家鸡MDH2基因克隆、生物信息学分析及原核表达载体构建

目的 初步探索家鸡苹果酸脱氢酶2编码基因MDH2的序列特征、组织表达及原核表达情况。方法 采用克隆技术与测序技术获取家鸡MDH2基因互补脱氧核糖核酸（cDNA）全长,使用多种在线软件对其进行生物信息学分析,利用实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）技术检测该基因在不同组织中的表达情况,利用同源重组技术构建pET32a（+）-MDH2表达载体,使用异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导蛋白表达。结果 从新鲜家鸡砂囊内壁中成功克隆到MDH2基因,序列长度1120 bp,其开放阅读框（ORF）为1014 bp,编码337个氨基酸;MDH2蛋白相对分子质量为35.95 kDa,理论等电点9.17,属于稳定碱性疏水性蛋白。MDH2蛋白含25个磷酸化位点;二级结构主要包括α-螺旋、β-螺旋、无规则卷曲,无信号肽和跨膜结构域。MDH2基因在心、肝、脾、肺、肾、砂囊内壁中都有表达,其中心、肾、砂囊内壁中表达量较高,pET32a（+）-MDH2重组蛋白主要是以包涵体的形式存在。结论 MDH2基因在家鸡体内广泛表达,但其在各组织/器官中表达趋势不同,提示其功能可能具有广泛性与多重性。     

基于体外模拟消化与蛋白质组学技术的鸡内金研究与分析

目的：通过体外模拟消化研究与蛋白质组学技术,分析鸡内金的促消化作用及其蛋白质组成,为完善鸡内金质量评价体系提供参考。方法：采集市售鸡内金,鉴定其性别来源、测量其厚度、记录其颜色;利用静态多室多酶体外消化模型,考察不同性状鸡内金对底物消化率的影响,并利用蛋白组学技术鉴定鸡内金中蛋白质组分。结果：添加鸡内金后,底物干物质消化率与能量消化率分别增加了5.8%和8.2%;鸡内金颜色及原动物性别对底物干物质消化率与能量消化率均无显著影响;厚度与干物质消化率相关性显著（P<0.05）,但未遵循线性规律。鸡内金厚度与淀粉酶活力呈极显著正相关（P<0.01）,随厚度增加,淀粉酶活力上升。共从鸡内金中鉴定到1541种蛋白质,相对丰度较高的蛋白有胃动蛋白2、富含半胱氨酸的分泌蛋白、埃兹蛋白等。所测蛋白质主要富集在代谢、核糖体、碳代谢、蛋白酶体、三羧酸循环等京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路上,其中富集到代谢通路上的蛋白质最多（240种）。结论：体外模拟消化实验在一定程度上可体现鸡内金促消化能力,可为鸡内金或其他消食类中药质量评价提供参考;推测胃动蛋白2和埃兹蛋白与鸡内金健脾消食的功效有关...     

中药鸡内金质量评价研究概述

目的:对近年来鸡内金质量评价研究进展进行总结,为完善鸡内金质量标准、提高质量控制技术水平、保障其临床效果提供参考.方法:查阅鸡内金国家标准、地方标准及国内外相关研究文献,对其质量标准、质量控制等研究现状进行整理归纳与分析,剖析存在的问题.结果 和结论:鸡内金质量评价研究虽取得了一些进展,但质控指标仍需完善、采收加工标准...     

《中国药典》2020年版动物类中药功效统计分析和质量评价

动物类中药资源是中药产业发展不可或缺的重要支撑,但和植物类中药相比,其存在资源量不足、药效物质基础不清、缺乏专属质量评价体系等问题。对动物类中药的应用及质量研究现状进行归纳整理,对现存问题进行阐述,针对相关问题提出相应的解决方法。     

外用动物药材研究策略

外用动物药材是中药材的重要组成部分,临床应用历史悠久,利用前景良好。然而,其存在价格昂贵、基础研究薄弱、新制剂开发缓慢等问题。文章对近年来外用动物药材相关研究进行了整理归纳,总结现存问题,提出研究策略,以期为其相关后续工作开展提供参考。