左归丸对小鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的影响

目的：观察左归丸制剂对小鼠脾细胞中Treg亚群及其相关细胞因子表达的影响。方法：Balb/c小鼠给予不同剂量左归丸处理后，利用流式细胞术检测小鼠脾细胞中Treg亚群（CD4^＋／CD25^＋）的变化；采用RT-PCR法检测小鼠脾细胞中IL-10、TGF-β、IFN-γ及Foxp3的表达水平；采用ELISA法检测小鼠外周血中IFN-γ的分泌水平。结果：小剂量左归丸对小鼠脾脏Treg亚群及相关细胞因子的表达没有显著影响；中剂量左归丸可明显上调小鼠脾脏Treg亚群比例（P〈0．05），提高Treg特异性胞内信号Foxp3及相关细胞因子IL-10、TGF-β的转录水平，同时抑制，IFN-γ的表达；大剂量左归丸可显著降低Treg细胞亚群比例，对Foxp3、IL-10、TGF-β、IFN-γ的表达均有明显的抑制作用（P〈0．05）。随着中、大剂量左归丸处理小鼠IFN-γ的转录下调，血清中IFN-γ的水平也明显下降（P〈0.05）。结论：左归丸可上调Treg细胞及相关细胞因子的表达水平，抑制IFN-γ的表达，但这种免疫效应有剂量限制性，大剂量应用时显示抑制作用，提示左归丸对Treg亚群有剂量依赖性的双向调节作用。     

宫清颗粒对人早孕绒毛、蜕膜组织细胞凋亡及信号转导的影响

目的：探讨宫清颗粒对人早孕绒毛、蜕膜组织细胞凋亡及信号转导的影响,为临床防治药物流产后异常子宫出血（简称药流后出血）提供生物学依据。方法：将120例受试者随机分为宫清药流组、茜芷药流组、单纯药流组及负压吸宫组,各30例,收集各组绒毛及蜕膜组织,观察细胞超微结构变化;TUNEL法检测细胞凋亡率（AR）、荧光分光光度计检测细胞内钙离子浓度（[Ca2＋]i）、免疫组化法检测蛋白激酶C（PKC）蛋白表达。结果：宫清药流组绒毛、蜕膜组织细胞超微结构出现典型凋亡改变,AR、[Ca2＋]i升高,PKC蛋白表达降低,与其它3组比较差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。结论：宫清颗粒能影响细胞内Ca2＋及PKC介导的细胞信号转导,诱导人早孕绒毛、蜕膜组织细胞凋亡,促进绒毛与蜕膜组织完全排出,进而防治药物流产后出血。     

左归丸加减对雌激素缺乏骨丢失小鼠Th17/Treg亚群的影响

目的观察左归丸加减对雌激素缺乏骨丢失模型小鼠脾脏辅助性T细胞亚群17（Th17）/调节性T细胞亚群（Treg）亚群平衡的影响,并探讨其作用机制。方法 50只BALB/c小鼠按随机数字表法随机分为假手术组、卵巢切除模型组、左归丸加减（简称中药）小、中、大剂量组,共5组,每组10只。中药组分别给予中药小、中、大剂量（7.25、14.50、29.00 g/kg）,1天1次,1次约0.5 m L,连续用药12周;同时假手术组及模型组给予等量的生理盐水。采用酶联免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）法检测各组血清雌二醇（E2）水平,双能X线骨密度仪检测股骨骨密度（bone mineral density,BMD）,流式细胞仪胞内外双染色法检测脾脏单个核细胞Th17/Treg亚群比例,RT-PCR法检测脾脏单个核细胞IL-17A、TGF-βmRNA表达。结果与假手术组比较,模型组E2、BMD均降低（P〈0.05）,Th17亚群比例、Th17/Treg比值均升高（P〈0.05）,Treg亚群比例明显降低（P〈0.05）,IL-17A mRNA表达明显升高（P〈0.05）,TGF-βmRNA表达明显降低（P〈0.05）;与模型组比较,中药中、大剂量组BMD值明显升高（P〈0.05）,Th17亚群比例、Th17/Treg比值降低（P〈0.05）、Treg亚群比例升高（P〈0.05）,IL-17A mRNA表达降低（P〈0.05）及TGF-βmRNA表达升高（P〈0.05）。相关性分析显示BMD与血清E2水平、Treg亚群比例呈明显正相关（P〈0.05）,与Th17亚群比例呈明显负相关（P〈0.05）;血清E2水平与Treg亚群比例呈明显正相关（P〈0.05）,与Th17亚群比例呈明显负相关（P〈0.05）。结论 Th17/Treg亚群平衡状态与雌激素缺乏骨丢失存在相关性,左归丸加减能降低雌激素缺乏骨丢失小鼠Th17亚群比例,升高雌激素缺乏骨丢失小鼠Treg亚群比例。左归丸加减可能通过调节雌激素缺乏骨丢失小鼠Th17/Treg亚群平衡达到治疗作用,且该方无明显雌激素样作用。     

IL-17D 调控肺脏NK 细胞募集及黄芪的促进作用

目的:探讨IL-17D 调控肺脏NK 细胞的募集机制及中药黄芪的促进作用。方法:采用尾静脉注射B16 黑色素瘤细胞建立小鼠肺肿瘤转移模型,分别经IL-17D 或黄芪处理后,应用流式细胞术和RT-PCR 法检测各组小鼠肺脏IL-17D 表达状态及其NK 细胞含量的变化。结果:小鼠肺转移瘤模型中IL-17D 表达水平及其肺脏NK 细胞含量急剧下降,经IL-17D 处理后可明显上调肺脏NK 细胞含量、降低肺脏肿瘤克隆形成。同时,CXCL9、IL-15 等与NK 募集和功能相关的细胞因子表达明显上调。中药黄芪可促进肺脏IL-17D 表达水平,同时上调肺脏NK 细胞含量,抑制肺脏肿瘤克隆的形成。结论:IL-17D 可调控NK 细胞的肺脏募集;中药黄芪可通过上调IL-17D 的表达,从而增强NK 的肺脏募集能力,促进肺脏抗肿瘤免疫效应。     

宫清颗粒诱导Th17/Treg亚群偏移减轻药物流产后子宫出血

目的探讨米非司酮药物流产中Th17/Treg亚群偏移与子宫出血量的相关性及宫清颗粒诱导Th17/Treg亚群偏移减轻药物流产后子宫出血的作用与机制。方法孕小鼠30只,随机分为正常妊娠组和米非司酮大(1.5 mg·kg~(-1)·d~(-1)×3 d,ig)、小剂量组(0.88 mg·kg~(-1)·d~(-1)×3 d,ig),每组10只,改良碱性正铁血红素法检测子宫出血量,流式细胞术双染色法检测子宫组织Th17(CD3~+CD4~+IL-17A~+)、Treg(CD4~+CD25~+Foxp3~+)亚群比例。孕小鼠40只,随机分为米非司酮组(1.5 mg·kg~(-1)·d~(-1)×3 d,ig)和宫清大、中、小剂量组(米非司酮1.5 mg·kg~(-1)·d~(-1)×3 d+宫清颗粒308.16、154.08、77.04 mg·kg~(-1)·d~(-1)×5 d,ig),每组10只,检测子宫出血量及子宫组织Th17、Treg亚群比例,RT-PCR法检测子宫组织白细胞介素-17A(IL-17A)、白细胞介素-10(IL-10)、转化生长因子-β(TGF-β)mRNA转录水平。结果药物流产小鼠子宫出血量与Th17亚群比例、Th17/Treg比值呈负相关(r=-0.700、r=-0.867,P<0.05),与Treg亚群比例呈正相关(r=0.554,P<0.05)。宫清颗粒作用后小鼠子宫出血量明显减少;Th17亚群比例升高,Treg亚群比例降低,Th17/Treg比值升高(均P<0.05);IL-17A mRNA表达升高,IL-10、TGF-βmRNA表达降低,均P<0.05。结论米非司酮药物流产中Th17/Treg亚群偏移与子宫出血量密切相关,宫清颗粒优势诱导Th17亚群偏移,进而减轻子宫出血。     

桂皮醛对激素诱导的破骨细胞分化过程的保护作用及分子机制

目的研究桂皮醛对激素诱导的体外破骨细胞增殖分化及骨吸收功能增强的保护作用及分子机制。方法RANKL联合M-CSF体外诱导RAW264.7细胞分化为破骨细胞,分为对照组、地塞米松处理组和不同浓度(11.6、23.2、46.4μg·L-1)桂皮醛(cinnamic alde byde,CA)干预组;TRAP染色试剂盒鉴定成熟破骨细胞;MTT法观察地塞米松和桂皮醛在不同时间点对破骨细胞增殖的抑制作用;ELISA法检测细胞培养液上清中TRACP5b的表达水平;RT-PCR分析破骨细胞相关转录因子(RANK、NFATc1)mRNA的表达状态。结果地塞米松处理后,破骨细胞的增殖分化及骨吸收功能明显增强(P<0.05);而经不同浓度桂皮醛干预后,与地塞米松组相比,细胞增殖活性、上清液中TRACP-5b的含量以及RANK、NFATc1mRNA的表达水平随药物浓度的增加呈剂量依赖性降低(P<0.05)。结论桂皮醛可有效抑制激素诱导的破骨细胞的增殖及骨吸收功能,其作用机制可能是通过下调RANK以及下游NFATc1基因的表达。     

补肾固冲方逆转Th1／Th2亚群失衡治疗URSA作用与机制研究

目的：探讨Th1/Th2亚群失衡在原因不明性复发性自然流产（ URSA）中的作用及补肾固冲方逆转Th1/Th2亚群失衡治疗URSA的作用及分子机制。方法：URSA患者30例,给予补肾固冲方治疗,正常妊娠妇女30例为正常对照组,流式细胞术胞内外双染色法检测URSA患者治疗前后及正常妊娠妇女外周血Th1/Th2亚群分化状态,RT-PCR法检测Th1亚群特异性核转录因子T-bet、Th2亚群特异性核转录因子GATA-3mRNA转录水平。结果：与正常妊娠妇女比较,URSA患者外周血Th1亚群比例显著升高（P＜0.05）,Th2亚群比例显著降低（P＜0.05）,Th1/Th2比率显著升高（P＜0.05）。补肾固冲方治疗后, URSA患者Th1亚群比例及T-bet转录水平显著降低（P＜0.05）,Th2亚群比例及GATA-3转录水平显著升高（P＜0.05）,Th1/Th2比率明显降低（ P＜0.05）。相关性分析显示,URSA患者治疗后子宫出血天数与Th1亚群比例呈显著正相关（ P＜0.05）,与Th2亚群比例呈负相关,与Th1/Th2亚群呈正相关。结论：URSA患者存在Th1/Th2亚群失衡,补肾固冲方通过上调T-bet转录水平、下调GATA-3转录水平,优势诱导Th2亚群分化,逆转Th1/Th2亚群失衡,进而治疗URSA。     

宫清方诱导Th1/Th2亚群漂移减轻药物流产后子宫出血动物研究

目的:探讨药物流产中Th1/Th2亚群漂移与子宫出血量的相关性以及宫清方减轻药物流产后子宫出血的作用机制。方法:将孕鼠20只随机分为米非司酮大(1.5mg/kg·d)、小(0.88mg/kg·d)剂量组各10只,改良碱性正铁血红素法检测子宫出血量,流式细胞术双染色法检测母胎界面Th1、Th2亚群比例;孕鼠40只随机分为米非司酮组(1.5mg/kgod)、宫清方大、中、小剂量组各10只,检测子宫出血量及母胎界面Th1、Th2亚群比例;逆转录-聚合酶链式反应检测母胎界面干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-4(IL-4)mRNA转录水平。结果:米非司酮大剂量组小鼠子宫出血量<米非司酮小剂量组(P<0.05),药物流产小鼠子宫出血量与Th1亚群比例、Th1/Th2比值呈负相关(P<0.05),与Th2亚群比例呈正相关(P<0.05)。宫清方能明显减少米非司酮药物流产小鼠子宫出血量(P<0.05),升高IFN-γmRNA表达及Th1亚群比例(P<0.05),降低IL-4mRNA表达及Th2亚群比例(P<0.05),升高Th1/Th2比值(P<0.05)。结论:米非司酮药物流产中Th1/Th2亚群漂移与子宫出血量密切相关,宫清方通过优势诱导药物流产小鼠母胎界面Th1/Th2平衡向Th1漂移,减轻子宫出血。     

低温条件下小鼠树突状细胞功能改变及玉屏风散的调节作用

目的 探讨低温条件下小鼠树突状细胞（DC）功能改变及玉屏风散的调节作用.方法 将50只小鼠随机均分为对照组（室温25℃）、模型组（室温10℃）及玉屏风散小、中、大剂量组,给药第4天,将模型组及玉屏风散小、中、大剂量组置于低温容器内,连续低温处理3d,每天6h.采用流式细胞术检测各组DC表面分子MHC-Ⅱ、CCR7、CD86表达,RT-PCR法检测CD86、CCR7 mRNA表达.结果 与对照组比较,模型组体温下降,MHC-Ⅱ、CCR7、CD86表达降低,CCR7、CD86 mRNA表达下降（P均＜0.05）;与模型组比较,玉屏风散各组的MHC-Ⅱ、CCR7、CD86表达升高（P均＜0.05）.结论 低温可诱使DC下调MHC-Ⅱ、CD86及CCR7表达,玉屏风散可逆转上述分子表达,增强DC的信息传递功能.