伸膝制动骨关节炎动物模型软骨内胶原变化的观察

目的 对骨关节炎(OA)早期软骨内胶原变化进行动态观察，探时胶原变化与OA发病机制的关系。方法 采用兔膝关节伸直位制动OA模型，对制动10、20、30、40d的关节软骨进行透射电镜观察，Ⅱ型胶原原位杂交，I、Ⅱ、Ⅲ型胶原的免疫组织化学测定。结果 电镜观察显示OA关节软骨的破坏从切线层的细胶原纤维网开始，而切线层的细胶原纤维网不含细胞；原位杂交和免疫组织化学显示OA早期Ⅱ型胶原的表达和含量增加，而且增加主要发生在移行层和深层上部，二者染色灰度值随时间的变化是先递增，之后逐渐减少；OA关节软骨内有Ⅲ型胶原分泌，并呈增加趋势，但无I型胶原的分泌。结论 OA关节软骨的退变从切线层开始，切线层胶原破坏后难于修复可能是软骨退变重要原因。     

透明质酸对关节炎的诊断价值

透明质酸(hyaluronic acid,HA)是由Meyer和Palmer于1934年首次从牛眼玻璃体中分离出的一种高黏性物质,又名玻璃酸.现已广泛应用于眼科、骨科、肌腱外科等疾病的治疗领域,其中在关节炎的诊断和治疗方面的价值也引起了研究者的重视. 　　……     

体外诱导骨髓间质干细胞向软骨方向分化的研究

目的　探讨体外诱导骨髓间充质干细胞 (BMSCs)向软骨方向分化的条件和方法。方法　抽取兔股骨骨髓 ,用密度梯度离心和贴壁分离法分离BMSCs ,分别在高密度 (1× 10 6/ml)和低密度 (1× 10 4/ml)培养条件下用转化生长因子 β1(TGF β1)诱导BMSCs向软骨方向分化。倒置显微镜、透射及扫描电子显微镜观察细胞 ,用免疫组织化学、原位杂交、特殊染色方法检测Ⅱ型胶原及软骨基质成分的表达。结果　高密度诱导的BMSCsⅡ型胶原免疫组织化学阳性率为 89.2 %,Ⅱ型胶原原位杂交阳性率为 82 .6%,黏多糖特殊染色阳性 ,低密度诱导的BMSCsⅡ型胶原免疫组织化学阴性 ,Ⅱ型胶原原位杂交阳性率为 3 .8%,黏多糖特殊染色阴性。结论　TGF β1可以诱导BMSCs向软骨方向分化 ,细胞密度是BMSCs分化的重要影响因素。     

人骨髓间充质干细胞向软骨细胞定向分化的研究

目的探讨体外单层培养中诱导人骨髓间充质干细胞(Human Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells,hBMSCs)向软骨细胞定向分化的条件.方法采集志愿者骨髓3例,分离培养BMSCs,流式细胞仪分析表面标志.用含TGF-β1的无血清诱导培养基培养7d后,分别行Ⅱ型胶原免疫组化、原位杂交检测,碱性磷酸酶染色,3H标记的胸腺嘧啶脱氧核苷(3H-TdR)掺入实验检测细胞的增殖情况.结果培养的BMSCs表达CD9,而CD34、CD38、CD45、CD61呈阴性.细胞经诱导培养7d后免疫组化、原位杂交可检测到Ⅱ型胶原的表达,碱性磷酸酶染色呈弱阳性,但细胞3H-TdR掺入量低于对照组(P<0.05).结论BMSCs在特定的诱导下能向软骨细胞方向分化,但在无血清培养基中无法有效的增殖.     

透明质酸对关节炎的诊断价值

透明质酸(hyaluronic acid，HA)是由Meyer和Palmer于1934年首次从牛眼玻璃体中分离出的一种高黏性物质，又名玻璃酸。现已广泛应用于眼科、骨科、肌腱外科等疾病的治疗领域，其中在关节炎的诊断和治疗方面的价值也引起了研究者的重视。     

L-精氨酸——一氧化氮代谢通路对在体心肌缺血/再灌注大鼠心功能的影响

目的 用在体方法于大鼠心肌缺血/再灌注过程的不同时相给予L-精氨酸,以观察一氧化氮(NO)的"双刃性"作用对心功能的影响.方法 雄性Wistar大鼠48只,随机均分为4组:伪手术组(Sham组),心肌缺血I再灌注(MI/R)+生理盐水组(Vehicle组),MI/R+L-精氨酸早期处理组(Early组)和MI/R+L-精氨酸晚期处理组(Late组).结扎大鼠心脏左冠状动脉前降支,缺血30min、再灌注5 h;分别在缺血/再灌注早期和晚期给予L-精氨酸,动态监测大鼠左心室功能.用比色法测定心肌组织Caspase3活性;用化学发光法检测总NO(NOx)含量;用免疫印迹法测定iNOS含量.结果 与Vehicle组相比,早期给予L-精氨酸使大鼠心功能明显改善,Caspase3活性大幅度下降;而晚期给予L-精氨酸使大鼠心功能明显恶化,Caspase3活性进一步增加,心肌NOx含量升高,iNOS表达显著上调(P<0.05).结论 在再灌注早期给予L-精氨酸可通过抑制心肌细胞凋亡,降低再灌注损伤,起到改善心功能的作用;而晚期给予L-精氨酸,可促进细胞凋亡,进而使心功能恶化.     

膝关节液透明质酸含量与关节软骨损伤的关系

目的探讨膝关节液透明质酸含量与关节软骨损伤程度之间的关系.方法采用ELISA法检测膝关节疾病患者102例共104膝的关节液透明质酸含量,并在关节镜下应用Outerbridge关节软骨损伤评分法和Ayral滑膜炎评分法评价膝关节软骨损伤程度和滑膜炎病理变化程度.采用t′检验、方差分析、Spearman相关分析和多元线性回归分析进行统计分析.结果临床诊断为OA组的关节液透明质酸含量较非OA组低(t′=-2.186,P＜0.05).Outerbridge软骨损伤累计评分≥10分组关节液透明质酸含量比Outerbridge软骨损伤累计评分＜10分组低(t′=-2.316,P＜0.05).104膝关节液透明质酸含量除主要与Ayral滑膜炎评分呈正相关(β′A=0.497,P＜0.001)之外,还与Outerbridge软骨损伤累计评分呈负相关(β′O=-0.364,P＜0.001).在Ayral滑膜炎评分≥60分组,关节液透明质酸含量与Outerbridge软骨损伤累计评分呈负相关(β′o=-0.437,P＜0.001),与Ayral滑膜炎评分呈正相关(β′A=0.339,P＜0.01),其中关节软骨累计损伤程度的影响较大.结论关节液透明质酸除主要反映膝关节滑膜炎程度外,在一定程度上还可反映关节软骨累计损伤程度.当滑膜炎较重时,后者则起主导作用.膝关节液透明质酸含量的降低提示关节软骨累计损伤程度较重.     

兔骨髓间充质干细胞的分离培养及其生物学性状的研究

目的：分离培养兔骨髓间充质干细胞，对其生物学性状进行观察。方法：用密度梯度离心法与贴壁培养法相结合，分离兔骨髓间充质干细胞，进行体外培养扩增，绘制其生长曲线，用倒置显微镜、细胞爬片、扫描电镜、透射电镜观察细胞的生物学性状。结果：密度梯度离心后，活细胞比例在95％以上，贴壁培养的细胞呈纺锤形，细胞增殖力强，平均倍增时问为32h，细胞的增殖能力随传代次数的增加而有所下降。结论：密度梯度离心与贴壁培养相结合可以提高细胞分离效率。体外培养的兔骨髓问充质干细胞生长稳定，增殖力强，可以作为组织工程的种子细胞。     

自体骨髓间充质干细胞移植修复兔关节软骨损伤

目的用组织工程方法修复软骨损伤。方法兔骨髓间充质干细胞(bone marrowderived mesenchymal stem cells，BMSCs)体外培养扩增诱导分化，用藻酸盐载体材料负载，移植于兔关节软骨损伤区，术后6周和12周进行大体、光镜、电镜等观察。结果实验组移植6周后，软骨损伤区由透明软骨样组织填充，12周后软骨和软骨下骨修复良好，免疫组化和原位杂交证实修复组织内产生了Ⅱ型胶原，透射电镜显示细胞周围有胶原纤维产生。两对照组损伤区由纤维组织修复。结论以藻酸盐载体材料负载BMSCs移植可修复关节软骨损伤。     

膝关节液透明质酸含量与滑膜炎程度的关系

目的探讨膝关节液透明质酸含量与滑膜炎程度之间的关系。方法酶联免疫吸附试验(ELISA)检测膝关节疾病(OA)患者102例共104膝的关节液透明质酸含量,并在关节镜下应用Ayral滑膜炎评分法和Outerbridge关节软骨损伤评分法评价膝滑膜炎和关节软骨损伤程度。采用t'检验、Spearman相关分析和多元线性回归分析进行统计分析。结果Ayral滑膜炎评分≥60分组的关节液透明质酸含量比Ayral滑膜炎评分<60分组高(P<0.001)。104膝关节液透明质酸含量与Ayral滑膜炎评分呈正相关(茁'A=0.497,P<0.001),与Outerbridge软骨损伤累计评分呈负相关(茁'o=-0.364,P<0.001),且Ayral滑膜炎评分的影响较大。关节液透明质酸含量与Ayral滑膜炎评分在Ayral滑膜炎评分≥60分组呈正相关(r=0.306,P<0.05),在Ayral滑膜炎评分<60分组无相关性(r=-0.144,P>0.05)。与非OA组相比,OA组的关节液透明质酸含量较低(P<0.05),而Ayral滑膜炎评分较高(P<0.01)。结论膝关节液透明质酸可作为生物标记物反映滑膜炎的程度,关节液透明质酸含量的增高提示滑膜炎较重。