五味子PLR基因及其启动子的克隆与表达分析

目的从五味子中克隆木脂素生物合成途径松脂醇-落叶松脂素还原酶(Pinoresinol-lariciresinol reductases,PLR)基因及其启动子序列,并进行生物信息学与表达分析。方法根据转录组PLR测序序列设计特异性引物,克隆ScPLR并进行生物信息学分析;采用TAIL-PCR对Sc PLR启动子序列扩增,并进行序列分析;采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)分析果实不同发育时期ScPLR的表达。结果 Sc PLR基因开放阅读框(ORF)全长837bp,编码278个氨基酸;ScPLR蛋白相对分子质量31419.85,理论等电点8.97;具有跨膜结构,无信号肽,为稳定性疏水蛋白,主要由α-螺旋和无规卷曲构成;亚细胞定位预测Sc PLR主要定位于细胞质;系统进化显示Sc PLR与蓖麻PLR亲缘关系较近。克隆到Sc PLR基因启动子长994bp,具有TATA-box、CAAT-box基本元件、光调控、生长素响应、厌氧诱导、防御和应激反应的多种调控元件;qRT-PCR结果显示ScPLR表达量呈现果实膨大期快速增加而进入着色期迅速降低的变化趋势。结论获得了Sc PLR基因及其启动子序列,ScPLR果实着色期之前高水平表达的趋势和木脂素的动态变化相一致,为进一步研究该基因功能及表达调控奠定了理论基础。     

朝鲜白头翁指纹图谱的高效液相色谱测定

目的建立朝鲜白头翁药材的HPLC指纹图谱,为科学评价及有效控制朝鲜白头翁药材质量提供新方法。方法采用高效液相色谱法分析和比较不同来源朝鲜白头翁和白头翁的指纹图谱。色谱条件为:Symmetry@C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),乙腈-水梯度洗脱,体积流量0.5 ml.min-1,检测波长210 nm,柱温35℃。结果建立了朝鲜白头翁药材的指纹图谱共有模式,标定了23个共有峰;经相似度计算,15批药材整体相似度较好,其中10批样品相似度较高,另外5批药材相似度偏低;朝鲜白头翁与白头翁的HPLC指纹图谱差别明显,二者相似度较低。结论朝鲜白头翁药材的指纹图谱特征性及专属性强,可用于控制朝鲜白头翁药材的内在质量。     

牛蒡根总黄酮的提取工艺优选

目的:优化牛蒡根总黄酮的超声提取工艺。方法:以总黄酮提取率为指标,采用单因素考察乙醇体积分数、料液比、粉碎粒度、提取次数、超声时间、温度及功率对牛蒡根总黄酮提取工艺的影响;选取乙醇体积分数、提取时间、超声功率及粉碎粒度为考察因素,通过正交试验法优化牛蒡根总黄酮超声提取条件,并使用SPSS软件对试验数据进行统计分析。结果:乙醇体积分数、超声时间、超声功率和粉碎粒度是影响牛蒡根总黄酮提取效果的主要因素。优选的提取工艺为牛蒡根最粗粉加20倍量60%乙醇提取3次,每次40 min,超声功率60 W,温度60℃。结论:优选的提取工艺稳定可行,可推广于大生产应用。     

沉默调节蛋白1过表达通过抑制结缔组织生长因子改善转化生长因子-β_1诱导人肾小管上皮细胞株的凋亡

目的观察沉默调节蛋白1(Sirt1)过表达对转化生长因子(TGF)-β1诱导人肾小管上皮细胞凋亡的影响及其机制研究。方法将体外培养人肾小管上皮细胞分为正常对照组、TGF-β1刺激组及TGF-β1+Sirt1过表达组。采用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测细胞凋亡;流式细胞术及hoechst33258染色法分别检测细胞凋亡百分比;蛋白质印迹法检测Sirt1、结缔组织生长因子(CTGF)、Bax、Bcl-2的表达;实时荧光定量聚合酶链反应(Real time-PCR)检测Sirt1、CTGF、Bax、Bcl-2m RNA水平;活性比色法检测Sirt1活性;免疫细胞化学方法检测Sirt1表达。结果与正常对照组相比,TGF-β1刺激组肾小管上皮细胞Sirt1表达及活性均显著下降,同时CTGFm RNA及蛋白水平显著上升,细胞凋亡百分比明显增加(P<0.01),Bax/Bcl-2比率明显升高(P<0.05)。Sirt1过表达能够显著抑制TGF-β1诱导的CTGF水平升高,降低肾小管上皮细胞凋亡百分比,减少Bax/Bcl-2比率(P<0.05)。结论 Sirt1过表达能够抑制TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞凋亡,并且该作用的实现可能是部分通过抑制CTGF实现的。     

白头翁属药用植物的HPLC指纹特征与化学分类研究

目的:建立白头翁属5种药用植物皂苷类成分的HPLC指纹特征图谱,为这5种药用植物的鉴定及亲缘关系评价提供依据.方法:采用HPLC测定白头翁属药用植物的指纹图谱,依据获得的色谱数据对各样品进行分析与鉴定.结果:建立了白头翁属5种药用植物中皂苷类成分的HPLC指纹图谱,这5种药用植物均显示了其共性和各自的指纹特征;确立10个色谱峰为共有峰.运用系统聚类将14份样品聚成4类:第Ⅰ,Ⅱ,Ⅳ类分别为朝鲜白头翁,蒙古白头翁和白头翁;第Ⅲ类由兴安白头翁、细叶白头翁组成.朝鲜白头翁与兴安白头翁,蒙古白头翁与细叶白头翁之间的化学亲缘关系较远.结论:聚类结果与传统分类结果有较好的一致性.HPLC化学图谱可用于白头翁属植物的分类和鉴别研究,并为白头翁属植物指纹图谱研究和质量控制提供重要参考.     

白藜芦醇对小鼠营养性肥胖伴生殖功能损害的作用

目的 探讨白藜芦醇对肥胖性不育的防治作用.方法 36只雌性昆明小鼠按随机区组法分为3组(对照组、高脂组和干预组),每组12只,分别喂以正常饮食、高脂饮食和高脂饮食加白藜芦醇.分别在4周、8周和12周时监测动物体重、空腹血糖和糖耐量情况.喂养12周后检测小鼠空腹胰岛素、血清雌二醇、黄体生成素、睾酮水平,以阴道脱落细胞判断小鼠动情周期,以雌、雄个体3:1的比例进行交配,观察小鼠生育能力.结果 喂养12周后高脂组和干预组小鼠体重[(61.52±6.92),(63.06 ±5.80)g]都明显高于对照组[(47.76±5.02)g],差异具有统计学意义(P＜0.05);而干预组体重相对于高脂组差异没有统计学意义(P＞0.05).高脂组空腹血糖[(6.98±0.33)mmol/L]和空腹胰岛素[(38.02 ±7.21) μIU/L]明显高于对照组[(5.30±0.36) mmol/L,(30.29±5.58)μIU/L],差异均具有统计学意义(P＜0.05);干预组空腹血糖[(5.45 ±0.67) mmol/L]和空腹胰岛素[(30.21 ±4.60)μIU/L]与高脂组相比明显下降,且差异均具有统计学意义(P＜0.05).性激素分析显示高脂组雌二醇[(5.67 ±0.98) ng/L]与黄体生成素[(0.346±0.025) IU/L]较对照组[(3.007 ±0.721) ng/L,(0.202 ±0.041) IU/L]明显升高(P＜0.05);干预组雌二醇[(2.115 ±0.353)ng/L]和黄体生成素[(0.245 ±0.041) IU/L]与高脂组相比明显下降,差异均具有统计学意义(P＜0.05).睾酮含量各组之间没有统计学差异.高脂饮食还导致动情周期紊乱甚至消失,卵巢组织学显示高脂饮食导致闭锁卵泡数量明显增加.结论 高脂饮食能够诱导雌性小鼠肥胖、代谢综合征与生殖功能损害,白藜芦醇对此能起到一定缓解作用.     

大豆24 kDa油体蛋白基因与aFGF融合转化红花的研究

目的: 利用红花表达酸性成纤维细胞生长因子(acidic fibroblast growth factor,aFGF),为利用植物生物反应器规模化生产aFGF奠定基础. 方法: 将人源aFGF基因改造为植物偏好性的aFGF基因序列,通过PCR搭桥技术克隆植物偏好的aFGF基因,利用酶切连接方法构建植物油体表达载体,通过冻融法转到根瘤农杆菌EHA105,利用农杆菌介导的方法转化到塔城红花中,对转化红花进行PCR,Southern杂交,RT-PCR分子检测. 结果: 扩增出植物偏好的aFGF基因的全长序列,并与大豆油体蛋白基因Doil基因融合,成功地插入到改造好的含有大豆油体蛋白启动子表达载体中, 探索了进行红花遗传转化的最佳条件,成功获得单位点插入的3个独立转化红花植株,在转录水平都有大小一致的aFGF的表达. 结论: 该实验成功构建了含aFGF植物油体表达载体,并筛选出最佳的遗传转化条件,A为0.6,侵染时间为10 min,共培养3 d,获得了aFGF转录水平表达的转基因红花植株,这将红花油体蛋白本身的皮肤保护作用,与FGFs的创伤修复作用累加,快速开发出外用创伤药物奠定基础.     

渐危药用植物珊瑚菜胚状体途径再生植株的研究

目的:研究离体条件下珊瑚菜种子休眠的原因,建立胚状体途径再生植株的方法。方法:研究离体条件下胚乳因素和外源激素在解除珊瑚菜种子休眠过程中的作用,以及激素浓度对胚性愈伤组织诱导及胚状体再生植株的影响。结果:保留1/3胚乳的珊瑚菜种子萌发率最高,可以达到31%。而TDZ,6-BA,GA3处理不仅对解除珊瑚菜种子休眠的作用不大,同时容易导致出现畸形苗。在附加1.0 mg.L-1 2,4-D的MS培养基上,胚性愈伤的诱导率可以达到57%。将培养20 d左右胚性愈伤组织转入MS培养基上40 d左右就可分化形成子叶期胚状体,然后再继代培养20 d即可得到再生植株。结论:建立一套有效的珊瑚菜再生植株体系。     

人工股骨头置换治疗股骨粗隆间骨折65例

老年人易发生股骨粗隆间骨折.通过股骨头置换手术的正确处理和规范操作可以使高龄患者的获得即刻固定坚固,使患者可以早期下地行走的治疗效果.