羟基红花黄色素A对激素诱导骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

目的：观察羟基红花黄色素A（HSYA）对激素诱导兔骨髓间充质干细胞（BMSCs）内成骨标志物碱性磷酸酶、Cbfαl及Ⅰ型胶原表达的影响,探讨其防治激素性股骨头缺血性坏死的作用机制。方法：健康成年新西兰大白兔15只,体重0.9～1.3 kg,腹腔注射麻醉后,无菌条件下作胫骨和髂前上棘骨髓腔穿刺抽取骨髓血,分离出BMSCs,体外培养并传代,取第3代生长状态良好的BMSCs随机分为空白组,模型组及羟基红花黄色素A低、中、高剂量组。模型组用大剂量地塞米松诱导BMSCs成脂分化,抑制其成骨分化;羟基红花黄色素A低、中、高剂量组加入地塞米松作用的同时给予羟基红花黄色素A干预;空白组无特殊处理。1周后检测各组细胞内成骨标志物碱性磷酸酶活性、Cbfαl及Ⅰ型胶原 mRNA的表达。结果：模型组兔BMSCs内碱性磷酸酶活性较空白组明显下降（P<0.01）,Cbfαl及Ⅰ型胶原 mRNA的表达也明显降低（P<0.01）,而HSYA各组较模型组均有明显升高（P<0.05或P<0.01）.结论：羟基红花黄色素A治疗激素性股骨头缺血坏死的机制可能与对抗激素诱导下的BMSCs成骨分化减少有关。     

羟基红花黄色素A对激素诱导骨髓间充质干细胞ERK1/2的干预作用

目的探讨羟基红花黄色素A防治激素性股骨头缺血坏死的作用机理。方法用大剂量地塞米松诱导体外培养家兔骨髓间充质干细胞成脂分化,在诱导其成脂分化的同时给予不同浓度的羟基红花黄色素A进行干预,干预5 d后用蛋白免疫印迹方法测定各组细胞ERK1和ERK2蛋白的表达。结果羟基红花黄色素A干预组细胞ERK1和ERK2蛋白的表达较对照组明显升高,差异具有统计学意义(P0.05)。结论羟基红花黄色素A防治激素性股骨头缺血性坏死的作用机理不仅是改善坏死股骨头局部血运,同时还与其促进骨髓间充质干细胞向骨细胞转化、增殖有关。     

补肾活血汤对激素性股骨头缺血坏死成骨与破骨的影响

目的探讨补肾活血汤对激素性股骨头缺血坏死成骨与破骨的影响。方法成年SD大鼠60只,随机分为正常组、模型组和补肾活血汤高、中、低剂量组5组,每组12只。实验第1周,模型组和高、中、低剂量组注射20μg/kg脂多糖2次,每次间隔24 h,24 h后注射甲强龙40 mg/kg,连续注射3次,每次间隔24 h;实验第2~6周,甲强龙用量减至20 mg/kg,每周1次;正常组注射相同剂量相同频次的生理盐水;实验第7~10周,高、中、低剂量组给予2.5 g/kg、5 g/kg、10 g/kg的补肾活血汤灌胃,正常组和模型组以5 g/(kg/d)的生理盐水灌胃;实验第11周处死大鼠,取血清,检测血清骨碱性磷酸酶(BALP)含量高低,取双侧股骨头,光镜下观察股骨头形态改变。结果高剂量组软骨层内可见大量致密结缔组织增生,软骨层内富含充血扩张的血管或静脉窦,部分栓塞或机化,管腔内炎性细胞聚集,机化的血管周围可新生类骨质。高剂量组血清BALP含量与正常组比较,P0.05;中、低剂量组和模型组血清BALP含量与正常组比较,P0.05;高剂量与中、低剂量组及模型组比较,P0.05。结论高剂量补肾活血汤可提高大鼠体内BALP含量,有利于坏死骨组织的修复。     

兔骨髓间充质干细胞的体外培养、鉴定及诱导分化

目的建立兔骨髓间充质干细胞的体外分离、培养、鉴定方法。方法通过全骨髓贴壁法体外分离、培养、纯化兔骨髓间充质干细胞,进行形态学观察,绘制生长曲线,检测细胞表面标志物,加入诱导剂诱导细胞向成骨、成脂方向分化,油红O染色,检测细胞内碱性磷酸酶(ALT)、甘油三酯(TG)含量。结果兔骨髓间充质干细胞符合正常细胞生长特性,形状以梭形、纺锤形为主,后期多数细胞呈长梭形;细胞生长较旺盛,可连续传7~10代,以第3代细胞状态最佳;第3代骨髓间充质干细胞CD29表达呈阳性,CD34表达呈阴性;成骨、成脂诱导后,油红O染色出现明显脂滴,ALT、TG含量明显增高。结论全骨髓贴壁法可成功分离和培养出兔骨髓间充质干细胞,具有间充质干细胞的一般生物学特性,且生长状态良好,增殖力强,经诱导后具有向成骨和成脂分化的潜能,该方法获得的骨髓间充质干细胞可能成为组织工程的优良种子细胞。     

葛根素对激素诱导骨髓间充质干细胞PPARγmRNA和CEBPαmRNA表达的影响

目的探讨葛根素防治激素性股骨头缺血性坏死的作用机制。方法大剂量地塞米松诱导体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化,在诱导成脂的同时给予不同浓度的葛根素进行干预。干预6 d后检测细胞内成脂标志物PPARγmRNA和C/EBPαmRNA的表达。结果葛根素干预组PPARγmRNA和C/EBPαmRNA的表达较对照组明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论葛根素防治激素性股骨头缺血坏死的机理不仅是改善股骨头局部的微循环,同时还与其抑制激素诱导下的BMSCs成脂分化有关。     

葛根素干预激素诱导骨髓间充质干细胞成脂分化的Wnt信号途径

背景：国内外学者研究证明,激素性股骨头缺血性坏死的发病机制与体内脂质代谢紊乱,尤其是大剂量激素诱导下骨髓间充质干细胞的成脂分化有关。目前葛根素抑制激素诱导骨髓间充质干细胞成脂分化的Wnt信号转导途径还未经证实。〈br〉 目的：观察葛根素干预激素诱导大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化过程中 Wnt 信号途径相关基因及关键蛋白β-catenin表达的变化。〈br〉 方法：第3代SD大鼠骨髓间充质干细胞随机分为空白组、激素组、葛根素低、中、高剂量组,5组干预6 d后RT-PCR法检测Wnt/β-catenin信号通路主要成员Wnt10b mRNA、GSK3β mRNA、β-catenin mRNA的表达,Western blot法对β-catenin蛋白的表达进行检测分析。〈br〉 结果与结论：与激素组比较,葛根素各干预组Wnt10b mRNA、β-catenin mRNA及β-catenin蛋白的表达水平均显著升高;GSK3βmRNA的表达水平显著降低。提示葛根素对激素诱导骨髓间充质干细胞成脂分化的抑制作用可能是通过调节信号通路的Wnt10b mRNA、GSK3βmRNA、β-catenin mRNA及β-catenin蛋白的表达来实现的。葛根素防治激素性股骨头缺血坏死的机制不仅是改善股骨头局部的微循环,同时还与其抑制激素诱导下骨髓间充质干细胞的成脂分化有关。     

补肾活血汤对激素性股骨头缺血坏死成骨与破骨的影响

目的探讨补肾活血汤对激素性股骨头缺血坏死成骨与破骨的影响。方法成年SD大鼠60只,随机分为正常组、模型组和补肾活血汤高、中、低剂量组5组,每组12只。实验第1周,模型组和高、中、低剂量组注射20μg/kg脂多糖2次,每次间隔24 h,24 h后注射甲强龙40 mg/kg,连续注射3次,每次间隔24 h;实验第26周,甲强龙用量减至20 mg/kg,每周1次;正常组注射相同剂量相同频次的生理盐水;实验第710周,高、中、低剂量组给予2.5 g/kg、5 g/kg、10 g/kg的补肾活血汤灌胃,正常组和模型组以5 g/（kg/d）的生理盐水灌胃;实验第11周处死大鼠,取血清,检测血清骨碱性磷酸酶（BALP）含量高低,取双侧股骨头,光镜下观察股骨头形态改变。结果高剂量组软骨层内可见大量致密结缔组织增生,软骨层内富含充血扩张的血管或静脉窦,部分栓塞或机化,管腔内炎性细胞聚集,机化的血管周围可新生类骨质。高剂量组血清BALP含量与正常组比较,P>0.05;中、低剂量组和模型组血清BALP含量与正常组比较,P<0.05;高剂量与中、低剂量组及模型组比较,P<0.05。结论高剂量补肾活血汤可提高大鼠体内BALP含量,有利于坏死骨组织的修复。