基于SSR标记与化学成分构建十堰地区天师栗核心种质库＊

目的 利用筛选出十堰的天师栗中高多态性SSR位点评价天师栗种质资源的遗传多样性，结合有效药用成分含量，构建十堰地区天师栗核心种质库。方法 收集十堰地区114份天师栗种质资源，以七叶树基因组为参考，采用荧光毛细管电泳筛选出高多态性SSR位点，对天师栗种质资源进行遗传多样性分析。利用HPLC测定不同种质干燥娑罗子中七叶皂苷的含量。采用最小距离逐步聚类取样策略（LDSS），根据遗传多样性保留程度初步筛选出核心种质，并对该核心种质与原始种质的遗传多样性参数进行T检验，选择与原种质差异不显著的核心种质为最佳核心种质。结果 筛选出13对高多态性SSR分子标记，遗传多样性评价结果表明十堰地区天师栗种质资源遗传多样性较高，遗传分化较小，存在着较大的基因流，114份种质资源未分为不同的亚群，周家坝和辽叶居群间具有较近的遗传亲缘关系，且周家坝居群娑罗子中的七叶皂苷A及七叶皂苷B含量普遍较高。最终筛选出的核心种质共23份，占总种质资源的20.17%，其中周家坝12份样本、辽叶6份样本、普龄5份样本。结论 将SSR分子标记与主要有效药用成分结合，采用LDSS取样策略构建十堰地区天师栗种质资源核心种质库的方法具有可行性，能够有效的保存与管理天师栗种质资源，也为当地天师栗品种改良、新品种选育研究等提供了研究基础。     

菊花脑芳樟醇合酶基因CnTPS1的克隆与原核表达分析＊

目的 克隆菊花脑芳樟醇合酶基因CnTPS1的全长编码序列，利用原核系统表达融合蛋白，为进一步研究该基因在菊花脑萜类合成中的功能提供理论依据。方法 以菊花脑基因组数据为基础，设计特异性引物，PCR扩增CnTPS1的全长编码序列，利用生物信息学分析软件分析序列特征。利用qRT-PCR技术分析CnTPS1基因在不同组织中的基因表达量。构建原核表达载体，体外诱导目的蛋白表达。结果 CnTPS1编码序列全长1749bp，编码582个氨基酸；基因表达模式分析表明该基因在茎和管状花中表达量较高；原核表达系统能诱导出67.58kDa大小的蛋白。结论 首次从菊花脑中克隆得到一个芳樟醇合酶基因CnTPS1，运用生物信息学方法对其编码蛋白的理化性质、结构特征等进行了分析预测，分析了该基因的组织表达模式，并在原核表达系统中成功诱导表达出目标蛋白，这些结果将为菊花脑萜类合酶基因的功能以及萜类物质生物合成途径的解析提供理论依据。     

八味芪丹胶囊联合依帕司他治疗2型糖尿病周围神经病变临床观察

目的 观察八味芪丹胶囊联合依帕司他治疗2型糖尿病周围神经病变的临床疗效及对患者血清铁蛋白及氧化应激指标的影响,探讨其可能的作用机制。方法 将62例糖尿病周围神经病变（diabetic peripheral neuropathy,DPN）患者随机分成观察组和对照组,每组31例。两组均以个体化降糖为基础治疗,对照组另口服依帕司他,观察组在对照组疗法的基础上加用八味芪丹胶囊,疗程均为4周。分别采用中医证候评分、多伦多临床评分系统（Toronto clinical scoring system,TCSS）评定临床疗效,采用神经电检诊仪检测神经传导速度,采用化学比色法检测血清铁蛋白（serum ferritsn,SF）,硫代巴比妥酸法检测丙二醛（malondialdehyde,MDA）水平,化学发光法检测超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）水平。结果 治疗后两组患者中医证候评分、TCSS评分均较治疗前明显减少（P<0.05）,且观察组减少程度大于对照组（P<0.05）。治疗后两组患者神经传导速度均较治疗前明显提高（P＜0.05）,且观察组较对照组提高更为明显（P＜0.05）。治疗后两组患者血清SF、MDA水平均较治疗前明显降低（P<0.05）,SOD水平明显升高（P<0.05）;且观察组SF、MDA水平的降低程度以及SOD水平的升高程度均大于对照组（P<0.05）。结论 八味芪丹胶囊联合依帕司他治疗2型糖尿病周围神经病变的疗效优于单用依帕司他,且能有效提高神经传导速度,其机制可能与调节铁代谢途径、改善氧化应激反应有关。     

"调肝"法论治痤疮经验探析

张进军副主任医师为徐经世国医大师学术经验第六批师承弟子,承徐老学术思想,行医多年,有丰富的临床经验.张进军从五行制化理论出发,结合现代疾病谱的变迁,认为痤疮的病因病机多始于肝气郁滞,后延及肺胃肾,故提出痤疮可从肝论治,治疗上注重"调肝",运用疏肝、泻肝、养肝等治法,总结出巧用芦荟,妙用"三甲"(龟甲、鳖甲、炮山甲)等独特的用药心得,针对不同证型,纠偏除弊,在临床上取得良效,本文对其经验进行分析总结并举典型案例供同行参考.     

神农香菊自然居群遗传变异评价研究及核心种质筛选＊

目的 本文对神农香菊（Chrysanthemum indicum var. aromaticum）自然居群的遗传多样性、遗传结构及特征代谢产物开展研究，并以此为依据筛选核心种质，为神农香菊的资源保护和应用提供理论依据。方法 利用21对分别来源于基因组和转录组数据的简单重复序列引物（SSR）对我国神农架林区的151份神农香菊样本、41份疑似野菊样本和武汉市洪山区11份野菊对照样本进行居群遗传多样性和遗传结构分析。基于遗传信息，采用高效液相色谱技术（HPLC）对不同遗传分组的代表性纯合样本开展9种代谢物的差异分析，利用最小距离逐步取样策略（LDSS）筛选神农香菊的核心种质。结果 21对引物在所有研究样本中共扩增出202个等位基因，每个位点平均等位基因数为9.619个。神农架5个居群的平均有效基因数（N_e）为2.518，香农多样性指数（I）为1.004，多态性信息含量（PIC）为0.526，杂合度（H）为0.246。居群间具有较低的遗传分化（F_st<0.12）和较高的基因流水平（N_m>1）。遗传结构分析显示，神农架的所有样品可分为三个遗传组。异绿原酸C、蒙花苷、木犀草苷等物质在三个组的样本间有明显的含量差异。基于遗传信息，最终筛选出了来自神农架3个地方居群的45份核心种质。结论 本研究展示了神农香菊自然居群整体存在的中高水平的遗传多样性，同时神农香菊样本与邻（混）生的疑似野菊样本具有清晰的形态差异，但两者间可能存在基因流或遗传混杂。这些信息为研究神农香菊的起源进化和对其资源的开发应用提供了理论和数据支撑。     

更郁方对更年期抑郁症大鼠甘丙肽及性激素含量的影响

目的:研究更郁方对更年期抑郁症模型大鼠区甘丙肽及性激素含量的影响,探讨其作用机制。方法:从80只4月龄雌性大鼠中随机选12只为空白对照组,其他进行造模,选择60只去势完全的小鼠随机分为5组,分别为模型对照组、更郁方组(10g/kg、5g/kg、2.5g/kg)、盐酸氟西汀组各12只。各组大鼠均灌胃给药,剂量为10ml/kg。更郁方组高、中、低剂量分别给混合水提浓度10g/kg、5g/kg、2.5g/kg;盐酸氟西汀组,按0.002g/kg每天剂量标准;模型组和空白组给予同体积的蒸馏水。于造模后第5天给予相应药物,各组均每天2次,连续21d。采用放射免疫法测定血浆、下丘脑、海马区甘丙肽、血清雌二醇(E2)、卵泡生成素(FSH)、促黄体生成素(LH)含量。结果:更郁方(10g/kg、5g/kg、2.5g/kg)、盐酸氟西汀均可明显提高抑郁症大鼠24h的糖水摄入量及水平-垂直运动积分;更郁方(10g/kg、5g/kg)与盐酸氟西汀均可显著升高模型大鼠的血浆、下丘脑、海马区甘丙肽的含量,上调血清E2含量,下调FSH、LH含量(P0.01);更郁方10g/kg作用更加显著,更郁方2.5g/kg则无明显作用。结论:更郁方(10g/kg、5g/kg、2.5g/kg)可显著提高抑郁症大鼠24h的糖水摄入量、水平-垂直运动积分,更郁方(10g/kg、5g/kg)升高大鼠的血浆、下丘脑、海马区甘丙肽的含量,上调模型大鼠的血清E2含量,下调FSH、LH含量,推测可能是通过调节血浆、下丘脑、海马区甘丙肽的含量进而影响性激素的分泌。     

天师栗无公害规范化种植的探讨

目的：建立天师栗无公害精细栽培体系,保障规范化生产的娑罗子质量符合临床用药需求。方法：本规范依托推广单位自有基地多年来天师栗生产数据为主,兼顾其它单位生产和科研情况,适用于天师栗无公害基地生产。结果：本文从精准选地、品种繁育、合理施肥、病虫害防治、采收期确立、质量标准的建立等多方面,建立了天师栗的无公害规范化精细栽培技术体系。结论：天师栗无公害规范化种植体系的建立对天师栗的种植具有一定的科学性和重要性,为天师栗的引种栽培以及合理规划生产布局提供了参考依据,并建立了无公害娑罗子质量标准和树立了种植规范。     

野菊花质量标志物（Q-marker）预测及其一测多评研究＊

目的 预测野菊花Q-marker，并建立能够同时测定野菊花Q-marker含量的一测多评方法，为野菊花药材质量评价及优质品种选育奠定基础。方法 结合野菊花化学成分及药理学研究，依据Q-marker的“五原则”综合分析、预测野菊花的Q-marker的候选化合物，采用高效液相色谱法构建适用于野菊花品质评价的一测多评体系。结果 从野菊花的功效相关性、可测成分、入血成分及成分特异性等多方面分析，预测了野菊花药材中8个Q-marker的候选化合物，8种成分在测定范围内线性良好，且在不同的实验条件下相对校正因子重现性良好。结论 建议考虑将野菊花药材中4个类黄酮成分（蒙花苷、田蓟苷、芹菜素和木犀草苷）和4个酚酸类成分（绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B和异绿原酸C）作为野菊花药材Q-marker的候选化合物，本研究中一测多评法同时测定野菊花中8种候选Q-marker成分含量准确可行。     

基于快速PCR方法的人参属药用植物鉴别研究北大核心CSCD

目的:建立一种准确、快速、高效鉴别人参属药用植物的分子鉴别方法。方法:采集不同产地的人参、西洋参及同属近缘种植物,所有样品进行总DNA的提取并使用mat K片段进行扩增、测序,进行同源比对后根据其变异位点设计西洋参特异性鉴别引物,人参以文献报道的特异鉴别引物为基础,分别采用两步法进行PCR扩增,从而对人参、西洋参及同属近缘种进行鉴别。结果:通过对影响PCR反应时间的退火温度、变性温度、退火时间、变性时间、循环次数等因素进行优化,并对不同型号PCR仪进行考察,分别获得人参、西洋参快速PCR反应程序。在PCR产物中加入SYBR GreenⅠ染料,正品显示出明亮绿色荧光,而近缘种不显示荧光。结论:快速PCR方法可以简单快速鉴别人参、西洋参,为实现药材分子鉴别的现场运用提供技术支撑。     

应用DNA条形码技术对市场苦木药材的检测研究

利用DNA条形码技术对市场上中药材苦木进行检测,为其市场监管及用药安全提供保障。方法：对15份苦木药材（每份取样2个）共30个样品进行DNA提取,PCR扩增其ITS2序列并双向测序,应用CodonCode Aligner version 6.0.2软件对测序峰图进行校对拼接,将得到的所有序列与GenBank以及中药材DNA条形码鉴定系统分别进行比对,选择相似度最相近的物种在中国植物志网站上查询。在此基础上扩增其psbA-trnH 序列以验证结果的可靠性。结果：市场购买的苦木样品中正品苦木Picrasma quassioides 占70%、臭椿Ailanthus altissima占6.67%、板蓝Baphicacanthus cusia占13.33%、楝叶吴茱萸Tetradium glabrifolium占3.33%、柘Maclura tricuspidata 占6.67%。结论：市场上苦木药材存在混伪品,DNA条形码技术能有效鉴别药材真伪。