当归补血汤在流体剪切应力环境中对内皮细胞功能的影响

目的观察当归补血汤在流体剪切应力(FSS)环境中对人内皮细胞功能的影响。方法将细胞置于平行平板流动小室,加载稳定层流FSS(0,0.12,1.2,2.4 Pa)6 h后,将不同FSS环境中的细胞随机分为5组:对照组加入无血清培养液灌流;辛伐他汀组加入含0.1μmol/L辛伐他汀培养液灌流;3个中药组分别加入含3 g/L的当归补血汤(当归、黄芪比为1∶1、1∶3、1∶5)培养液灌流。以上各组经FSS加载12 h后,收集细胞及灌流液,检测细胞增殖力、一氧化氮(NO)含量,细胞内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)mRNA及蛋白的表达。结果对照组FSS为1.2、2.4 Pa时,内皮细胞表达eNOS、VEGFR2的水平较其在0、0.12 Pa时升高(P0.05);与对照组相比,当归补血汤在FSS为0、0.12 Pa时能上调细胞eNOS、VEGFR2表达并增强其增殖和分泌NO功能(P0.05)。且当归补血汤(当归、黄芪比为1∶3、1∶5)在FSS为1.2、2.4 Pa时可上调细胞eNOS、VEGFR2表达并增强其增殖和分泌NO功能(P0.05)。结论 FSS环境是影响当归补血汤对内皮细胞作用效果的重要因素之一。     

剪切应力环境中当归补血汤对大鼠内皮祖细胞功能的影响

目的 观察大小不同的层流剪切应力（SS）环境中当归补血汤对大鼠内皮祖细胞（EPCs）功能的影响。方法 制备大鼠骨髓EPCs细胞爬片,置于平行平板层流小室,加载稳定层流SS（0,0.12,1.2,2.4 Pa）6 h后,将不同SS作用下的EPCs随机分为8组,分别为空白组予以无血清培养液灌流、辛伐他汀组予以含0.1 μmol·L^-1辛伐他汀的培养液灌流、当归补血汤组予以含低、中、高浓度的当归补血汤培养液灌流、抑制剂组则在当归补血汤各浓度组中加入LY294002（共3组）,以上各组加载SS 12 h后,检测灌流液中一氧化氮（NO）含量,同时检测细胞增殖、迁移和成小管功能,细胞内皮型一氧化氮合酶（eNOS） mRNA及蛋白激酶B（Akt）的表达。结果 与空白组比较,辛伐他汀及当归补血汤高浓度均可提高不同SS作用下的细胞功能及NO分泌,促进eNOS mRNA及Akt蛋白的表达（P<0.05）,而当归补血汤中浓度只能促进SS为0 Pa时的细胞功能及NO,eNOS mRNA,Akt蛋白的表达（P<0.05）,抑制剂则阻断当归补血汤高、中浓度对细胞的这些作用。结论 不同的SS环境是影响当归补血汤调节EPCs功能的重要因素之一,SS环境中当归补血汤可通过上调NO/eNOS/Akt表达来维护EPCs的功能。     

当归补血汤对低流体剪切应力作用下内皮细胞功能损伤的保护作用

目的:观察不同当归、黄芪质量比(归芪比)的当归补血汤对低流体剪切应力(FSS)损伤内皮细胞功能的保护作用。方法:采用平行平板流动小室加载低FSS进行造模,实验将内皮细胞分为空白组和模型组(分别予以M199培养液培养2 h),辛伐他汀组(予以0. 1μmol·L~(-1)的辛伐他汀培养2 h),当归补血汤组(予以3 g·L~(-1)归芪比1∶1,1∶3,1∶5的当归补血汤培养2 h),培养结束后弃上清,空白组加载正常FSS,余各组加载低FSS,在30,60,360 min时分别收集每组细胞及灌流液,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖力,硝酸酶还原法检测灌流液中一氧化氮(NO)含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞一氧化氮合酶(eNOS) mRNA及蛋白的表达。结果:与空白组比较,模型组细胞分泌NO及表达eNOS在60 min时显著升高(P 0. 01),随后在360 min降低;与模型组比较,当归补血汤对细胞增殖功能无明显影响,但可明显促进第360 min时细胞的NO分泌及eNOS表达,以归芪比1∶3,1∶5的效果更为显著。结论:当归补血汤对低FSS作用下的内皮细胞功能损伤具有一定的保护作用。