补骨脂素抗增生性瘢痕作用机制研究

目的探讨补骨脂素抗增生性瘢痕的作用机制。方法体外培养成纤维细胞,按随机数字表法分为正常组(培养正常成纤维细胞)、瘢痕组(培养增生性瘢痕成纤维细胞)、TGF-β1组(10 ng/ml TGF-β1处理增生性瘢痕成纤维细胞5 min^12 h)、Smurf2 RNA干扰组[Smad泛素化调节因子2(Smad ubiquitin regulatory factor2,Smurf2)siRNA转染增生性瘢痕成纤维细胞72 h]、补骨脂素组(10μmol/L补骨脂素处理增生性瘢痕成纤维细胞继续培养72 h)、补骨脂素+TGF-β1组(增生性瘢痕成纤维细胞加入补骨脂素培养72 h后加入TGF-β1培养6 h)。采用Western blot法检测Smurf2、α-平滑肌肌动蛋白(α-actin SMA,α-SMA)蛋白表达;RT-PCR法检测Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达;ELISA法检测TGF-β1蛋白分泌。结果与正常组比较,瘢痕组Smurf2蛋白[(0.83±0.08)比(0.38±0.07)]表达增加(P<0.05);与瘢痕组比较,Smurf2 RNA干扰组TGF-β1[(2.2±0.18)比(4.2±0.47)]表达降低(P<0.05);TGF-β1组Smurf2[(0.71±0.06)比(0.42±0.04)]、α-SMA[(1.42±0.12)比(0.91±0.09)]蛋白表达增加(P<0.05),Ⅰ型胶原蛋白mRNA[(0.72±0.09)比(0.41±0.07)]表达增加(P<0.05);补骨脂素组Smurf2[(0.05±0.01)比(0.42±0.04)]、α-SMA[(0.71±0.07)比(0.91±0.09)]蛋白表达降低(P<0.05),Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达[(0.12±0.04)比(0.41±0.07)]降低(P<0.05)。结论补骨脂素可能通过TGF-β1/Smurf2信号通路抑制α-SMA蛋白表达,从而降低Ⅰ型胶原蛋白表达,起到抑制瘢痕形成的作用。     

异补骨脂素不同时间给药对大鼠肝脏功能和转运体的影响

目的探讨补骨脂活性成分异补骨脂素不同时间灌胃给药对大鼠肝脏功能和胆汁酸转运体的影响。方法 SD大鼠随机分为对照组、异补骨脂素60 mg·kg~(-1)灌胃给药1 d组、3 d组以及7 d组。实验结束后,检测大鼠的体质量和肝重;试剂盒检测大鼠血清中ALT、AST、ALP、TBA、TC、TG、TBIL的含量;real-time PCR法检测大鼠肝脏组织中胆汁酸转运体BSEP、NTCP、MRP2、MRP4、MDR1、ABCG5、ABCG8、OSTα的水平。结果与对照组相比,异补骨脂素能明显增加肝脏的重量,不同给药时间均能引起肝脏系数的增加;异补骨脂素给药后,大鼠血清中ALT、 AST、TBA、TG、TBIL的含量明显增加,ALP没有明显变化,TC明显降低,且AST的水平在异补骨脂素灌胃给药1 d之后即有明显升高;异补骨脂素灌胃给药后,肝脏中BSEP、NTCP、MRP2、MDR1、ABCG5、ABCG8、OSTαmRNA的水平明显下降,MRP4 mRNA的水平没有明显变化。结论异补骨脂素灌胃给药1～3 d即造成肝脏的损伤作用,其作用机制可能与干扰胆汁酸转运体有关。     

补骨脂素对成骨细胞Caspase-3、8、9蛋白和Bcl-2、Bax、Bid蛋白的调控机制

摘要：目的 分析补骨脂素对成骨细胞Caspase-3、8、9蛋白和Bcl-2、Bax、Bid蛋白的调控,探讨细胞凋亡信号途径和骨质疏松症的相关关系。方法 选用1日龄SD大鼠获取原代的成骨细胞体外培养,细胞分成观察组、对照组和正常组,观察组的培养基中添加补骨脂素,对照组的培养基中添加雌二醇,正常组常规培养,采用MTT比色法检测补骨脂素的最佳浓度及最佳时间,荧光定量PCR法检测各组Caspase-3、8、9蛋白和Bcl-2、Bax、Bid蛋白的表达。结果 在补骨脂素的最佳浓度及最佳时间方面,第8天时成骨细胞的OD值达最大值,而且以5umol/L显著;对于Bax蛋白,与正常组比较,对照组更能显著下调Bax蛋白的表达（P<0.05）。对于Bid蛋白,观察组较对照组更能上调该蛋白的表达量（P<0.05）。对于Bcl-2蛋白,观察组的相对表达量高于对照组和正常组（P<0.05）,而且观察组的Bcl-2/Bax的相对量也高于对照组（P<0.05）。在Caspase表达方面,相对于正常组,观察组和对照组均能显著下调Caspase-3和Caspase-9蛋白的表达量（P<0.05）,而且观察组比对照组更能下调Caspase-9蛋白的表达（P<0.05）。结论 补骨脂素可以上调成骨细胞内Bid蛋白和Bcl-2蛋白的表达,结合补骨脂素对成骨细胞的增殖情况,提示补骨脂素有可能以上调抑制凋亡蛋白为主,而且补骨脂素可能通过线粒体途径进行细胞凋亡的调控。     

补骨脂素对粘液表皮样癌的抑制作用

补骨脂素(Psoralenum)是从补骨脂中提出的一种有效成分,原用于治疗白癜风、斑秃、牛皮癣等皮肤病。近年来有学者报道补骨脂素对小鼠肉瘸、艾氏腹水癌、Hela细胞等有抑制作用,治疗瘤样皮肤病也取得很好效果。我们以前的研究表明补骨脂素对体外培养的人粘液表皮样癌MEC-1系细胞有生长抑制作用,其半抑制浓度为8595ng/ml,相对抗肿瘤活性值为15,本文报道补骨脂素对MEC-1细胞DNA含量、超微结构的影响,以及对MEC-1细胞裸鼠移植瘤的治疗作用。     

HPLC-DAD法同时测定固本益肠片中5种成分含量

目的 建立HPLC-DAD同时测定固本益肠片中儿茶素、表儿茶素、芍药苷、补骨脂素及异补骨脂素含量的方法并为监测该药风险成分提供参考。方法 色谱柱采用依利特Hypersil ODS2柱(4.6mm×300mm,5μm);流动相：乙腈(B)-水(A),梯度洗脱,检测波长：240nm;流速：1.0mL/min;柱温：30℃。结果 5种成分均能达到基线分离,且在相应范围内线性关系良好;儿茶素、表儿茶素、芍药苷、补骨脂素及异补骨脂素的平均加样回收率分别为98.22%、96.93%、101.46%、98.60%和100.24%,RSD分别为1.5%、2.1%、2.0%、1.4%和1.0%(n=6)。结论 该方法简便易行,稳定高效,可为进一步完善固本益肠片质量控制标准,并为监测该药风险成分提供参考。     

补骨脂素对骨质疏松小鼠骨折修复的影响

目的观察补骨脂素对骨质疏松小鼠骨折修复的影响。方法 20只雌性C57BL/6小鼠在建立骨质疏松模型后,随机分为2组:模型组和补骨脂素组,每组10只。所有小鼠在右侧股骨中段建立横形骨折,骨折术后第1天,补骨脂素组按20 mg/kg/d体重量灌胃,每天一次,连续21天,模型组以等剂量生理盐水灌胃。术后21天处死,骨折标本行钼靶X线、组织学和生物力学等检测方法。结果骨折术后第21天,补骨脂素组较模型组骨痂密度变高、骨折线模糊,两组骨痂生成面积比较无明显差异。补骨脂素组软骨细胞数量较模型组明显减少,成骨细胞增生较活跃,软骨骨化形成编织骨。补骨脂素组破骨细胞密度更稀疏,2组中破骨细胞形态和细胞核数量见明显差异。补骨脂素组最大载荷比模型组明显升高。结论补骨脂素作为一种植物雌激素能有效改善骨质疏松小鼠骨痂愈合质量和生物力学性能。     

补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素测定

目的根据《欧洲药典》质量标准要求,改进补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的HPLC测定方法。方法补骨脂以甲醇提取,YMC-Triart C18色谱柱(4 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-水(35∶65),等度洗脱,体积流量为1 m L/min,检测波长为246 nm。结果补骨脂素和异补骨脂素在10~100μg/m L范围内成线性,并在Merck-Li Chrospher RP-18(4 mm×250 mm,5μm)和Waters Spherisorb ODS2 column(4 mm×250 mm,5μm)色谱柱上可重复实验结果,两成分的定量测定结果偏差分别为1.50%和1.33%。7个省和缅甸产共16批补骨脂样品中的补骨脂素和异补骨脂素含有量在1.11%(云南)和0.29%(广西)之间。结论建立的方法可符合欧盟植物药申报专属性、精密度(日间、日内)、准确度的要求。     

补骨脂素对胃癌细胞株BGC-803增殖和凋亡的影响及其机制

目的研究补骨脂素对人胃癌BGC-803细胞的增殖和凋亡的影响并探讨其机制。方法以不同浓度的补骨脂素作用于体外培养的胃癌细胞BGC-803,不同时间后,采用MTT法检测药物对肿瘤细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,激光共聚焦显微镜观察F-actin形态学变化。结果补骨脂素对人胃癌细胞株BGC-803具有明显的生长抑制作用,并与药物剂量及处理时间成正相关。补骨脂素作用于细胞24、48、72 h后的IC50分别为92.6、25.54、7.68μg/m L。流式细胞仪检测结果显示给药组早期凋亡的百分率显著高于对照组,细胞骨架蛋白F-actin呈现解聚状态。结论:补骨脂素可抑制胃癌BGC-803细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡,其机制可能是药物引起了细胞骨架蛋白F-actin解聚。     

补肾中药有效成分对SAMP8小鼠氧化应激水平的影响

[目的]观察补肾中药有效成分补骨脂素、齐墩果酸、淫羊藿苷对快速老化(SAMP8)小鼠氧化应激水平的影响。[方法]选取9月龄雄性SMAP8小鼠,采用随机数字表法随机分为补骨脂素组、齐墩果酸组、淫羊藿苷组及模型组。同时另取同龄段的抗快速衰老亚系1(SAMR1)小鼠作为对照组。治疗组分别给予补骨脂素(50 mg/kg)、齐墩果酸(50 mg/kg)、淫羊藿苷(20 mg/kg)灌胃,对照组与模型组均给予等量的生理盐水灌胃,每次0.3 m L,每日1次,连续灌胃4周后断头取脑。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测SMAP8小鼠大脑皮质中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量。[结果]SMAP8小鼠大脑皮质中SOD、CAT和GSH-Px活性较同龄SAMR1小鼠明显降低,模型组大脑皮质SOD、CAT和GSH-Px活性均低于对照组,经4周治疗后,治疗组大脑皮质中SOD、CAT和GSH-Px活性均高于模型组,对于以上指标,补骨脂素、齐墩果酸、淫羊藿苷3种组间比较差异无统计学意义(P0.05)。[结论]补肾中药对SAMP8的氧化应激损伤具有一定保护作用,从而可以达到防治老年性痴呆的作用。     

切换波长HPLC法同时测定大鼠体内补骨脂3种有效成分

目的:建立同时测定大鼠血清、肝脏、肾脏中补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂酚含量的方法。方法:大鼠灌胃补骨脂药材粉末(3.0 g/kg)30 min后取血清、肝脏、肾脏样品,以切换波长高效液相色谱法测定血清、肝脏、肾脏样品中补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂酚质量浓度。色谱柱为Agilent ODS-C18(150 mm×4.6 mm,3.5μm),流动相为0.1%甲酸水-乙腈(梯度洗脱),流速为1.0ml/min,柱温为30℃,检测波长为295 nm(氯霉素)、246 nm(补骨脂素、异补骨脂素)、260 nm(补骨脂酚)。结果:在大鼠血清、肝脏匀浆液、肾脏匀浆液中,补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂酚质量浓度均在0.1¹0.0 mg/L范围内同各指标成分与内标物峰面积之比呈良好线性关系,精密度的RSD<7%,加样回收率的RSD<5%。结论:该方法简便、准确,可用于同时测定给药后血清、肝脏、肾脏中补骨脂素、异补骨脂素和补骨脂酚的含量。