HPLC法同时测定不同厂家珍珠明目滴眼液中17种氨基酸的含量

目的建立HPLC法同时测定珍珠明目滴眼液中17种氨基酸的含量,比较9个不同生产厂家的19批珍珠明目滴眼液中17种氨基酸的含量差异。方法以异硫氰酸苯酯为衍生化试剂,对样品进行衍生处理后,采用HPLC法测定。色谱柱为Venusil-AA氨基酸分析柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相A为0.1 mo L·L~(-1)醋酸钠缓冲液(pH 6.5)-乙腈(93∶7),流动相B为乙腈-水(4∶1),梯度洗脱;流速:1.0 mL·min~(-1);检测波长:254 nm;柱温:38℃。结果 17种氨基酸质量浓度在相应的范围内呈良好的线性关系(0.993 0);17种氨基酸平均回收率在90.3%~108.4%之间,RSD在0.30%~3.31%之间。结论不同厂家的珍珠明目滴眼液中游离氨基酸含量存在较大差异。     

补肾中药治疗多发性硬化的研究进展

多发性硬化(multiple sclerosis,MS)是以中枢神经系统炎症性脱髓鞘为主要病理改变的自身免疫性疾病,其主要临床特点为病灶的空间和时间多发性。目前,临床上对MS尚无特效治疗药物,西医主要采用激素、免疫抑制剂等药物治疗,中医主要采用辨证论治的方法加以治疗。根据MS不同的临床表现,中医将MS归属为"痿证"、"痹证"范畴,认为该病病位在"脑与髓"。中医理论认为"肾虚"为本病的根本病因,由于肾主骨生髓,髓汇于脊柱为脊髓、汇于脑为脑髓,在总结前人研究的基础上,从肾虚为本的角度探讨补肾药物对多发性硬化的治疗作用。     

核因子κB与胶质细胞在阿尔茨海默病中的研究进展

近年研究发现核因子κB(nuclear factor，NF-κB)作为能调节多种基因表达的核转录因子，在神经退行性疾病中有重要作用，且NF—κB在胶质细胞中的激活及其产生的级联反应，对于阿尔茨海默病(AD)发生发展有重要影响，越来越受到人们的重视。本文就核因子κB在神经胶质细胞的作用机制及其对AD发病的影响作简要综述。     

当归芍药散通过调节ER/NF-ΚΚB/NLRP3缓解卵巢切除小鼠认知功能

目的雌激素下降是导致围绝经期女性认知功能障碍的风险因素,雌激素的缺失大大增加了围绝经期女性罹患阿尔茨海默病(AD)的风险。然而,长期的雌激素代替疗法在安全性上尚存在较大的争议,因此寻找更为安全有效的治疗方法,显得尤为重要。当归芍药散(DSS)是治疗妇人妊娠腹痛的经典方,其对AD也有较好的疗效。近来,研究人员进一步发现,DSS可以改善增加海马雌激素的合成改善雌激素缺乏引起的认知功能缺陷,但其发挥作用的分子机制尚不清楚。本研究旨在探讨DSS发挥改善雌激素缺失模型小鼠认知障碍的分子机制,为中医药治疗神经退行性疾病提供实验依据。方法将75只雌性ICR小鼠随机分为对照组和模型组,通过双侧卵巢摘除法(OVX)建立雌激素缺失动物模型,对照组仅切除卵巢旁附近少量脂肪,随后将模型动物随机分为:OVX组,DSS治疗组(每天3.2和6.4 g·kg~(-1))和阳性药治疗组(β-雌二醇,E2,每天100μg·kg~(-1)),DSS治疗组给予灌胃治疗,阳性药治疗组给予皮下注射治疗,对照组给予等体积蒸馏水治疗。治疗12周后,通过Morris水迷宫测试、Y迷宫测试及旷场实验观察认知功能,免疫组化染色法观察小鼠海马小胶质细胞和星形胶质细胞激活,ELISA法检测海马炎症因子IL-1β分泌,Western蛋白印迹法检测海马NF-κB、NLRP3、胱天蛋白酶1、ASC、IL-1β及雌激素受体(ER)ERα和ERβ蛋白的表达。结果 DSS可显著缩短OVX小鼠在Morris水迷宫定位航行的逃避潜伏期,增加模型小鼠在Y迷宫三个臂中的交替百分比,增加模型小鼠在旷场中心区域活动的时间,此外,DSS可明显下调OVX小鼠小胶质细胞标志物Iba-1和星形胶质细胞标志物GFAP的表达,下调海马IL-1β的分泌,降低OVX模型小鼠海马p-NF-κB、NF-κB、NLRP3、胱天蛋白酶1、ASC和IL-1β蛋白的表达,此外,DSS还能增加OVX小鼠海马的雌激素受体ERα和ERβ的表达。结论 DSS可能是通过调节海马ER/NF-κB/NLRP3通路发挥缓解雌激素缺乏引起的认知功能缺陷,DSS可能是治疗围绝经期女性认知功能障碍的潜在药物。     

槲皮素通过SIRT1/NLRP3通路改善db/db糖尿病模型小鼠的认知功能障碍

目的流行病学研究发现,糖尿病与认知功能障碍密切相关。槲皮素已被证实具有改善糖尿病和认知障碍功能,但是其相关机制仍然不清楚。本研究采用db/db糖尿病模型小鼠,探讨槲皮素是否可以通过SIRT1/NLRP3途径来改善糖尿病模型小鼠的认知功能障碍。方法将10月龄的雌性db/db小鼠随机分成3组(每组8只),模型组、槲皮素低剂量组(35 mg·kg~(-1))和槲皮素高剂量组(70 mg·kg~(-1));相同月龄雌性野生型db/m小鼠8只设为正常对照组。连续给药12周后进行学习记忆相关的行为学检测(Morris水迷宫测试和新物体识别测试)、葡萄糖耐量OGTT和胰岛素耐量ITT。行为学测试结束,取材,免疫印迹检测小鼠脑中神经和突触相关蛋白及SIRT1/NLRP3通路相关蛋白的表达。结果 Moriss水迷宫实验结果显示,槲皮素组较模型组逃避潜伏期明显缩短(P<0.01),穿越平台的次数和目标象限停留的时间显著提高(P<0.05);新物体识别实验结果显示槲皮素组较模型组对于新物体的识别指数明显提高(P<0.05),表明槲皮素能够增加db/db小鼠的学习记忆能力。同时,胰岛素耐量实验和葡萄糖耐量实验结果显示,槲皮素组较模型组胰岛素抵抗和空腹血糖水平显著降低(P<0.05)。蛋白质印迹分析还表明,槲皮素组较模型组小鼠脑中神经和突触相关蛋白(PSD93,PSD95,BDNF和NGF)的表达显著增加(P<0.01,P<0.05),同时槲皮素还显著改善了SIRT1的蛋白质表达(P<0.05),降低了NLRP3炎症相关蛋白(NLRP3,ASC,Cleaved Caspase-1,IL1β,IL18)的表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论 SIRT1/NLRP3通路可能是槲皮素对糖尿病脑病神经保护作用的关键机制。     

从DHA代谢角度探讨当归芍药散治疗APP/PS1阿尔茨海默病模型小鼠的作用及机制

目的研究当归芍药散水提液(DSS)对APP/PS1阿尔茨海默病(AD)双转基因模型小鼠认知功能的影响,并从脑内二十二碳六烯酸(DHA)代谢及对DHA代谢信号通路神经炎症、氧化应激探讨DSS治疗AD的作用机制。方法选择6月龄APP/PS1双转基因小鼠,随机分为模型组、当归芍药散高、中、低剂量组以及阳性药组,选择同背景同月龄转基因阴性雄性小鼠作为正常对照组。当归芍药散组分别为1.6,3.2和6.4 g·kg~(-1)。阳性药组(多奈哌齐)给药剂量为3 mg·kg~(-1)。每天灌胃1次,连续给药1个月后开始行为学测试。行为学测试结束次日,小鼠称重,10%的水合氯醛腹腔注射麻醉,分离全脑并称重,采用液质联用技术对脑内未酯化的DHA进行含量测定;采用Western蛋白印迹法对DHA从细胞膜释放、代谢的酶i PLA2和15-LOX以及参与炎症介质释放、代谢的酶c PLA2,COX-1,COX-2,5-LOX和12-LOX蛋白表达量进行检测;ELISA测定炎症介质PGE2,TXB2和LTB4;试剂盒检测小鼠脑内抗氧化酶MDA,SOD,GSH和ROS。结果 Morris水迷宫定位航行结果提示:与正常组相比,同背景同月龄的APP/PS1模型组逃避潜伏期明显延长(P<0.05);阳性药组(P<0.05)以及DSS 1.6,3.2和6.4 g·kg~(-1)组(P<0.01)可明显缩短AD模型小鼠的逃避潜伏期。Morris水迷宫空间探索结果提示:与对照组相比,模型组第一次穿越平台时间明显延长(P<0.01)、穿越平台次数明显减少(P<0.01);阳性药组、DSS 1.6,3.2和6.4 g·kg~(-1)组可明显缩短AD模型小鼠第一次穿越平台的时间(P<0.01)、增加其穿越平台的次数(P<0.05,P<0.01)。与模型组相比,阳性药组、DSS1.6,3.2和6.4 g·kg~(-1)组小鼠脑内未酯化的DHA含量明显增多(P<0.05);除DSS 1.6 g·kg~(-1)外,阳性药、DSS 3.2和6.4 g·kg~(-1)组可明显上调小鼠海马、皮质内15-LOX和i PLA2蛋白的表达(P<0.05,P<0.01),下调参与炎症介质释放、代谢的酶c PLA2,COX-1,COX-2,5-LOX和12-LOX蛋白表达(P<0.05,P<0.01);与模型组相比,阳性药组、DSS 1.6,3.2和6.4 g·kg~(-1)组海马、皮质内的神经炎症介质PGE2,TXB2和LTB4明显减少(P<0.05,P<0.01),MDA和ROS明显降低(P<0.05,P<0.01),SOD活性增加(P<0.05)。结论当归芍药散能改善APP/PS1双转基因AD模型小鼠的学习记忆障碍,改善血脂水平,能提高AD模型小鼠海马、皮质内未酯化DHA的含量并且上调DHA经酶代谢产生NPD1有关到15-LOX和i PLA2蛋白的表达,减少神经介质PGE2,TXB2和LTB4的生成,并且下调与神经介质生成有关的c PLA2,5-LOX,12-LOX,COX-1和COX-2蛋白的表达,并且还能改善AD模型小鼠脑内的氧化应激状态。     

香菇多糖对免疫抑制小鼠肠道派氏结T细胞的影响

目的研究香菇多糖对环磷酰胺免疫抑制小鼠的肠道派氏结T细胞的影响。方法通过胸腺指数,脾脏淋巴细胞的增殖转化和迟发型超敏反应情况观察香菇多糖对免疫抑制小鼠系统免疫功能的影响;在迟发型超敏反应条件下,通过肠道派氏结T细胞比例、亚群和活化的情况观察香菇多糖对免疫抑制小鼠肠道派氏结T细胞的影响。结果香菇多糖对环磷酰胺诱导的小鼠胸腺指数降低,脾淋巴细胞增殖和迟发型超敏反应能力下降表现出明显的恢复作用;对环磷酰胺诱导的DTH小鼠小肠派氏结数目减少,派氏结中T淋巴细胞比例升高、活化水平降低等肠道黏膜免疫系统抑制状态同样具有明显改善作用。结论香菇多糖可以正向调节免疫抑制小鼠肠道派氏结的T细胞功能,提示香菇多糖对肠道黏膜免疫系统具有一定的免疫调节作用。     

一种大鼠腹腔肥大细胞分离方法

目的介绍一种密度梯度离心分离大鼠腹腔肥大细胞(RPMC)的技术。方法比较改良方法和原方法2种分离的细胞量、活性及纯度。台盼蓝染色检测细胞存活率;甲苯胺蓝染色检测肥大细胞纯度。将弃去密度梯度离心上液2 m(lA方法)与2.5 m(lB方法)比较,以分析弃去的细胞液的量与肥大细胞纯度的关系。用C48/80刺激分离的RPMC,检测细胞释放的β-氨基己糖苷酶和组胺以确定分离的RPMC脱颗粒活性;透视电镜扫描观察细胞。结果改良方法分离的细胞显著多于原方法分离的细胞数;两种方法分离的细胞存活率都在99%以上;肥大细胞纯度都在90%以上。C48/80刺激RPMC,分离的细胞释放大量的β-氨基己糖苷酶和组胺,高于空白对照组。电镜观察细胞具有明显的肥大细胞形态。结论改良的Percoll密度梯度离心分离大鼠腹腔肥大细胞的方法可行。     

中医药对肠易激综合征中c-fos表达的影响

肠易激综合征是消化科常见病,其机制未完全明了,长期慢性应激等精神因素是其病因之一。病理状态下,原癌基因c-fos主要在与痛觉传递有关的神经元细胞核内表达。通过概述c-fos在肠易激综合征大鼠中枢神经系统、肠道系统的表达增加,以及中医药对肠易激综合征大鼠中枢、肠道c-fos表达的抑制作用来探讨中医药通过调摄c-fos表达,进而调节肠易激综合征内脏痛觉敏感的作用。     

双黄连注射剂及其与头孢拉定合用对人正常肝细胞的毒性作用研究

目的：研究双黄连注射剂及其与头孢拉定联合应用对人正常HL-7702肝细胞的毒性作用。方法：不同浓度的双黄连注射剂（0.125、0.25、0.5、1.0、2.0mg/mL）及其与头孢拉定（0.046mg/mL）联合应用处理HL-7702肝细胞,四甲基噻唑蓝比色法（MTT法）测定含药培养液对细胞生长抑制率的影响,计算IC50,并测定药物作用后培养上清液中谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）和乳酸脱氢酶（LDH）的活性。同时采用细胞爬片法,光学显微镜下观察细胞形态的变化。结果：MTT法实验中细胞生长抑制率与双黄连注射液剂量成正相关性,IC50为1.185mg/mL;头孢拉定联合应用可增加双黄连注射液的肝细胞毒性,IC50为0.442mg/mL。高浓度双黄连组及其与头孢拉定合用组培养上清液中AST、ALT和LDH活性显著升高,细胞形态发生明显改变,细胞出现大量的凋亡与坏死。结论：高浓度的双黄连注射液对体外培养的肝细胞有一定损伤,且与头孢拉定联合应用可增加肝细胞毒性。