阿胶加工工艺过程中DNA降解规律研究

目的：本文以阿胶传统工艺加工过程样品为研究对象,探讨关键加工阶段阿胶样品中驴基因组DNA核基因和线粒体基因的降解变化规律。方法提取阿胶工艺过程中的驴基因组DNA,分别利用超微量分光光度计、琼脂糖凝胶电泳、普通PCR、荧光定量PCR和简单序列重复（ SSR）微卫星毛细管电泳（ CE）检测方法对提取的DNA质量进行评价。结果研究结果显示,在原料驴皮、化皮、双效、浓缩和加辅料阶段,琼脂糖凝胶电泳均能检测到清晰的条带,普通PCR可扩增到200~1600 bp左右的片段,而在凝胶阶段DNA降解最为严重,只能利用琼脂糖凝胶电泳检测到100~800 bp的目的片段,利用荧光定量PCR检测技术线粒体基因在阿胶加工各个阶段均可检测出,核基因凝胶阶段未检出;通过PCR-SSR-CE检测在凝胶阶段核基因未检出特征峰,更进一步证明了凝胶阶段DNA核基因降解严重。结论对阿胶工艺加工过程DNA变化规律发现,随着阿胶加工的深入进行,各个阶段DNA发生不同程度的降解,其中凝胶成品阶段降解最为严重,本研究对比普通PCR、荧光定量PCR和简单序列重复微卫星毛细管电泳检测方法,发现荧光定量PCR检测方法最快速、灵敏和可靠,通过比较发现以线粒体基因为靶基因在阿胶的各个加工阶段均能满足DNA溯源的要求。     

黄须菜籽油抗动脉粥样硬化和抗衰老作用的实验研究——Ⅰ.黄须菜籽油抗动脉粥样硬化作用的实验研究

研究了黄须菜籽油对血清脂肪酸组成、VitE和硒含量变化的影响,并观察了对新西兰兔血小板聚集功能、血脂和血浆脂蛋白的影响。结果表明,饲喂兔黄须菜籽油后,血清棕榈酸明显降低,亚油酸、VitE和硒含量明显升高,使ADP或胶原诱导所致的血小板聚集作用明显减弱,在等热量、等胆固醇条件下TCh,TG,(VLDL+LDL)-Ch降低,HDL-Ch,HDL_2-Ch升高,(VLDL+LDL)-Ch/HDL-Ch比值降低;提示黄须菜籽油有抗动脉粥样硬化的作用。     

利用多重荧光定量PCR检测阿胶原料驴、马、驴骡和马骡皮张的源性

目的 建立快速检测阿胶原料皮张源性的方法.方法 根据马、驴、驴骡和马骡的核基因肌酸激酶CKM和线粒体基因组DNA(mtDNA)的16S rRNA基因序列设计特异,并引入18S rDNA作为内参质控,建立能检测4种动物源性的5重多色荧光定量PCR检测体系.结果 本研究开发的引物和分子信标探针的特异性强,能同时区分同源性相近的驴、马、驴骡和马骡源性;灵敏度高,检测限为0.01 ng·μL-1.通过对某阿胶制品公司收购的驴皮源性检测,检测结果与DNA测序一致率达100％.结论 本方法在一管PCR反应中能同时检测4种动物源性,更简单、准确和高效,为驴皮、马皮及骡子皮张的源性鉴定探索了新的途径.     

黄须菜籽油抗动脉粥样硬化和抗衰老作用的实验研究——Ⅱ.黄须菜籽油抗氧化作用的实验研究

用不同剂量的黄须菜籽油和猪油饲喂兔8周后、测定各组兔血清Lpo含量、红细胞SOD和GSH-PX活性。结果表明:在等热量和等胆固醇条件下,黄须菜籽油可显著降低兔血清Lpo含量、升高红细胞SOD和GSH-PX活性。提示黄须菜籽油对延缓衰老和防治老年性疾病有一定的作用。     

药用贝母属系统发育关系分析及多重实时荧光PCR检测方法的建立

目的探讨多重实时荧光PCR检测方法对川贝母及伪品鉴别的可行性。方法通过对常见贝母属植物的ITS、psb Atrn H、rbc L和matK基因序列种间变异、遗传距离及系统发育关系分析,选择进化速率快、种间变异大、种内变异小的基因作为靶基因,设计川贝母及伪品贝母的特异性引物和Taqman探针,建立一种多重实时荧光PCR检测方法。通过特异性、灵敏度及混合样本检测与测序方法比较进行方法评估。结果贝母属ITS和psb A-trn H变异位点高于rbc L和mat K,通过遗传距离分析rbc L和mat K基因显著低于ITS和psb A-trn H基因,以ITS作为靶基因,建立多重实时荧光PCR检测方法特异性强,灵敏度达0.01ng,对18份样本抽查检出4份伪品贝母,检测结果与构建的NJ树聚类分析结果完全一致。结论基于ITS区域序列为靶基因建立多重实时荧光PCR检测方法能够成功鉴定川贝母及其混伪品,为川贝母真伪鉴别提供依据。     

黄须菜籽油抗动脉粥样硬化和抗衰老作用的实验研究——Ⅲ.黄须菜籽油营养成份分析

测定了黄须菜籽粒的主要成份,粗蛋白含量为21.80%,粗脂肪为21.94%。黄须菜籽油含不饱和脂肪酸90.56%,其中亚油酸为74.06%;VitE含量为56～281mg/100g,硒含量为0.0342μg/g。油粕的粗蛋白为23.67%,必需氨基酸占粗蛋白的40.6%,是各种饼粕中含量最高的,微量元素含量与优质饼粕相近。