蜡梅属药用植物分子生物学研究进展

蜡梅属植物有很高的观赏和药用价值，具有抗氧化、抗菌、抗病毒、镇痛等药理活性。然而，现今研究多关注其种质资源、品种分类、化学成分和临床应用等方面，缺乏分子生物学方向的系统总结。本文通过整理近年来基因组学、分子标记、分子鉴定、转录组学和功能基因克隆等方向的研究结果对蜡梅属药用植物的系统进化、遗传多样性、分类鉴定、次生代谢、抗逆机制及生长发育过程等多个方面的研究进展进行系统梳理，并就当前亟需解决的问题和研究前景进行展望，以期为加快蜡梅属药用植物的深度开发应用提供理论参考和研究思路。     

畲药搁公扭根基原植物及其同属易混种的ITS2条形码鉴别

目的基于ITS2条形码序列对畲药搁公扭根及其同属易混种进行分子鉴定,以保证药材使用的正确性和临床疗效。方法分别于浙江、广西、江西和安徽等地采集搁公扭根基原植物掌叶覆盆子及其9种同属易混种高粱泡、山莓、蓬蘽、茅莓、插田泡、寒莓、东南悬钩子、三花悬钩子和武夷悬钩子样品共140份。对采集样品进行基因组DNA提取、ITS2基因片段PCR扩增并双向测序、拼接获得相应序列,基于HMMer方法注释获取ITS2序列,同时下载Gen Bank相应物种ITS2序列37条,使用Gene Tool软件分析ITS2序列长度、GC量、变异位点等情况,利用Clustal X和MEGA7.0软件计算种内、种间遗传距离,构建邻接(NJ)系统发育树。结果搁公扭根及其9种同属易混种ITS2序列长度为211~213 bp,GC量为52.1%~58.0%;搁公扭根基原植物与其他物种共有14个变异位点,一处插入/缺失;搁公扭根种内平均K2P遗传距离为0.007 2,显著小于其他9个易混种,其中与山莓和武夷悬钩子进化距离最近,与蓬蘽最远;NJ进化树中搁公扭根各单倍型序列单独聚为一支,可与其他物种成功区分。结论 ITS2序列能够成功鉴别搁公扭根基原植物及其9种同属易混种,为畲药DNA条形码分子鉴别提供了有力佐证,助力畲药流通信息监管。     

红花锦鸡儿地上部分抗HIV化学成分的研究

为了研究红花锦鸡儿(Caragana rosea)地上部分的化学成分，寻找具有抗HIV作用的药用成分。在抗HIV生物活性指导下，利用色谱技术进行分离纯化，从红花锦鸡儿地上部分的乙酸乙酯提取部位分得5个化合物，根据理化性质和波谱技术进行结构鉴定，分别鉴定为myricetin(1)，mearnsetin(2)，对羟基桂皮酸(3)，cararosinol A(4)，cararosinol B(5)，并推测了cararosinol B与该植物中发现的另一白藜芦醇四聚体kobophenol A的转化关系。化合物4和5为新的白藜芦醇四聚体，化合物1～3为首次从该植物中分得。上述化合物体外均无明显的抑制HIV作用。     

畲药食凉茶中三种黄酮类成分含量测定的方法学研究

目的：建立同时测定畲药食凉茶中三种黄酮类成分含量的方法。方法：采用高效液相色谱法测定,色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）;流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液,梯度洗脱;流速为1.0 ml·min^-1,柱温30℃;检测波长360 nm。结果：芦丁、槲皮素和山柰酚的线性范围分别为0.040 9-1.637 0 mg·ml^-1（r=0.999 2）,0.44-88.00μg·ml-1（r=0.999 8）,0.41-77.63μg·m^l-1（r=0.999 2）;平均加样回收率分别为99.35%（RSD=1.64%）,101.14%（RSD=1.88%）,99.69%（RSD=1.92%）。结论：该方法简便易行、快速准确、重复性好,可用于同时测定食凉茶中的芦丁、槲皮素和山柰酚的含量。     

市售覆盆子药材DNA条形码鉴定研究

目的基于ITS2条形码序列检测市场销售覆盆子药材,为保证覆盆子药材使用的正确性和安全性提供一种新的鉴定手段。方法获取掌叶覆盆子及其5种常见同属易混种ITS2序列,以及GenBank上下载的共计48条序列。使用Gene Tool软件分析ITS2序列长度,GC含量和变异位点等情况,利用Clustal X和MEGA 7.0软件计算遗传距离和构建邻接系统发育聚类树。同时随机检测24份市售覆盆子药材,利用中药材DNA条形码鉴定系统和构建邻接系统发育聚类树确定物种,鉴别真伪。结果掌叶覆盆子基原植物可与其同属易混种进行明显区分;市售药材中正品22份,伪品1份,混合物1份。结论基于ITS2序列的DNA条形码技术能够成功鉴定市场销售的掌叶覆盆子及其混伪品。     

HPLC测定不同采收期畲药搁公扭根中鞣质类成分含量

目的 采用HPLC测定不同月份畲药搁公扭根中鞣质类成分没食子酸和鞣花酸含量,确定其最佳采收期。方法 采用Agilent Zorbax SB-C₁₈柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）;流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液（梯度洗脱）,流速1.0 mL·min^-1,柱温30℃,检测波长263 nm。结果 不同月份搁公扭根药材中没食子酸含量的差异相对较小,鞣花酸含量的差异较大,但两者在11月-1月期间的含量均较高。结论 搁公扭根以鞣质类成分没食子酸和鞣花酸含量为指标,11月-1月为最佳采收期。     

海拔高度对三叶青产量和黄酮含量的影响

目的:通过研究浙江丽水市不同海拔高度三叶青产量和总黄酮含量变化,为扩大三叶青生产适宜区提供理论参考。方法:采用大田小区试验,三叶青产量以鲜品称重测定,总黄酮含量用紫外分光光度法测定。结果:三叶青产量随海拔升高逐步增加然后递减的变化规律,海拔618 m产量最高,与其他海拔间差异具有统计学意义(P0.05),305~618 m海拔范围三叶青平均产量最高,与其他海拔间差异具有统计学意义(P0.05)。三叶青总黄酮含量在413~730 m海拔范围内随海拔升高而增加,海拔730 m黄酮含量最高,与其他海拔间差异具有统计学意义(P0.05)。结论:305~618 m海拔范围有利于三叶青产量增加,520~730 m海拔范围有利于三叶青中黄酮含量增加,因此,在520~618 m范围有利于提高三叶青产量和黄酮含量,是三叶青最适宜种植海拔范围。     

蜡梅科植物化学成分及其药理活性研究进展

蜡梅科包括蜡梅属、夏蜡梅属、美国蜡梅属和奇子树属4个属。蜡梅科植物广泛分布于中国、北美和澳大利亚,不仅具有极佳的观赏价值,也具有重要的药食价值。蜡梅科植物中含有丰富的挥发性成分,还有较多的生物碱、倍半萜和香豆素类成分,其中二聚吡咯并吲哚型、二聚哌啶并喹啉型生物碱,二聚、三聚香豆素类成分是其特征性成分。该文全面阐述蜡梅科植物中化学成分,并着重于阐述蜡梅科中非挥发性成分,包括生物碱类、萜类、黄酮类、香豆素类、甾体类等的化学结构及其药理活性,以期为蜡梅科植物的进一步研究和开发提供参考。     

GC法测定柳叶蜡梅中桉油精的含量

目的：：建立气相色谱法测定柳叶蜡梅中桉油精含量的方法。方法：采用气相色谱法,Zebron ZB-WAX 型毛细管柱(60 m ×0.32 mm,0.5μm);程序升温：60~200℃;氢火焰离子化检测器,检测器温度为250℃;进样口温度为220℃;高纯氮气做载气。结果：桉油精在0.0126~0.5034 mg·ml-1范围内呈良好线性关系(r=0.9998);平均加样回收率为100.68%,RSD=1.51%(n=6)。结论：本方法简便、准确、快速、重复性好,适用于柳叶蜡梅的质量控制。     

HPLC法测定畲药地稔药材中没食子酸和槲皮素

目的 建立畲药地稔药材中没食子酸和槲皮素的测定方法。方法 采用高效液相色谱法测定,色谱柱为Agilent-SB C₁₈（150 mm×4.6 mm,5 μm）;流动相为甲醇（A）-0.4%磷酸水溶液（B）,梯度洗脱0～7 min,5% A;7～9 min,5%～35% A;9～11 min,35%～55% A;体积流量1.0 mL/min,柱温30 ℃;检测波长254 nm。结果 没食子酸和槲皮素的线性范围分别为0.081 4～0.326 0 μg（r＝0.999 8）,0.027 1～0.136 0 μg（r＝0.999 6）;平均加样回收率分别为97.72%（RSD＝0.90%）,99.75%（RSD＝1.39%）。结论 该方法简便易行、准确、重现性好,可用于畲药地稔药材的质量控制。