疏肝苦荞茶的制备工艺及其含量测定的研究

目的:通过建立疏肝苦荞茶的最佳水提及制备工艺,同时建立HPLC法测定其芦丁含量,使得苦荞茶的开发有一定的基础依据。方法:以单因素试验为基础、干膏得率作为指标进行正交实验,考察料液比、提取时间、提取次数对疏肝苦荞茶提取工艺的影响,评价疏肝苦荞茶水提最优工艺。采用最佳水提工艺提取药液并吸附于苦荞上,考察疏肝苦荞茶最佳成型工艺。采用HPLC测定疏肝苦荞茶中芦丁含量。结果:最优提取工艺为料液比1∶8,提取时间1.5 h,提取次数为3次;制备工艺最佳吸附比为1∶1.5;疏肝苦荞茶所含芦丁含量为3.14 mg/g,线性关系良好(r>0.999 9),精密度RSD小于2%,疏肝苦荞茶供试品在10 h内稳定,建立的方法重复性良好。结论:实验得出的提取、制备工艺稳定,建立的含量测定方法准确、可靠,为疏肝苦荞茶的制备与生产提供参考。     

基于网络药理学的四君子汤治疗胃炎的作用机制研究

目的通过网络药理学预测四君子汤治疗胃炎的主要活性成分和作用靶点,探讨其多成分-多靶点-多通路的潜在作用机制。方法通过中医药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)数据库收集四君子汤及其中4味中药党参、白术、茯苓、甘草的化学成分,经口服吸收率(OB)、类药性(DL)、半衰期(HL)3个条件筛选得到药物的有效成分,通过SwissTargetPrediction数据库进行有效成分靶点预测;同时从TTD、Drugbank和DisGeNET数据库对胃炎的靶点进行检索及筛选;成分靶点与疾病靶点映射后使用Cytoscape 3.2.1软件构建药物有效成分-靶点蛋白相互作用网络,使用String数据库绘制靶点蛋白-靶点蛋白相互作用网络;对靶点蛋白利用DAVID数据库进行GO分析和KEGG分析,构建核心有效成分-核心靶点-代谢通路网络图。结果从四君子汤中筛选出68个化学成分,涉及治疗胃炎的10个靶点;GO分析结果表明其涉及单孢素代谢过程、杂环代谢过程、药物代谢过程、药物分解过程、类固醇代谢过程等9个生物过程,涉及氧结合、单加氧酶活性、氧化还原酶活性等10个分子功能,包括细胞器膜、内质网膜等6个细胞组成;KEGG分析结果表明其可能通过药物代谢-细胞色素P450、亚油酸代谢、细胞色素P 450对外源性物质代谢的影响、神经活性配体与受体的相互作用、化学致癌、类固醇激素生物合成、视黄醇代谢7个信号通路治疗胃炎。结论四君子汤通过多靶点、多通路治疗胃炎,为今后分子机制的研究奠定一定的基础。     

养肺苦荞茶制备工艺及其含量测定

目的:优选养肺苦荞茶的最佳水提取工艺并建立同时测定成品中柚皮苷与芦丁含量测定方法,为该保健茶的开发提供一定的基础依据。方法:以干膏得率与柚皮苷的提取率为指标,在单因素试验基础上,采用正交试验考察加水量、提取时间、提取次数对养肺苦荞茶提取工艺的影响,综合评价优选出最佳工艺条件。并采用HPLC测定养肺苦荞茶中柚皮苷与芦丁的含量。Diamonsil C18色谱柱(200 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈(A)-0.5%冰醋酸溶液(B),梯度洗脱(0～10 min,A为10%～12%;10～15 min,A为12%～17%,15～25 min,A为17%;25～35 min,A为17%～20%;35～37 min,A为20%～24%;37～40 min,A为24%～10%;40～45 min,A为10%～10%;)流速1.0 m L·min~(-1),芦丁检测波长257 nm,柚皮苷检测波长283 nm,柱温30℃。结果:优选出的最佳提取工艺为加10倍量水,回流提取3次,每次提取1 h;干膏得率28.75%,柚皮苷转移率32.81%;养肺苦荞茶所含芦丁含量为0.64 mg/g;柚皮苷含量为17.28 mg/g。结论:建立的HPLC检测成品中柚皮苷与芦丁含量方法准确可靠,优化出的提取工艺稳定,简便可行,可为养肺苦荞茶的制备与生产提供参考。     

重组人IL-15促人脐血CD34+造血干细胞定向分化为NK细胞

目的 探讨IL－15促CD34^ 造血干细胞定向分化为NK细胞的作用。方法 采用MACS法分离脐血中CD34^ 细胞，分别用IL－15、SCF（造血干细胞因子）和IL－15 SCF体外培养，流式细胞仪测定CD3、CD16、CD56分子，MTT法检测NK细胞杀伤活性。结果 IL－15可以促进CD34^ 细胞分化为以CD56^ CD16^-为主的NK细胞，SCF具有较强的协同作用。结论 IL－15具有促使NK细胞定向分化的作用。     

养心苦荞茶制备工艺及其含量测定

目的:优选养心苦荞茶的最佳制备工艺并建立其成品中芦丁的含量测定方法,为该保健茶的开发提供一定的基础依据。方法:以干膏得率与甘草酸铵的转移率为指标,在单因素试验基础上,采用正交试验考察加水量、提取时间、提取次数对养心苦荞茶中淡竹叶甘草提取工艺的影响,对苦荞吸附淡竹叶、甘草药液比例进行考察,确定养心苦荞茶的最佳制备工艺;并采用HPLC测定养心苦荞茶中芦丁的含量。结果:优选出的最佳提取工艺为加16倍量水,回流提取3次,每次提取1 h;干膏得率20.96%,甘草酸铵转移率68.43%;苦荞与淡竹叶甘草药液的吸附比例为1∶1,养心苦荞茶所含芦丁的平均含量为3.62 mg/g。结论:优化出的提取工艺稳定,简便可行,可为养心苦荞茶的制备与生产提供参考。     

药用植物miRNA的研究进展

微小RNA（miRNA）是一类长约22个核苷酸的小分子单链RNA，可以在转录后水平调控基因表达，对人体的生长、发育、生理和病理过程具有重要的调控作用。有研究发现，中药的植物miRNA可以被稳定吸收进入体内，而发挥其特异性的药理作用。中药miRNA的研究极大地提高了现代药理研究对中药有效成分的认知水平，也为疾病治疗提供了新的途径，更为中药研究提供了一种新的研究思路与方法。     

香茯健脾苦荞茶的制备工艺及其含量测定

目的：研究香茯健脾苦荞茶的最佳提取、制备工艺并建立该茶剂中芦丁含量测定的方法。方法：采用单因素及正交试验设计分别对香薷挥发油提取率及香薷、茯苓水提工艺进行优选，从而得出最佳提取工艺。将提取药液吸附于苦荞上，判断其最佳吸附比。采用HPLC测定香茯健脾苦荞茶中芦丁含量。Diamonsil C18（200 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱；流动相为甲醇-0.5%冰乙酸（34∶66）；流速为1.0 mL·min-1；柱温为30 ℃；检测波长为256 nm。结果：香薷挥发油提取率的最佳工艺为料液比1∶12，浸泡2.0 h，提取4.0 h；香苓健脾苦荞茶最佳提取工艺为料液比1∶10，提取时间为0.5 h，提取次数为3次；浓缩药液与苦荞的最佳吸附比1∶1；香茯健脾苦荞茶所含芦丁质量分数为3.47 mg·g-1，苦荞的有效成分芦丁的线性关系良好（r＞0.999 9）。结论：此提取工艺简单经济、吸附比例合理、成型工艺可行；所建立的含量测定方法简单、准确、灵敏、重复性好，可为香茯健脾苦荞茶的进一步开发、品质评价和质量控制提供参考。     

二子益肾苦荞茶制备工艺及其含量测定

目的:研究二子益肾苦荞茶的制备工艺并对其进行含量测定。方法:以干膏得率与鞣花酸转移率为指标,在单因素试验基础上,采用正交试验考察加水量、提取时间、提取次数对二子益肾苦荞茶中枸杞子、覆盆子提取工艺的影响,对苦荞吸附枸杞子、覆盆子药液比例进行考察,确定二子益肾苦荞茶的制备方法 ;并采用HPLC测定二子益肾苦荞茶中芦丁、鞣花酸的含量。结果:枸杞子和覆盆子的最佳提取工艺为8倍量水,提取3次,每次2 h,出膏率为47.53%,鞣花酸提取率为97.76%;苦荞与枸杞子、覆盆子提取液的吸附比例为1∶0.5时吸附效果最佳;芦丁和鞣花酸的线性关系良好(r0.999),芦丁和鞣花酸的加样回收率均值分别为103.02%(RSD=1.37%)和102.16%(RSD=1.09%)。结论:该试验研究的最佳提取工艺简单经济;最佳的吸附比例合理,成型工艺可行;该研究建立的含量测定方法简单、准确、灵敏、重复性好,为二子益肾苦荞茶的进一步开发、品质评价和质量控制提供了科学依据。     

益母草治疗寒凝血瘀型痛经的网络药理学作用机制研究

目的构建益母草Leonurus japonicus化学成分-疾病靶点-代谢信号通路网络,探究益母草多成分-多靶点-多通路治疗寒凝血瘀型痛经的作用机制。方法利用TCMSP数据库与Swiss Target Prediction服务器获取益母草的化学成分与作用靶点,结合DrugBank、DisGeNET、TTD等数据库获取益母草治疗寒凝血瘀型痛经的作用靶点;通过DAVID网站对作用靶点进行GO功能富集分析和KEGG通路分析,采用Cytoscape 3.6.0构建益母草活性成分-痛经作用靶点-代谢信号通路网络图,探讨益母草治疗寒凝血瘀型痛经的作用机制;并进一步采用Westernblotting实验验证益母草对寒凝血瘀型痛经模型大鼠子宫组织中花生四烯酸代谢通路环氧化酶1(PTGS1)、PTGS2蛋白表达的影响。结果获得益母草潜在活性成分共8个,与痛经相关疾病靶点22个,关键靶点涉及PTGS1、PTGS2、ALOX5、PLAG2A、AKR1C3等。GO功能富集分析共得到GO条目71个(P0.05),其中生物过程(BP)条目46个,细胞组成(CC)条目4个,分子功能(MF)条目21个。益母草治疗痛经可能作用靶标22个,KEGG通路富集筛选得到7条信号通路(P0.05),涉及花生四烯酸代谢、亚油酸代谢、甾类激素生物合成等;益母草可显著提高模型大鼠子宫中PTGS1、PTGS2蛋白表达水平(P0.05),验证了网络药理学的部分预测结果。结论益母草可能通过作用于花生四烯酸代谢通路起到治疗寒凝血瘀型痛经的作用。     

基于网络药理学的四君子汤治疗2型糖尿病的作用机制研究

目的通过网络药理学预测四君子汤治疗2型糖尿病(T2DM)的主要活性成分和作用靶点,探讨其多成分-多靶点-多通路的潜在作用机制;并选取AMPK信号通路中的Ins R、PI3K进行动物实验验证。方法通过中医药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)、文献挖掘和本课题组已有研究收集四君子汤及其4味中药党参、白术、茯苓、甘草的化学成分,经口服生物利用度(OB)、类药性(DL)、半衰期(HL)3个条件筛选得到药物的有效成分,通过Swiss Target Prediction数据库进行有效成分靶点预测;同时从TTD、Drugbank和Dis Ge NET数据库对T2DM的靶点进行检索及筛选;成分靶点与疾病靶点映射后使用Cytoscape3.2.1软件构建药物有效成分-靶点蛋白相互作用网络,对该网络进行拓扑学分析筛选节点自由度(degree)≥平均自由度的节点得到核心有效成分-核心靶点网络,同时使用String数据库绘制核心靶点蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络;对核心靶点基因利用DAVID数据库进行GO分析和KEGG分析,构建核心有效成分-核心靶点-代谢通路网络图,探讨四君子汤治疗T2DM的潜在作用机制。采用系统对接网站进行相关度前3蛋白对相关度前5成分的分子对接。并进一步采用动物实验进行验证:选取SD大鼠,运用高糖高脂饲料联合小剂量链脲佐菌素(STZ)诱导T2DM模型,5.65 g/kg四君子汤ig给药28 d,检测各组大鼠的空腹血糖(FBG)及口服葡萄糖耐量(OGTT),RT-PCR法检测AMPK信号通路中Ins R、PI3Km RNA的表达量。结果从四君子汤中筛选出113个化学成分,涉及治疗T2DM的47个靶点;根据节点自由度≥平均自由度,筛选出核心成分22个,核心靶点27个;GO分析结果表明其涉及血糖稳态、脂肪组织发育的正调控等7个生物过程,涉及类固醇激素受体活化、药物结合等4个分子功能,包括质膜、核常染色质2个细胞组成;KEGG分析结果表明其可能通过AMPK信号通路、PPAR信号通路、胰岛素抵抗等14个信号通路治疗糖尿病。分子对接60%成分具有强烈的结合活性,40%成分具有较强的结合活性。四君子汤可显著改善T2DM大鼠OGTT(P<0.001),同时降低FBG(P<0.01),显著升高Ins R、PI3K mRNA(P<0.001)的表达量,验证了网络药理学的部分预测结果。结论四君子汤通过多靶点、多通路治疗T2DM,为其分子机制的研究奠定一定的基础。