左归丸通过线粒体途径抗叔丁基过氧化氢诱导的MC3T3-E1细胞凋亡

目的:观察左归丸对叔丁基过氧化氢诱导的MC3T3-E1细胞凋亡的保护效应,探讨其作用机制是否与其干预线粒体途径有关。方法:以成骨细胞MC3T3-E1为研究对象,制备左归丸含药血清,建立叔丁基过氧化氢(t-BHP)成骨细胞MC3T3-E1氧化应激模型,实验分为空白组,t-BHP组,左归丸+t-BHP组,补佳乐+t-BHP组。孵育24,48,72 h后,采用噻唑蓝(MTT)法检测左归丸含药血清对t-BHP诱导MC3T3-E1细胞存活的影响;孵育48 h后,采用吖啶橙溴乙啶(AO/EB)染色法检测细胞凋亡,采用Hoechst 33342染色法观察凋亡细胞核变化,采用罗丹明123荧光染色法观察线粒体膜电位的改变,采用蛋白质免疫印迹(Western blot)法分析线粒体蛋白家族B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达水平。结果:与空白组比较,t-BHP组显著抑制细胞增殖(P0.05,P0.01),细胞凋亡增加,线粒体膜电位降低,Bcl-2蛋白表达明显下调(P0.01);与t-BHP组比较,左归丸加t-BHP组促进暴露于t-BHP诱导的MC3T3-E1氧化损伤细胞的存活(P0.01),48 h者尤佳,逆转细胞凋亡情况,提高细胞线粒体膜电位,上调Bcl-2蛋白表达(P0.05),抑制Bax和Caspase-3蛋白表达(P0.01)。结论:左归丸含药血清能够抗t-BHP诱导的MC3T3-E1细胞凋亡,其作用机制可能与其干预线粒体途径有关。     

左归丸对去卵巢大鼠下丘脑瘦素及瘦素受体的影响

目的:通过观察左归丸对去卵巢大鼠下丘脑瘦素及瘦素受体水平的影响,探讨左归丸调节绝经后血脂代谢异常的作用机制。方法:选取雌性SD大鼠32只,随机分为假手术组、模型对照组、左归丸组、阳性药补佳乐组,每组8只。除假手术组,其余各组大鼠以双侧卵巢摘除术建立模型,灌胃给药12周后称体重,收集各组大鼠血清和下丘脑组织,检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、ELISA法检测血清中雌二醇(E2)、瘦素(Leptin)含量; Western blot法测定下丘脑瘦素受体(OB-Rb)以及下丘脑瘦素信号通路相关蛋白JAK2、P-JAK2、STAT3、P-STAT、CPT1蛋白表达水平。结果:与假手术组比较,模型对照组大鼠体重显著增加,血清TC、TG以及瘦素水平升高,血清E2含量明显下降,下丘脑OB-Rb、P-JAK2、P-STAT3蛋白表达下降;与模型对照组比较,左归丸9. 68g/kg可降低大鼠体重,升高血清E2含量,下调TC、TG以及血清瘦素水平,上调血清HDL-C以及下丘脑OB-Rb、P-JAK2、P-STAT3、CPT1蛋白表达。结论:左归丸能有效改善由于雌激素减少引发的血脂代谢异常,其作用机制可能与干预瘦素信号通路有关。     

基于肠道菌群探讨苓桂术甘汤对瘦素缺陷代谢紊乱模型小鼠的骨保护作用

目的:观察苓桂术甘汤对瘦素缺陷代谢紊乱模型小鼠肠道菌群的影响,探讨其骨保护作用是否与其调节肠道菌群有关。方法:采用ob/ob小鼠,实验分为正常组,模型组,苓桂术甘汤组(7. 7 g·kg-1),阿托伐他汀组(0. 002 6 g·kg-1),每组8只。连续灌胃4周后,采用苏木素-伊红(HE)染色观察股骨和小肠组织形态,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测股骨组织碱性磷酸酶(ALP)蛋白表达,免疫荧光法检测小肠法尼醇X受体(FXR)蛋白表达,酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定血清白细胞介素-6(IL-6)含量,16S核糖体RNA(16S rRNA)测序进行小鼠肠道菌群分析。结果:与正常组比较,模型组股骨骨小梁变细,骨髓腔脂肪浸润,股骨ALP蛋白下调;小肠上皮损伤,小肠FXR蛋白下调;血清IL-6含量升高;肠道菌群结构发生变化,在门水平,厚壁菌门(Firmicutes)丰度升高(P 0. 01),拟杆菌门(Bacteroidetes)丰度降低(P 0. 01),在属水平,毛螺菌属(Lachnospiraceae)_UCG-001丰度升高(P 0. 05),norank_f__拟杆菌属(Bacteroidales)_S24-7_group丰度降低(P 0. 01);Lachnospiraceae_UCG-001与体质量正相关(r=0. 661),norank_f__Bacteroidales_S24-7_group与体质量负相关(r=-0. 622)。与模型组比较,苓桂术甘汤改善股骨和小肠组织形态,上调股骨ALP和小肠FXR表达,降低血清IL-6含量,可以逆转属水平的菌群改变(P 0. 05)。结论:瘦素缺陷代谢紊乱模型小鼠出现骨损伤、肠道菌群紊乱和肠上皮损伤;苓桂术甘汤对瘦素缺陷代谢紊乱模型小鼠的骨损伤具有保护作用,其作用机制可能与其调节肠道菌群有关。     

左归丸对去卵巢大鼠下丘脑瘦素及瘦素受体的影响北大核心CSCD

目的:通过观察左归丸对去卵巢大鼠下丘脑瘦素及瘦素受体水平的影响,探讨左归丸调节绝经后血脂代谢异常的作用机制。方法:选取雌性SD大鼠32只,随机分为假手术组、模型对照组、左归丸组、阳性药补佳乐组,每组8只。除假手术组,其余各组大鼠以双侧卵巢摘除术建立模型,灌胃给药12周后称体重,收集各组大鼠血清和下丘脑组织,检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、ELISA法检测血清中雌二醇(E2)、瘦素(Leptin)含量; Western blot法测定下丘脑瘦素受体(OB-Rb)以及下丘脑瘦素信号通路相关蛋白JAK2、P-JAK2、STAT3、P-STAT、CPT1蛋白表达水平。结果:与假手术组比较,模型对照组大鼠体重显著增加,血清TC、TG以及瘦素水平升高,血清E2含量明显下降,下丘脑OB-Rb、P-JAK2、P-STAT3蛋白表达下降;与模型对照组比较,左归丸9. 68g/kg可降低大鼠体重,升高血清E2含量,下调TC、TG以及血清瘦素水平,上调血清HDL-C以及下丘脑OB-Rb、P-JAK2、P-STAT3、CPT1蛋白表达。结论:左归丸能有效改善由于雌激素减少引发的血脂代谢异常,其作用机制可能与干预瘦素信号通路有关。     

苓桂术甘汤对瘦素基因缺陷ob/ob小鼠肝FXR/FGF15/SHP途径的影响

目的:观察苓桂术甘汤对瘦素基因缺陷小鼠肝脏的影响,探讨其保护作用机制是否与其干预肝法尼醇X受体(FXR)/成纤维细胞生长因子15(FGF15)/小异源二聚体伴侣(SHP)途径有关。方法:将雌性C57小鼠和ob/ob小鼠随机分为正常组,模型组,苓桂术甘汤高、低剂量组(23.1,7.7 g·kg-1),阳性药组(立普妥,0.002 6 g·kg-1),每组各8只。治疗4周后处死小鼠,取小鼠肝脏组织,称量小鼠体质量和肝脏质量,计算肝脏指数;苏木素-伊红(HE)染色和油红O染色观察肝脏组织形态和脂质沉积情况,免疫荧光染色检测肝脏组织法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测成纤维细胞生长因子15(FGF15)和酪氨酸磷酸酶(SHP)蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组体质量和肝脏指数显著增高(P0.01),肝脏脂质沉积严重,肝脏组织FXR,FGF15和SHP蛋白表达下调(P0.01);与模型组比较,苓桂术甘汤组小鼠体质量和肝脏指数降低(P0.05,P0.01),肝脏脂质沉积减少,上调肝脏组织FXR,FGF15和SHP蛋白表达(P0.05,P0.01)。结论:苓桂术甘汤能够抗瘦素基因缺陷模型小鼠的肝损伤,其作用机制可能与其干预肝FXR-FGF15-SHP途径有关。     

补肾方与补肾健脾方对快速老化模型小鼠肠和骨碱性磷酸酶蛋白的影响

目的探讨补肾方与补肾健脾方对快速老化模型小鼠骨质疏松(OP)的改善作用是否与其改善衰老所致肠黏膜屏障功能受损有关。方法选取SAMP6快速老化小鼠和SAMR1同源对照小鼠,分SAMR1(对照组)、SAMP6(模型组)、补肾方、补肾健脾方4组。给药12 w后,采用苏木素-伊红(HE)染色法观察肠组织形态、Masson染色法观察骨组织胶原、Western印迹法检测骨组织Ⅰ型胶原(Col1)蛋白表达水平、免疫组织化学染色法检测肠与骨组织碱性磷酸酶(ALP)蛋白表达水平。结果与对照组比较,模型组肠上皮细胞受损,骨组织胶原含量和Col1蛋白表达下降,肠和骨组织ALP蛋白表达减少;与模型组比较,给药组可改善SAMP6肠组织形态,增加骨组织胶原含量和Col1蛋白的表达,增加肠和骨组织ALP蛋白的表达。结论给药组对SAMP6小鼠OP具有一定改善作用,提高成骨活性,可能与其有效改善衰老过程中肠黏膜屏障功能受损有关。     

补肾方补肾健脾方益气健脾化瘀祛痰方对快速老化模型小鼠肠肝FGF15-SREBP1c的影响

目的探讨补肾方、补肾健脾方、益气健脾化瘀祛痰方对衰老所致肝损伤的保护作用,并探讨其保护作用的机制是否与肠肝循环有关。方法选取快速老化模型小鼠SAMP6和正常同源对照小鼠SAMR1,实验分为5组,SAMR1组、SAMP6组、补肾方组、补肾健脾方组、益气健脾化瘀祛痰方组。给药12周后,采用生化分析仪检测血清AST和ALT活力、采用HE染色观察肝组织形态、采用Western blot法检测回肠组织FGF15和肝组织SREBP1c蛋白表达水平。结果与SAMR1组比较,SAMP6组血清AST和ALT活力显著升高(P0.05,P0.01),肝细胞排列紊乱、细胞核固缩、胞浆中见脂滴样空泡,回肠组织FGF15蛋白表达明显降低,肝组织SREBP1c蛋白表达升高;与SAMP6组比较,补肾方组和补肾健脾方组血清AST和ALT活力均有下降趋势,但没有统计学意义(P0.05),益气健脾化瘀祛痰方组显著降低血清AST和ALT活力(P0.05,P0.01),给药组均可改善SAMP6小鼠肝组织病理学改变;上调回肠组织FGF15蛋白表达,下调肝组织SREBP1c蛋白表达。结论给药组对SAMP6小鼠肝损伤具有一定的保护作用,其机制可能是通过FGF15-SREBP1c调控衰老过程中肠肝循环,以益气健脾化瘀祛痰方组疗效相对较好。