无镁诱导培养大鼠海马神经元癫痫放电模型中延迟整流钾电流的变化

 摘要：目的 利用无镁细胞外液诱导原代培养大鼠海马神经元癫痫放电模型来检测延迟整流钾电流的变化。方法 采用新生24h内Wistar大鼠,分离海马神经元进行原代培养。体外培养至12-16d时,无镁细胞外液处理神经元3h并恢复正常细胞外液,应用全细胞膜片钳技术记录神经元的放电情况及延迟整流钾电流。结果 无镁处理后的神经元存在自发的“癫痫样”放电;无镁诱导可使神经元延迟整流钾电流增大。结论 延迟整流钾电流增大可能与无镁诱导体外培养大鼠海马神经元自发异常放电的基础病理机制相关。     

肝细胞脂肪变性影响巨噬细胞炎症反应加速动脉粥样硬化形成

目的:基于代谢组学和网络药理学探讨非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)与动脉粥样硬化共病的发病机制。方法:野生型C57BL/6J小鼠和ApoE^-/-小鼠各6只，分别给予普通饮食和高脂饮食16周，构建NAFLD和动脉粥样硬化共病模型，取血清标本进行非靶向代谢组学检测，鉴定差异代谢产物。运用网络药理学探讨差异代谢物对动脉粥样硬化和NAFLD的可能作用机制，并采用小鼠NCTC1469细胞和RAW264.7细胞构建体外共病模型，油红O染色检测细胞脂质积蓄情况，细胞计数试剂盒检测细胞活性，透射电镜和JC-1染色检测线粒体形态和功能，并验证共病模型的可能病理机制。结果:代谢组学分析共鉴定出85种共病差异代谢产物。将前二十种差异代谢物进行网络药理学分析，结果显示差异代谢产物影响动脉粥样硬化和NAFLD的核心靶点为STAT3、EGFR、MAPK14、PPARG、NFKB1、PTGS2、ESR1、PPARA、PTPN1、SCD；基因组百科全书富集分析显示前十位的信号通路为PPAR信号通路、糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路、酒精性肝病、催乳素信号通路、胰岛素抵抗、TNF信号通路、...     

经络辨证论治冠心病选穴规律与机理探析

冠心病的发病率逐年增高,且严重危害生命健康。基于经络学说的针刺疗法治疗冠心病确有疗效。《黄帝内经》作为经络学说的奠基之作,较完善的记载了经络系统的循行和病候,是经络辨证的基础和依据。从经络角度系统地梳理与冠心病发病相关的经脉、络脉,有利于全面总结针刺治疗冠心病的选穴规律和机理,以此为经络辨证论治冠心病提供借鉴和参考,进而丰富冠心病的中医辨证体系。     

黄芩苷抗博来霉素大鼠肺纤维化作用及机制研究

目的 观察黄芩苷对大鼠肺纤维化的病理学改变及其机制研究.方法 通过气管内注射博来霉素方法复制大鼠肺纤维化模型,腹腔注射不同剂量黄芩苷,28 d后取材,病理采用HE和Masson染色观察肺泡炎症及纤维化程度,免疫组织化学方法检测肺组织中TGF-β1的表达情况.结果 与模型组相比,黄芩苷组高低2个剂量组肺泡炎症及纤维化程度均明显减轻,高剂量组效果更好(P<0.05);与模型组相比,黄芩苷组肺组织内TGF-β1含量明显下降(P<0.01).结论 黄芩苷抑制肺纤维化的发生与发展,其可能机制是通过降低肺内TGF-β1来实现的.     

托吡酯对遗传性癫痫大鼠脑内GAT-1和GAT-3表达的影响

目的探讨托吡酯对TRM大鼠脑内GAT-1和GAT-3 mRNA和蛋白表达的影响。方法分别应用实时定量PCR法和Western blot方法检测Wistar正常组、TRM组、TPM40组和TPM80组脑内GAT-1和GAT-3 mRNA和蛋白表达。结果 GAT-1、GAT-3和β-actin标准曲线相关性良好,基因特异性强。GAT-1 mRNA在TRM组的海马高于正常组(P<0.01);与TRM组比较,TPM80组海马中GAT-1 mRNA明显降低(P<0.05);GAT-3 mRNA在TRM组海马中的表达高于正常组(P<0.05);GAT-1蛋白表达在TRM组的海马高于正常组(P<0.01);与TRM组比较,TPM80组海马中GAT-1蛋白明显降低(P<0.01);GAT-3蛋白在TRM组海马中的表达高于正常组(P<0.05)。结论 TRM组海马内GAT-1及GAT-3的表达增加可能促进了癫痫的发生。托吡酯的抗癫痫作用可能是通过降低海马内GAT-1的表达来实现的,这种调节存在剂量依赖性。     

黄芪及其活性成分对离体豚鼠心脏的作用

目的 探讨黄芪及其活性成分黄芪总黄酮、黄芪总皂苷、黄芪多糖对豚鼠离体心脏心肌缺血再灌注损伤的影响.方法 将36只豚鼠的离体心脏分为正常对照组(对照组)、缺血再灌注组(模型组)、黄芪组(AST组)、黄芪总黄酮组(TFA组)、黄芪总皂苷组(TSA组)和黄芪多糖组(APS组)6组.检测豚鼠离体心脏的心率、冠状动脉流量、心肌梗死面积、灌流液中乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)的活性、心肌组织中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性等.结果 再灌注期各时间点模型组心率均较对照组相应的时间点低(P ＜0.05或0.01),AST组和TFA组则均较模型组高(P ＜0.05或0.01),TSA组和APS组心率没有明显改善.再灌注5、10、15、20、25、30、40、50、60 min时模型组冠状动脉流量均较对照组相应时间点低(P均＜0.01).再灌注期AST组冠状动脉流量均高于模型组(P＜0.05或0.01).再灌注5、10、25、30、40 min时TFA组冠状动脉流量均高于模型组(P ＜0.05或0.01).TSA组和APS组冠状动脉流量没有明显改善.再灌注15、25、40、60 min时模型组灌流液中LDH活力均高于对照组(P均＜0.01).再灌注15、25、40、60 min时AST组灌流液中LDH活力均低于模型组(P均＜0.01).再灌注5、15、25、40、60 min时TFA组灌流液中LDH活力均低于模型组(P＜0.05或0.01).再灌注5 min时APS组灌流液中LDH活力显著低于模型组(P＜0.05).再灌注后各时间点TSA组灌流液中LDH活力与模型组比较差异均无统计学意义.再灌注15、60 min时模型组灌流液中CK活力均高于对照组(P均＜0.01).再灌注15 min时AST组和TFA组灌流液中CK活性均低于模型组(P均＜0.01).再灌注60 min时模型组灌流液中CK活力显著高于对照组(P＜0.01).AST组与TFA组灌流液中CK活力分别均低于模型组(P值分别为0.008和0.015).模型组缺血再灌注心肌组织中MDA含量为(5.95±0.91) μmol/g蛋白高于对照组的(3.62±0.58) μmol/g蛋白(P＜0.01).AST组和TFA组心肌组织中MDA含量分别为(4.52 ±0.47)和(4.47±0.78)μmol/g蛋白,均低于模型组(P分别＜0.01和0.05).模型组缺血再灌注心肌组织中SOD活力为(98.64±12.49) U/mg蛋白低于对照组的(153.55±13.25) U/mg蛋白(P＜0.01).AST组和TFA组心肌组织中SOD活力分别为(130.73 ±14.85)和(124.38±13.35) U/mg蛋白,均高于模型组(P均＜0.01).模型组心肌梗死面积百分比为(18.9±2.27)％高于对照组的(1.60±0.33)％(P＜0.01).AST组和TFA组心肌梗死面积百分比分别为(11.9±2.03)％和(13.31±1.17)％,均低于模型组(P均＜0.01).结论 黄芪及其有效成分黄芪总黄酮对豚鼠离体心脏心肌缺血再灌注损伤有保护作用,其机制可能与抗氧化应激有关.     

氧化苦参碱与阿司匹林联合应用对小鼠脑缺血损伤的保护作用

目的研究氧化苦参碱（OMT）与阿司匹林（ASA）联合应用对小鼠急性脑组织缺血的保护作用。方法70只小鼠随机分为7组（每组10只）：①模型组;②小剂量ASA组（ASA 20 mg.kg-1）;③大剂量ASA组（ASA80 mg.kg-1）;④小剂量OMT组（OMT 50 mg.kg-1）;⑤大剂量OMT组（OMT 200 mg.kg-1）;⑥ASA＋OMT小剂量合用组（ASA 20 mg.kg-1,OMT 50 mg.kg-1）;⑦尼莫地平组（尼莫地平20 mg.kg-1）。小鼠脑缺血前各药物组分别给予上述药物灌胃6天,每天1次;模型组给予同体积生理盐水连续灌胃6天,每天1次。末次给药1 h后采用断头法制备小鼠急性全脑缺血模型。观察小鼠的喘息次数和喘息维持时间,取小鼠脑组织测定丙二醛（MDA）含量和乳酸脱氢酶（LDH）活性。结果与模型组比较,OMT和ASA大剂量组及尼莫地平组小鼠断头后喘息次数增加（P〈0.05或P〈0.01）;OMT大剂量组及尼莫地平组小鼠断头后喘息维持时间延长（P〈0.05或P〈0.01）;OMT与ASA小剂量合用组小鼠断头后喘息次数明显增加、喘息维持时间明显延长（P〈0.01）。与模型组比较,OMT大剂量组和尼莫地平组脑组织MDA含量降低（P〈0.01）;ASA大剂量组和尼莫地平组LDH活性升高（P〈0.05）;OMT与ASA小剂量合用组MDA含量显著降低、LDH活性显著增加（P〈0.05或P〈0.01）。结论氧化苦参碱与阿司匹林合用较各自单用对小鼠急性脑缺血有明显的保护作用,其作用可能与其抗氧自由基有关。     

从经气运行解析麻黄附子细辛汤证的机制与应用

麻黄附子细辛汤,首见于张仲景《伤寒论》第301条:"少阴病,始得之,反发热,脉沉者,麻黄附子细辛汤主之"。本方主治太少两感证,为阳虚外感的代表方,临床应用广泛。经络是人体气血运行的通道,是人体结构的重要组成部分。《伤寒论》六经辨证体系与经络理论关系密切,该理论体系下的组方遣药亦与经气运行密不可分。文章基于《黄帝内经》《难经》,从经气运行角度探析麻黄附子细辛汤生理基础、组方机制、应用指征、使用范围等,意在触类旁通、灵活辨证以扩大本方的临床应用。     

金丝桃苷通过NOS/NO系统调控血管内皮影响动脉粥样硬化进程的实验研究

目的 探讨金丝桃苷通过一氧化氮合酶（NOS）/一氧化氮（NO）系统调控血管内皮影响动脉粥样硬化进程。方法 采用高脂饲料喂养ApoE^-/-小鼠复制动脉粥样硬化模型。在造模的同时给予金丝桃苷（200 mg/kg）和辛伐他汀（阳性对照,5.2 mg/kg）进行干预,每天给药2次,连续12周,每周称小鼠体质量;全血项分析仪检测小鼠血清中总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）的含量;ELISA法检测小鼠血清中丙二醛（MDA）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、NO和内皮型一氧化氮合酶（eNOS）的含量;HE染色法和油红O染色法观察小鼠胸主动脉病理学变化情况和脂质沉积状况;Western blotting检测小鼠胸主动脉中聚二磷酸腺苷核糖聚合酶1（PARP1）、精氨酸酶Ⅱ（ARG2）、eNOS和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）蛋白的表达。结果 与模型组比较,金丝桃苷显著抑制小鼠体质量增长（P<0.05、0.01）;显著降低小鼠血清中LDL-C、MDA和IL-6的水平（P<0.05、0.01）,显著升高NO和eNOS的水平（P<0.05、0.01）;显著减小小鼠主动脉管腔内斑块面积（P<0.05、0.01）并改善脂质沉积状况;显著下调小鼠主动脉组织PARP1、ARG2、iNOS的表达,并上调eNOS的表达（P<0.01）。结论 金丝桃苷可以减缓动脉粥样硬化的病理进程,可能是通过降低LDL-C水平、影响NOS活性、调节NO的合成,改善血管内皮功能实现的。     

PI3K抑制剂LY294002联合吡柔比星对膀胱癌BIU-87细胞增殖作用的影响

目的:探讨PI3K抑制剂联合吡柔比星对人膀胱癌BIU-87细胞增殖作用的影响。方法:用不同浓度的PI3K抑制剂LY294002联合吡柔比星对BIU-87细胞作用0、12、24、36 h后,通过MTT方法检测抑瘤率;通过Western blotting检测Caspase-3、Bax、Bcl-2及P-gp蛋白的表达。结果:THP能明显抑制BIU-87细胞的增殖,并且具有明显的时间的依赖性(P<0.05)。THP联合应用不同浓度LY294002组与单独使用同剂量的THP组比较,BIU-87细胞的增殖随着药物浓度的增加和时间的延长进一步受到抑制,而且,联合应用LY294002的低浓度THP组对BIU-87细胞抑制作用明显强于高剂量THP组(P<0.05)。此外,PI3K抑制剂LY294002联合应用THP后,BIU-87细胞Bax与Caspase-3表达都明显上升(P<0.05),Bcl-2与P-gp表达量明显降低(P<0.05)。结论:PI3K抑制剂联合THP比单独应用THP对人膀胱癌BIU-87细胞抑制作用效果明显。