西洋参上下游引物各0.3 μL，人参与西洋参特异性探针各0.4 μL，DNA模板2 μL，灭菌去离子水补至20 μL。反应条件为95℃预变性30 s；然后以95℃变性5 s，60℃退火延伸30 s进行40个循环。应用该方法测试了27份DNA样品，包括7份人参、6份西洋参、4份人参与西洋参混合样、10份其他人参属样品及其他常见中药材样品的DNA，以确定该方法的特异性。将人参与西洋参样品DNA混合后10倍稀释成不同浓度后进行检测，用以确定该方法的灵敏度。结果 人参及西洋参样品均在特定的荧光通道下出现典型的阳性扩增曲线，人参与西洋参混合样品均同时出现两条阳性扩增曲线，其它对照样品及空白对照均没有出现阳性扩增曲线。灵敏度检测结果显示该方法检测人参及西洋参的最低检测限均为2 pg DNA/反应。结论 本实验建立的双重实时荧光PCR方法能够同时快速、准确、灵敏地鉴别出人参和西洋参。     

基于层次分析法（AHP）的保健食品原料评价体系构建及分析

目的建立保健食品原料评价体系(Functional Food Crude Materials Evaluation System,FUFMES),为保健食品原料目录排名提供科学依据与技术保障。方法首先,利用文献调研和多轮专家访谈方法筛选FUFMES的指标并确定其层级关系;第二,使用层次分析法(Analytic Hierarchy Process,AHP)计算指标权重,具体方法是依据专家打分构建判断矩阵,利用R语言进行一致性检验与最大特征根检验,得出各级指标权重;第三,使用极值法计算原料的单个指标值;第四,利用线性加权综合法得到每种原料的评价指数并据此进行排名;最后,将获得的分析结果与专家评价结果进行比较。结果 FUFMES包括6个一级指标、39个二级指标、11个三级指标。利用FUFMES对9种保健食品原料进行评价,获得的评价指数依次是:西洋参(0.49)、人参(0.48)、银杏叶(0.21)、灵芝孢子粉(0.08)、鱼油(0.06)、螺旋藻(0.03)、辅酶Q10(0.02)、褪黑素(0.01)、大蒜油(-0.03)。基于该评价指数的排名结果与专家评价结果显示了较高一致性。结论构建了科学、完整的FUFMES,FUFMES将成为保健食品原料目录评价与排名的有力工具,为推进保健食品原料备案制提供科学依据与技术保障。     

三七片DNA条形码分子鉴定及方法学考察

目的为研究DNA条形码技术在中成药鉴定中的应用,以三七片为研究对象,对方法的适用性、专属性与精密度进行考察。方法收集15批次市售三七片样品,考察三七片DNA提取条件,并对"中药材DNA条形码分子鉴定法指导原则"中PCR扩增、序列获得、结果判定等方法适用性进行确认;收集三七、人参、西洋参,制作三七片及其掺伪品,考察方法的专属性和重现性。结果三七片取样量100 mg,56℃水浴8 h所获得DNA的质量浓度平均值为60.7 ng/μL,PCR扩增、序列获得和结果判定均可获成功;三七、人参和西洋参的ITS2序列长度均为230bp,三七与人参、三七与西洋参的序列间均存在7个稳定的SNP位点,自制三七片和掺伪三七片均可成功获得ITS2序列,不同比例三七与人参、三七与西洋参的测序峰图在SNP位点处呈现相应峰高比的SNP套峰具备专属性;重复性、中间精密度和重现性考察符合《中国药典》2015年版(通则9101)相关要求。结论 ITS2序列作为DNA条形码能够稳定、准确鉴定三七片的原料药材,具备良好的专属性和精密度,三七片DNA条形码分子鉴定法将为保障三七片临床用药安全提供新的技术手段,并对《中国药典》其他收载单方制剂的鉴定提供参考。     

不同炮制时间下的西洋红参对免疫力低下小鼠免疫功能的影响

目的:探讨不同炮制时间下西洋红参水提物对对免疫力低下小鼠免疫功能的影响。方法:清洁级小鼠70只,随机平均分为空白组、阳性药组、模型组、2 h炮制组、4 h炮制组、6 h炮制组及生药组,每天分别给予等量生理盐水、左旋咪唑(30 mg/kg)、2 h炮制的西洋红参水提物(200 mg/kg)、4 h炮制的西洋红参水提物(200 mg/kg)、6 h炮制的西洋红参水提物(200 mg/kg)及生药水提物(200 mg/kg)。对除空白组外小鼠采用环磷酰胺(50 mg/kg)腹腔给药诱导小鼠免疫低下模型。分别检测脾脏及胸腺指数;应用碳廓清实验、Con A与LPS诱导小鼠脾淋巴细胞增殖反应;检测各组小鼠T淋巴细胞亚群值。结果:各种炮制时间的西洋红参及生药均可不同程度的提高免疫低下小鼠的脾脏及胸腺指数、廓清指数、吞噬指数、脾淋巴细胞增殖反应、CD4~+及CD8~+细胞数,且可升高CD4~+/CD8~+细胞比值。在各炮制组中,2 h炮制的西洋红参水提物免疫调节功能优于其余炮制组及生药组。结论:不同炮制时间的西洋红参水提物对免疫力低下小鼠的免疫调节作用均不相同,其中2 h炮制时间活性最佳,值得进行深入研究。     

铁皮石斛茶缓解小鼠体力疲劳作用的研究

目的研究铁皮石斛茶对小鼠的抗疲劳保健功能。方法给小鼠灌胃给药设低、中、高3个剂量组,同时设立对照组,观察小鼠负重游泳时间、肝糖原含量、血乳酸、尿素等指标的变化。结果铁皮石斛茶能明显延长小鼠负重游泳时间,显著增加小鼠肝糖原含量,减少小鼠运动前后血乳酸曲线下面积。结论铁皮石斛茶具有缓解体力疲劳功能。     

西洋参与其混淆品人参的比较鉴别

目的鉴别西洋参与人参。方法从来源、性状、显微、薄层色谱、紫外光谱等方面加以鉴别。结果西洋参为五加科植物西洋参Panax quinque folium L.的根,人参为五加科植物人参Panax ginseng C.A.Mey.的根,二者外形相似,但功效存在差异。西洋参和人参的性状、显微鉴别存在明显差异,薄层色谱中西洋参无人参的特征性斑点Rf,紫外光谱中西洋参在254~274 nm波长范围内存在人参没有的肩峰。结论虽然西洋参和人参的外形相似,但深入鉴别仍可发现两者明显不同,日常使用和采购西洋参时应仔细鉴别。     

西洋参根腐病与人参皂苷积累关系

目的探究西洋参Panax quinquefolium L.根腐病与人参皂苷含有量积累之间的关系。方法以陕西汉中留坝采集的1～3年生健康和患根腐病西洋参及其根际土壤为材料,检测土壤的理化性质与微量元素含有量并HPLC法测定西洋参须根、主根和根际土壤中人参皂苷(Rg_1、Re、Rb_1、Rd)含有量及其变化规律。结果同一年份健康与患病参土壤各指标、参根及根际土壤中各皂苷含有量变化不明显,但随西洋参生长年份的增长无论是健康还是患病参,土壤pH和Mn、Ni、Zn、Cu的含有量均呈明显下降趋势。须根中,健康参Rb_1与总皂苷含有量逐年均明显增加,健康参中Re与患病参中Rg_1、Re、Rb_1和总皂苷含有量均呈先升高后降低趋势;主根中,健康与患病参中Re和Rb_1与须根中变化规律一致,而Rg_1逐年降低,Rd逐年升高,总皂苷含有量则先升高后降低。健康参根际土壤中Rb_1、Rd和总皂苷含有量逐年下降,而患病组变化不显著。结论西洋参根腐病可能与人参皂苷积累差异有关。     

西洋参饮片治疗慢性疲劳综合征的有效性

目的观察西洋参饮片治疗慢性疲劳综合征的有效性。方法选择本院2008年12月～2011年11月收治的慢性疲劳综合征患者120例,随机分为对照组和观察组各60例。全部患者均给予口服金匮肾气丸,观察组患者在此基础上给予西洋参饮片代茶饮,连续治疗30d,观察并比较两组患者临床治疗效果。结果治疗后观察组总有效率明显高于对照组,两组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。两组患者治疗后FS-14积分均明显下降,其中观察组下降程度明显优于对照组,两组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论采用西洋参饮片治疗慢性疲劳综合征疗效确切,在临床工作中可酌情应用。     

西洋参茎叶总皂苷减轻模拟失重导致心肌重塑的作用研究

目的探讨西洋参茎叶总皂苷(PQS)对模拟失重导致心肌重塑的保护作用及其机制。方法 48只雄性SD大鼠随机分为正常组、尾吊组、PQS组、尾吊+PQS组,每组12只。尾吊8周后,检测心脏结构和功能、血清生化标记物和心肌细胞凋亡。基于PQS的6种主要成分进行了网络药理学预测。采用Western印迹法检测AMPK,ERK1/2和CaMKII/HDAC4信号通路相关蛋白的表达。结果 PQS能够降低模拟失重导致的血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)和缺血修饰蛋白(IMA)水平,改善心脏结构和功能,减少心肌细胞凋亡。结论 PQS减轻模拟失重导致的心肌重塑,其作用机制可能与AMPK通路被激活、Erk1/2和CaMKII/HDAC4通路被抑制有关。     

西洋参茎叶总皂苷对大鼠局灶性脑缺血损伤及其炎症反应的影响

目的探明西洋参茎叶总皂苷对大鼠局灶性脑缺血损伤炎症反应的影响。方法从西洋参茎叶中提取分离得到茎叶总皂苷。Wistar大鼠60只,随机分为假手术组、模型组、阳性药尼莫地平组、西洋参总皂苷(0.18、0.36、0.72 g·kg-1)组6组,采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血损伤模型。造模前,西洋参茎叶总皂苷治疗组采用灌胃给药的方式,每日1次,连续7 d。局灶性脑缺血24 h后进行大鼠神经功能损伤评分,TTC染色法观察脑梗死面积,干湿重法测定脑含水量,ELISA法检测大鼠脑组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)的含量。结果与模型组比较,西洋参总皂苷各个剂量组均能在一定程度上改善大鼠局灶性脑缺血损伤后神经缺陷症状,明显减小脑梗死体积,降低脑组织含水量,抑制脑组织中TNF-α、IL-1β、ICAM-1和VCAM-1的表达水平。结论西洋参茎叶总皂苷可通过降低TNF-α、IL-1β、ICAM-1和VCAM-1炎性细胞因子的表达,减缓炎症反应,减轻脑水肿,降低大鼠脑神经功能损伤程度,进而对局灶性脑缺血损伤起到一定的保护作用。