菊花总黄酮含药血清对干眼细胞模型AR、NF-κB磷酸化蛋白及TGF-β1表达的影响＊

目的 观察菊花总黄酮在体外条件下对泪腺上皮细胞中雄激素受体（Androgen Receptor，AR）的调控作用及对下游的核因子κB（Nuclear Factor kappa B，NF-κB）、转化生长因子-β1（transforming growth factor-beta1，TGF-β1）的表达影响。方法 以过氧化氢（H₂O₂）诱导泪腺上皮细胞凋亡，建立细胞模型，设立无雄激素培养空白对照组、含雄激素培养对照组、无雄激素培养黄酮治疗组。以MTT法摸索含药血清最佳干预加入量；免疫印迹实验（Western Blot）以及实时荧光定量PCR法（Quantitative Real-Time PCR，qPCR）检测泪腺上皮细胞中AR、NF-κB及TGF-β1的表达情况；并应用雄激素受体阻断剂氟他胺进行AR阻断后再次检测上述指标 。结果 MTT法检测后计算得出含药血清干预细胞的最终浓度为13.2%；无雄激素培养黄酮治疗组及含雄激素培养对照组中AR、NF-κB及TGF-β1的表达增强，与空白对照组对比有显著差异（P<0.01）；无雄激素培养黄酮治疗组中NF-κB表达量比含雄激素培养对照组表达量低，两者间的差异有统计学意义。氟他胺及含药血清干预后，无雄激素培养黄酮治疗组及含雄激素培养对照组中AR及NF-κB的表达未见提高，无统计学意义。结论 菊花总黄酮对泪腺上皮细胞可能存在拟雄激素效应，从而使AR、NF-κB表达增加，并通过上调TGF-β1的表达，可能起到在泪腺局部的抗炎作用。     

血人参总黄酮纯化工艺的优化及其对酪氨酸酶的抑制作用研究＊

目的 优化大孔吸附树脂分离纯化血人参总黄酮的工艺条件，研究血人参总黄酮对酪氨酸酶的抑制作用。方法 以吸附率、解吸率等为考察指标，采用静态吸附-解吸试验对6种不同型号的大孔吸附树脂进行筛选，优选最佳的树脂型号。采用单因素试验考察上样液pH、上样液浓度、上样体积、上样体积流量、洗脱溶剂、洗脱液体积流量、洗脱剂体积对血人参总黄酮纯化的影响，确定最佳纯化工艺；以L-酪氨酸、L-多巴为底物，测定血人参总黄酮对酪氨酸单酚酶和二酚酶的抑制作用，并对其抑制机理和抑制类型进行分析。结果 AB-8型大孔吸附树脂对血人参总黄酮的分离纯化效果最好。最佳纯化工艺参数为：上样液pH为4、上样体积为70 mL（4.7 BV）、上样体积流量为1 mL·min^-1、上样液浓度为5.38 mg·mL^-1、洗脱溶剂为70%乙醇、洗脱剂体积流量为3 mL·min^-1、洗脱剂体积为120 mL（8 BV），血人参总黄酮对酪氨酸单酚酶和二酚酶均有抑制作用，其最大半数抑制浓度分别为88.78 mg·L^-1和36.46 mg·L^-1，对二酚酶的抑制类型为可逆非竞争性抑制。结论 AB-8型大孔吸附树脂可用于纯化血人参总黄酮，纯化后血人参总黄酮的纯度为46.01%，建立的工艺条件稳定可靠。纯化后的血人参总黄酮对酪氨酸酶有抑制作用，抑制类型为可逆非竞争性抑制。     

臭茉莉叶总黄酮提取工艺优化及月周期变化研究

目的:采用超声辅助正交试验法优化臭茉莉叶总黄酮的提取工艺,并进一步研究臭茉莉叶中总黄酮1年内每月含量变化趋势,探讨臭茉莉叶最佳采收时间。方法:以提取液中总黄酮含量为指标,选择乙醇浓度(%)、超声时间(min)、料液比、提取温度(℃)等为考察因素,采用正交试验法L9(34)确定臭茉莉叶提取液中总黄酮的最优工艺。结果:臭茉莉叶所含总黄酮最优提取工艺条件:乙醇浓度70%、超声时间60min、料液比1∶25、提取温度50℃。3月份总黄酮/药材量是0.0235mg·g-1为最高。结论:该提取工艺快捷以及操作简便,适用于臭茉莉叶总黄酮的提取。结合总黄酮月周期变化规律,可以确定1年中5月份和7月份为最佳采摘期。     

菊花总黄酮含药血浆对干眼症细胞模型Bax mRNA及Bcl-2mRNA表达的影响

目的观察菊花总黄酮含药血浆对大鼠泪腺上皮细胞干眼症模型中Bax mRNA及Bcl-2 mRNA表达的影响。方法将培养生长状态良好的大鼠泪腺上皮细胞随机分为无雄激素培养组(空白组)、雄激素培养组(雄激素组)、无雄激素培养黄酮组(菊花总黄酮组),分别加入空白血浆、丙酸睾酮、菊花总黄酮含药血浆干预48 h,然后加入100μmol/L H_2O_2继续培养60 min诱导细胞凋亡。RT-PCR法检测泪腺上皮细胞中Bax mRNA及Bcl-2 mRNA的表达情况。结果雄激素组和菊花总黄酮组Bax mRNA表达量均明显低于空白组(P均0.05),Bcl-2 mRNA表达量均明显高于空白组(P均0.05),雄激素组和菊花总黄酮组比较差异均无统计学意义(P均0.05)。结论菊花总黄酮含药血浆有可能通过抑制泪腺上皮细胞中Bax mRNA表达及促进Bcl-2 mRNA表达的途径,起到抑制泪腺上皮细胞凋亡的作用。     

麦芽4个化学部位通过多巴胺D2受体对产后缺乳模型大鼠催乳作用研究

目的基于多巴胺D2受体(DRD2),考察小剂量麦芽4个化学部位的催乳作用,初步探讨小剂量麦芽生物碱对产后缺乳模型大鼠泌乳素(PRL)分泌的调节机制。方法采用ig甲磺酸溴隐亭方法制备缺乳大鼠模型,造模成功后,各给药组均ig给予相应的药物,应用ELISA法检测各组大鼠血清PRL、雌二醇(E_2)、孕酮(P)水平;HE染色观察各组大鼠乳腺组织病理改变;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组大鼠脑垂体中泌乳素受体及DRD2 mRNA表达。结果与对照组比较,模型组大鼠血清中PRL、P及E_2水平、脑垂体PRL mRNA表达水平显著降低;脑垂体DRD2 mRNA表达水平显著升高。与模型组比较,麦芽总生物碱组大鼠乳腺小叶体积明显增加,导管明显扩张,且导管及腺泡内含有大量乳汁。麦芽总生物碱明显增加模型大鼠血清中PRL、P、E_2水平及脑垂体PRL mRNA表达水平,降低脑垂体DRD2 mRNA表达水平。结论麦芽催乳的主要药效物质为总生物碱,其作用机制可能与促进PRL分泌,增加脑垂体PRL受体、降低DRD2 mRNA表达水平有关。     

荔枝核总黄酮对大鼠肝星状细胞增殖抑制作用及对PPARγ、C-ski表达的影响

目的:研究荔枝核总黄酮(total flavone from litchi,TFL)对大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)增殖的抑制作用及对过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome prolif-erator-activated receptor-γ,PPAR-γ)、C-ski表达的影响,探究荔枝核总黄酮抗肝纤维化的可能作用机制。方法:体外培养HSC,分为空白对照组、荔枝核总黄酮浓度20 mg·L~(-1)组、40 mg·L~(-1)组、80 mg·L~(-1)组、160 mg·L~(-1)组、200 mg·L~(-1)组,分别干预48 h后,通过CCK-8法检测每组细胞的增殖情况。再设置为空白组、PPARγ天然配体前列腺素J2(15-d-PGJ2)对照组(5μmol·L~(-1))、15-d-PGJ(2 5μmol·L~(-1))+TFL(100μmol·L~(-1))对照组、TFL组(100μmol·L~(-1)),ELISA法检测每组细胞中Smad3/4的含量;qPCR法检测每组细胞中PPAR-γ、C-ski mRNA的表达。结果:CCK-8结果显示,在作用时间相同的情况下,随着TFL作用剂量的增加,药物对细胞增殖的抑制率增高(P0.05);ELISA结果显示,TFL实验组中的Smad3/4含量明显降低(P0.05);qPCR结果显示,TFL实验组中PPARγ、C-ski mRNA的表达量均明显增加(P0.05)。结论:荔枝核总黄酮能够抑制HSC-T6细胞增殖,降低细胞外基质分泌,该机制可能与抑制HSC-T6细胞中的Smad3/4含量,上调PPAR-γ及C-ski mRNA表达相关。     

多指标正交试验法考察蒲公英提取与纯化工艺

目的多指标优选蒲公英的提取与纯化工艺。方法以咖啡酸、总酚酸、总黄酮为评价指标,通过正交试验确定蒲公英提取工艺;以咖啡酸、总酚酸、总黄酮转移率和浸出物收率为评价指标,通过正交试验确定纯化工艺。结果提取工艺为第一次加水12倍量,提取1.5 h,第二次加水10倍量,提取1.0 h,第三次加水10倍量,提取1.0 h。纯化工艺为浓缩密度1.05,醇沉浓度70%,静置12 h。结论蒲公英提取与纯化工艺稳定,合理可行。     

韭菜籽总黄酮对痛经模型小鼠疼痛及生化指标的影响

目的:探讨韭菜籽总黄酮对苯甲酸雌二醇与冰水浴联合所致痛经模型小鼠疼痛及各生化指标的影响。方法:用苯甲酸雌二醇结合冰水浸泡制作小鼠痛经模型,观察并记录注射缩宫素致小鼠疼痛的扭体反应次数和扭体潜伏期。并采用酶联免疫法对小鼠子宫匀浆中的血管升压素(arginine vasopressin,AVP)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-PX)水平进行检测,对小鼠血清中的白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和β-内啡肽(β-eE ndorphin,β-EP)水平进行检测。结果:与空白组小鼠比较,模型组小鼠扭体次数显著增多,潜伏期显著缩短,β-EP和GSH-PX水平显著降低,IL-6和AVP水平显著升高。与模型组相比,大、中、小剂量韭菜籽总黄酮组和益母草颗粒组都能降低小鼠扭体次数,延长小鼠扭体潜伏期,显著升高β-EP及GSH-PX水平,显著降低IL-6及AVP水平。结论:韭菜籽总黄酮能够改善小鼠痛经情况,可以有效缓解痛经症状。     

杨枸花总黄酮提取工艺优化及驱蚊止痒湿巾制备

目的优化杨枸花总黄酮提取工艺,并制备驱蚊止痒湿巾。方法以提取时间、提取温度、料液比为影响因素,总黄酮得率为评价指标,正交试验优化总黄酮提取工艺。然后,以杨枸花、褐藻酸钠、迷迭香精油、丝瓜络为主要原料,制备驱蚊止痒湿巾。结果最优提取工艺为提取时间30 min,提取温度60℃,料液比1∶30,所得湿巾药液呈浅棕黄色,均匀透亮,无杂质。结论杨枸花驱蚊止痒湿巾取材天然,温和不刺激,制作方便,易于携带,具有良好的市场前景。     

天山堇菜总黄酮抗流感病毒作用及机制研究

目的?研究天山堇菜总黄酮（TFVM）的体内外抗流感病毒作用及其机制。方法?体外实验采用细胞病变效应（CPE）法观察TFVM对流感病毒A/FM/1/1947（H1N1）致犬肾细胞（MDCK）病变的影响；设置细胞对照组，病毒感染组，阳性药金刚烷胺（AH）对照药组（10 μmol/L），TFVM 100、50、25 μg/mL 3 个浓度组，以H1N1分别感染MDCK和人髓系白血病单核细胞（THP-1），Western Blot法检测基质蛋白2（M2）、非结构蛋白（NS1）蛋白表达，检测THP-1细胞中p65蛋白表达及核转位；鸡血球细胞凝集实验检测TFVM对血凝素（HA）的抑制作用，荧光法检测神经氨酸酶（NA）活性。体内实验将小鼠随机分为病毒感染对照组，阳性药达菲（11.375 mg/kg）组，TFVM高、低剂量（0.4、0.2 g/kg）组，以流感病毒鼠肺适应株FM1感染小鼠建立病毒性肺炎模型，取小鼠肺组织研磨液接种MDCK细胞，CPE法观察对小鼠肺组织病毒增殖量的影响；qRT-PCR检测M2蛋白及肺组织中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、干扰素诱导蛋白10 （IP-10） mRNA表达水平。结果?TFVM明显抑制流感病毒致MDCK细胞病变，其IC50为79.1 μg/mL；其100 μg/mL浓度对MDCK和THP-1细胞中流感病毒M2、NS1蛋白表达均有明显抑制作用；TFVM还可抑制THP-1细胞内p65蛋白表达及其核转位。TFVM对流感病毒的两个膜蛋白NA和HA功能无明显影响；TFVM以0.2、0.4 g/kg剂量给药可明显降低流感病毒感染小鼠肺组织内病毒载量（P<0.05，P<0.01），并降低炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、IP-10 mRNA表达水平（P<0.05，P<0.01），在一定程度上能降低M2 mRNA表达水平（P>0.05）。结论?TFVM在体内外均有明显的抗流感病毒作用，其机制可能是通过抑制M2蛋白和NS1蛋白表达而直接抑制流感病毒的复制；还可能通过抑制宿主细胞内p65蛋白表达及其核转位，从而干预NF-κB信号通路下游炎症因子的表达，发挥间接抗病毒作用。