藏药珊瑚七十味丸中重金属含量及Hg元素化学形态研究＊

目的 测定珊瑚七十味丸（Ratanasampil，RNSP）中5种重金属元素的含量，并确定Hg元素存在的各种化学形态，为名贵藏药重金属含量及元素形态的确定提供准确的新型研究方法。方法 采用强酸消解法处理珊瑚七十味丸，利用电感耦合等离子体原子发射光谱（Inductively coupled plasma atomic emission spectrometry，ICP-OES）测定样品中不同重金属元素的含量，同时采用X射线光电子能谱技术（X-ray photoelectron spectroscopy，XPS）对样品中的Hg元素进行价态分析。结果 不同批次的珊瑚七十味丸中Hg、As、Cr、Cd及Cu这5种重金属元素含量存在一定的差异；Hg元素存在游离Hg2+、HgS、HgO共3种形式，且差异较大。结论 ICP-OES和XPS对药物中的5种重金属含量和Hg元素的价态进行的检测和分析，得到的数据较为准确、可靠，能够为珊瑚七十味丸的临床使用提供数据上的参考依据，也为传统道地藏药材中的重金属含量检测及价态分析提供了一种新的研究思路和方法。     

中药糖痹康对高糖环境下大鼠雪旺细胞NGF表达的影响

目的:探讨中药糖痹康对高糖环境下大鼠雪旺细胞NGF表达的影响。方法:运用原代培养的方法,在高糖环境下建立大鼠SCs模型,以弥可保药物组作为对照,并使用Western blot检测糖痹康含药血清对高糖环境下大鼠坐骨神经雪旺细胞NGF蛋白的表达,Real-time PCR检测SCs中NGF mRNA的表达,ELISA检测各组雪旺细胞上清NGF的表达。结果:大鼠雪旺细胞在高糖的环境下培养,其增殖的能力受到显著抑制,同时雪旺细胞NGF的合成显著减少,与糖痹康含药血清培养后的细胞对比,经糖痹康组培养的雪旺细胞,其细胞NGF的表达、合成水平和增殖能力均显著提高。结论:中药糖痹康对高糖条件下大鼠雪旺细胞的增殖能力、NGF mRNA表达和NGF合成的抑制性变化具有显著改善作用。     

止消通脉宁干预TGF-β1诱导的HK-2细胞VEGF mRNA的表达

目的:通过观察止消通脉宁药物血清干预转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达,进一步探讨其在防治肾间质纤维化方面的作用。方法:将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养;实验分为6组:空白对照组、单纯TGF-β1诱导组(TGF-β110ng/ml)、空白血清对照组(TGF-β110ng/ml+10%空白血清)、干预1组(TGF-β110ng/ml+10%低剂量止消通脉宁药物血清)、干预2组(TGF-β110ng/ml+10%中剂量止消通脉宁药物血清)、干预3组(TGF-β110ng/ml+10%高剂量止消通脉宁药物血清)。药物干预24h后,荧光定量PCR检测VEGF mRNA的表达。结果:HK-2细胞经TGF-β1诱导后,VEGF mRNA的表达显著上升,与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),经止消通脉宁药物血清干预后,VEGFmRNA的表达逐步下降,与单纯TGF-β1诱导组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:止消通脉宁在一定程度上能够抑制TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞纤维化,其机制的可能与调节纤维化细胞因子VEGF的mRNA表达有关。     

糖尿病大鼠坐骨神经传导速度变化

目的：探讨链脲佐菌素（Streptozotocin ,STZ）诱导的糖尿病大鼠坐骨神经传导速度（NCV）变化,初步确立糖尿病周围神经病（diabetic peripheral neuropathy ,DPN）大鼠模型的构建和评价方法。方法：选用SD大鼠,随机分为正常对照组和模型组,模型组腹腔注射STZ。检测动物体质量、血糖、触觉、神经传导速度（NCV）变化,并取大鼠坐骨神经组织进行 HE染色,观察其形态结构变化。结果：与正常对照组比较,给予STZ后,模型组动物体质量逐渐下降,4 w 后比较差异有显著意义（ P＜0．05）,血糖显著升高（P＜0．001）;50％机械缩足阈值,于注射STZ 2 w 后明显下降（P＜0．05）,注射STZ后4 w明显上升（P＜0．05）;给予STZ后4 w ,模型组大鼠运动神经传导速度（MCV）和感觉神经传导速度（SCV）显著减慢（P＜0．05）,坐骨神经组织神经纤维松散,密度不均匀。结论：注射STZ 4 W后,大鼠MCV和SCV减慢,触觉敏感度呈双相变化,坐骨神经出现病理形态结构,成功复制出DPN大鼠模型。     

鹰嘴豆中3种异黄酮及其乙氧基化衍生物体外协同降糖活性研究＊

目的：通过对鹰嘴豆中3种异黄酮类化合物染料木素、鹰嘴豆芽素A、刺芒柄花素进行乙氧基化结构修饰,研究其降糖活性及协同降糖活性。方法：对上述3种异黄酮类化合物进行乙氧基化结构修饰,并研究该3种异黄酮类化合物及其衍生物降糖活性,并对化合物进行组合给药,研究其之间存在的协同降糖活性,选择胰岛素抵抗HepG2细胞作为降糖活性筛选模型。结果：获得4个乙氧基化产物,3个母体异黄酮衍生物中染料木素的降糖活性优于鹰嘴豆芽素A和刺芒柄花素,差异具有统计学意义（P<0.05）,3个母体异黄酮衍生物最大给药剂量与阳性药盐酸二甲双胍相比,效果不如盐酸二甲双胍,差异均具有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。衍生物中化合物a和d之间差异无统计学意义（P>0.05）,化合物b和c降糖效果均不如化合物a和d,差异具有统计学意义（P<0.05）,其中化合物d较修饰前降糖活性有明显提高（P<0.05）。组合5的降糖活性与盐酸二甲双胍相当,差异无统计学意义（P>0.05）。结论：本研究发现,通过化合物组合,化合物之间可以起到协同作用,发挥更好的降糖效果,为开发具有自主知识产权的降糖药物提供一定的基础。     

非洲传统草药Hypoxis Hemerocallidea提取物对糖尿病骨骼肌AMPK信号通路作用机制研究＊

目的：探讨Hypoxis Hemerocallidea（AP）对糖尿病大鼠骨骼肌AMPK信号通路的影响。方法：①40只雄性SD大鼠,10只作为正常组,30只高脂喂养1月,加一次性腹腔注射STZ造模,造模成功后分为模型组、盐酸吡格列酮组、AP组,分组灌胃5周。取骨骼肌组织包埋切片进行免疫组化;利用Western Blot检测骨骼肌p-AMPKα、p-AS160、GLUT4蛋白表达情况;②使用100 mmol·L-1葡萄糖诱导建立C2C12骨骼肌细胞胰岛素抵抗模型,设为模型组;另加AP含药血清设置处理组;对照组为正常细胞。检测各组葡萄糖消耗量,细胞增殖情况,检测SOD、MDA含量,采用Western Blot、RT-PCR检测各组p-AMPKα、p-AS160、GLUT4蛋白表达情况。结果：①与正常组比较,AP能上调DM大鼠骨骼肌组织p-AMPKα蛋白量（P<0.01）,增加骨骼肌AS160的磷酸化水平（P<0.01）,上调GLUT4表达（P<0.01）;②与正常组比较,高糖造成了C2C12骨骼肌细胞活性下降,葡萄糖消耗量减低（P<0.05）,SOD降低（P<0.01）,MDA增加（P<0.01）,p-AMPKα、p-AS160、GLUT4蛋白表达降低（P<0.01）。干预48 h后,AP含药血清组C2C12骨骼肌细胞SOD均显著增高（P<0.01）,MDA含量降低（P<0.05）,提高了AMPKα、AS160的磷酸化水平（P<0.01）,增加GLUT4蛋白表达（P<0.01）。结论：诱导AMPKα、AS160磷酸化促进GLUT4表达可能是AP改善糖尿病骨骼肌胰岛素抵抗的作用机制之一。     

斑鸠菊果实中总黄酮的提取工艺研究＊

目的：优选斑鸠菊果实中总黄酮的最佳提取工艺。方法：采用分光光度法,通过单因素实验考察乙醇浓度、提取次数、提取时间以及液料比对斑鸠菊果实中总黄酮提取率的影响。结果：最佳提取条件为乙醇浓度70%、提取4次,每次1 h、料液比为1：20。结论：采用最佳提取条件,得到的斑鸠菊果实中总黄酮含量为103.55 mg·g-1。     

中药复方糖痹康对糖尿病大鼠神经保护机制的研究

目的:观察中药复方糖痹康对糖尿病周围神经病变大鼠血浆内皮素(ET)和血清一氧化氮(NO)含量的影响,探讨其神经保护机制。方法:采用高脂饲料和小剂量链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱发2型糖尿病大鼠动物模型,造模成功后随机分为模型组、甲钴胺组、糖痹康高、中、低剂量组,另设10只雄性SD大鼠为正常组,模型组和正常组给予蒸馏水,用不同剂量的糖痹康灌胃,并与甲钴胺对照,每4周检测体质量、空腹血糖,16周后取大鼠一侧坐骨神经,光镜观察各组大鼠坐骨神经病理变化及用放射免疫法检测糖痹康对糖尿病周围神经大鼠血浆ET及铜试纸显色法检测大鼠血浆大鼠血清NO的含量。结果:治疗16周后,糖尿病大鼠体质量、血糖明显改善。与模型组比较,甲钴胺组及中药各剂量组能明显改善糖尿病周围神经病变大鼠坐骨神经病理组织学损伤程度,与正常组比较,模型组大鼠血浆中ET的含量显著提高(P0.01),模型组大鼠血清中NO的含量显著降低(P0.01);与模型组比较,经药物干预后,各组大鼠血浆中ET的含量均降低(P0.01),糖痹康低剂量组大鼠血清中NO的含量升高(P0.05),甲钴胺组及糖痹康中、高剂量组大鼠血清中NO的含量均显著升高(P0.01),结论:糖痹康能降低糖尿病大鼠血糖对坐骨神经的形态具有保护作用及可上调糖尿病周围神经病变大鼠血浆ET的水平和下调糖尿病周围神经病变大鼠血清NO的水平。     

中药复方糖耐康干预KKAy小鼠胰岛素信号转导受体后通路作用机制研究

目的观察中药复方糖耐康对自发性2型糖尿病KKAy小鼠胰岛素信号转导受体后通路的影响。方法将KKAy小鼠40只采用随机数字表法分为模型组、糖耐康高剂量组、糖耐康低剂量组、吡格列酮组各10只,另取10只C57bl/6J小鼠作为正常对照组。各药物组灌胃相应剂量药物,正常对照组及模型组灌胃无菌水,连续给药60天。给药期间每周测量小鼠随机血糖、饮水量及体重变化,60天后测定小鼠空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FIns),计算胰岛素敏感指数(ISI),Western blot法测定小鼠骨骼肌和脂肪组织中蛋白激酶B(PKB/Akt1αSer 473)磷酸化、糖元合成激酶3β(GSK-3β)蛋白的表达。结果随给药时间的延长,糖耐康对多饮症状的改善逐渐明显,对体重无明显影响。糖耐康高剂量组FPG、FIns、ISI水平均较模型组显著降低(P0.05),PKB/Akt1αSer 473蛋白磷酸化水平较模型组明显升高(P0.05),GSK-3β蛋白表达较模型组明显下降(P0.05)。结论调节胰岛素信号转导受体后途径中PKB/Akt1αSer 473磷酸化、GSK-3β蛋白表达,可能是中药复方糖耐康改善胰岛素抵抗状态的作用机制之一。