基于“脾主运化”理论探讨肝细胞自噬与脂质代谢的关系＊

脾位于中焦,主运化,为气血生化之源。膏脂由脾运化水谷所生,中土得运,纳运有常,则膏脂可随血循环以濡养五脏六腑及四肢百骸;肝脏是脂质代谢重要的器官,其参与脂质消化、吸收、转运等功能,脾气健运,肝失疏泄,肝脏脂质代谢功能与"脾"运化功能相关。肝细胞自噬是维持肝脏脂质代谢稳态的关键因素之一,自噬功能正常则肝脏脂质代谢趋于平衡。本文基于脾与脂质相关性,从"脾主运化"探讨肝细胞自噬对脂质代谢的影响及机制。     

茯苓多糖对ApoE-/-AS小鼠肝脏脂质沉积及胆固醇逆向转运相关蛋白表达的影响＊

目的 探讨茯苓多糖对载脂蛋白E基因敲除（ApoE^-/-）动脉粥样硬化（Atherosclerosis，AS）小鼠肝脏脂质沉积及胆固醇逆向转运的影响。方法 采用随机数字表法将30只ApoE^-/-小鼠随机分为模型组、茯苓多糖组、辛伐他汀组，每组10只，10只C57BL/6J小鼠作为正常组。正常组给予基础饲料喂饲，其余小鼠给予高脂饲料喂饲12周。茯苓多糖组以0.2 g/kg/d灌胃，辛伐他汀组以2.275 mg/kg/天灌胃，正常组和模型组给予等体积生理盐水灌胃，共干预4周。全自动生化分析仪检测小鼠血清三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平，苏木素-伊红（HE）染色观察小鼠肝脏病理形态学变化，油红O染色观察小鼠肝脏脂质沉积情况，ELISA检测各组小鼠血清载脂蛋白A1 （ApoA1）、对氧磷酶-1（PON1）含量，Real-time RT-qPCR法及Western Blot法检测肝脏胆固醇酯转运蛋白（CETP）、磷脂转运蛋白（PLTP）、卵磷脂胆固醇酰基转移酶（LCAT）mRNA及蛋白表达。结果 与正常组比较，模型组小鼠血清TG、TC、LDL-C含量均明显上升，HDL-C含量明显下降（P<0.01），肝细胞脂肪变性明显，肝脏脂质沉积明显，小鼠血清ApoA1、PON1含量均明显下降（P<0.01），小鼠肝脏CETP、PLTP mRNA及蛋白表达明显上升，LCAT mRNA及蛋白表达明显下降（P<0.01）。与模型组相比，茯苓多糖组血清TG、TC、LDL-C含量均显著下降（P<0.01），HDL-C含量呈上升趋势（P>0.05），肝细胞脂肪变性、脂质沉积程度均有所减轻，茯苓多糖组ApoA1含量明显上升（P<0.01），PON1含量呈上升趋势（P>0.05），茯苓多糖组CETP、PLTP mRNA及蛋白表达有所下降，LCAT mRNA及蛋白表达有所上升（P<0.05，P<0.01）。结论 茯苓多糖可能通过调控血脂水平与胆固醇逆向转运过程，改善ApoE^-/- AS小鼠肝脏脂质沉积，进而发挥防治AS作用。     

基于iTRAQ技术研究丹参酮ⅡA对高脂血症大鼠肝脏蛋白质的影响

目的应用相对和绝对定量同位素标记技术(iTRAQ)研究丹参酮ⅡA对高脂血症大鼠肝脏蛋白质组表达的影响,探讨丹参酮ⅡA对肝脏保护的作用。方法 24只SD大鼠随机分为空白对照组、高脂血症组和丹参酮组,每组8只。空白对照组每日给予普通大鼠饲料喂饲。高脂血症组和丹参酮组给予高脂饲料喂饲,4周后丹参酮组予丹参酮ⅡA磺酸钠10 mg/(kg·d)腹腔注射,空白对照组、高脂血症组给予等体积的磷酸盐缓冲生理盐水腹腔注射。用药8周后检测大鼠血脂、肝功能情况以及肝脏组织形态学变化。分离提取肝脏总蛋白,以iTRAQ试剂标记后进行质谱检测并以软件分析差异表达的蛋白质,用Western blot方法验证部分差异蛋白的表达趋势。结果与空白对照组比较,高脂血症组血清TC、TG、LDL-C、ALT、AST水平升高(P0.01),HDL-C水平降低(P0.01);与高脂血症组比较,丹参酮组血清中ALT、AST水平降低(P0.05)。iTRAQ技术分析发现:丹参酮组肝脏中CES1、Apoa1、Acots2、3-KAT及细胞色素P450家族Cyp3a2、Cyp3a18、Cyp4a3、Cyp2b2、Cyp2c23这9个差异蛋白表达量上调,Tkt及eNT表达下调。Western blot验证差异蛋白CES1、Apoa1、Acots2变化趋势与蛋白质组结果相一致。结论丹参酮ⅡA可能通过促进胆固醇逆向转运、脂肪酸氧化,改善肝脏代谢功能,减少肝脏脂质沉积,达到其肝脏保护作用。     

黄芪甲苷对棕榈酸诱导的小鼠RAW264.7细胞铁死亡的调控作用

目的：探讨黄芪甲苷（astragaloside IV,ASIV）对棕榈酸（palmitic acid,PA）诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞铁死亡的调控作用。方法：选取对数生长期的RAW264.7细胞,加入终浓度为0、50、100、150和200 mg/L的ASIV,或0、100、200和400μmol/L的PA,细胞成像仪培养48 h后计数分析,观察ASIV和PA对RAW264.7细胞活力的影响。再将RAW264.7细胞分为对照组、PA(200μmol/L)组和PA(200μmol/L)+ASIV(100 mg/L)组。油红O染色观察RAW264.7细胞脂质沉积情况;细胞免疫荧光染色观察RAW264.7细胞中谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)及铁蛋白重链1(ferritin heavy chain 1,FTH1)的蛋白表达水平;RT-qPCR和Western blot测定GPX4、FTH1、P53和溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)的mRNA和蛋白表达水平;活性...     

基于分子互作网络探讨丹蒌片干预PI3K/AKT/NF- κB/TNF 通路防治 非酒精性脂肪肝病的机制

目的：基于分子互作网络探讨丹蒌片治疗非酒精性脂肪肝病（NAFLD）的潜在分子作用机制。方法：通过TCMSP、PubChem和PharmMapper数据库检索丹蒌片所有活性成分及潜在作用靶点,通过DisGeNET、Gene cards及TTD数据库检索NAFLD的潜在靶点,Uniprot数据库校正去重后上传至Venny2.1软件绘制韦恩图并取其交集。同时利用Cytoscape 3.7.1软件构建药物-活性成分-靶点网络图,DAVID数据库进行GO及KEGG分析,将结果进行可视化处理。取18只C57BL/6J小鼠随机分为正常组、模型组、丹蒌片组进行体内验证,取血清检测血脂水平,Western blot检测TNF通路相关蛋白,ELISA检测TNF-α、IL-6的表达水平。结果：共得到丹蒌片的141个有效活性成分,350个潜在靶点,478个NAFLD相关靶点;Venny2.1软件筛选出丹蒌片干预NAFLD的共有靶标蛋白115个,根据P≤0.01的GO注释分析得到335个BP信息,47个MF信息,32个CC信息,93个KEGG信号通路,主要涉及炎症反应、胆固醇代谢过程、胰岛素刺激的细胞反应、TN...     

基于miRNA测序技术探讨补中益气汤治疗自身免疫性甲状腺炎的潜在机制

目的 探讨补中益气汤对自身免疫性甲状腺炎（AIT）小鼠甲状腺组织miRNA表达的影响。方法 选择NOD.H-2^h4小鼠共30只，随机分为正常组、模型组、补中益气汤组（BG组），每组各10只。根据分组给予小鼠含0.05%碘化钠水8周构建小鼠AIT模型后，灌胃给药8周取材。观察每组小鼠甲状腺组织病理改变情况，并对每组小鼠甲状腺组织差异miRNA进行实验验证及生物信息学分析。结果 与正常组比较，模型组甲状腺组织炎性细胞浸润明显，血清甲状腺球蛋白抗体（TgAb）水平显著升高（P<0.01）；与模型组比较，BG组甲状腺组织炎症程度减轻，血清TgAb水平显著降低（P<0.01）。与正常组比较，模型组小鼠白细胞介素（IL）-6、IL-17表达显著增高（P<0.01），IL-1β表达明显降低（P<0.05）；与模型组比较，BG组IL-1β、IL-6、IL-17表达明显降低（P<0.05）。与正常组比较，模型组得到154个差异表达miRNA；与模型组比较，BG组得到112个差异表达miRNA。实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）结果表明miR-326-3p、miR-128-3p、miR-223-5p、miR-141-3p、miR-871-3p、miR-204-3p表达与测序结果趋势一致。基因本体（GO）功能富集于T细胞活化调节、氧化应激、miRNA结合等方面；京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集于磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路、环磷酸腺苷（cAMP）信号通路等途径。差异miRNA预测得到3个关键基因，果蝇母源抗皮肤生长因子蛋白（Smad3）、Janus相关激酶2（JAK2）、信号转导和转录激活因子3（STAT3）。结论 补中益气汤可能通过调节6种miRNA干预自身免疫性甲状腺炎。     

大承气汤对重症急性胰腺炎大鼠肠黏膜分泌性IgA及CD3、γδT细胞的影响

[目的]观察大承气汤对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠小肠黏膜分泌性IgA(SIgA)及CD3、γδT细胞的影响,探讨大承气汤治疗SAP的作用机制。[方法]采用胰胆管逆行注射5%牛磺胆酸钠法建立大鼠SAP模型。将SD大鼠随机分为假手术组、SAP模型(模型)组和大承气汤治疗(治疗)组,观察各组不同时间点小肠黏膜病理改变,SIgA水平和CD3、γδT细胞百分率的变化。[结果]模型组与假手术组比较,小肠黏膜损伤指数增加,SIgA水平降低(P0.01),CD3、γδT细胞百分率降低(P0.05,0.01)。治疗组与模型组比较,小肠黏膜损伤指数明显下降(P0.01),SIgA水平有所增加(P0.05),CD3、γδT细胞百分率明显上升(P0.01)。[结论]大承气汤通过影响肠黏膜SIgA分泌和CD3、γδT细胞表达,对SAP大鼠肠黏膜免疫屏障功能具有一定的保护作用。     

骨髓间充质干细胞在骨向分化的作用及中医药研究进展

目的骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)是一种具有自我更新、增殖和分化能力的多潜能干细胞,对在骨形成过程中具有的重要作用,并且与中医理论中的"肾精"具有一定的相似性。近年来国内外学者对于BMSCs在骨形成中的作用及相关中医基础理论进行了大量研究,本文通过对相关研究的梳理,对BMSCs在骨形成过程中的作用及中医药研究进展作综述。BMSCs的体外扩增和成骨特性已受关注,可作为骨组织工程的种子细胞具有一定的理论及实践意义,并且中医药对BMSCs成骨诱导的研究已积累一定的经验,可以看出中药诱导BMSCs成骨分化主要集中于补肾药,包括单味补肾药、单味补肾药的有效成分及以补肾药为主要构成的复方,充分阐释了"肾主骨、生髓"理论的科学内涵.     

基于肝细胞线粒体功能探讨“化瘀祛痰、健脾化浊”法对动脉粥样硬化的治疗作用

“化瘀祛痰、健脾化浊”法是中医治疗高血脂症的常用方法。现代医学研究证实:高血脂症是导致动脉粥样硬化(AS)与非酒精性脂肪肝(NAFLD)的重要因素,而血脂代谢主要在肝脏内完成,其中线粒体在血脂代谢中起着重要的作用,而NAFLD能导致肝功能异常。AS主要表现为血瘀、痰浊内阻(标实)与脾虚、血气虚弱(本虚),而中医中的“脾”包括现代医学中的肝、胰、胃等脏器。“化瘀祛痰、健脾化浊”法能通过改善脾虚、痰浊血瘀而改善高血脂症与NAFLD,进而改善AS。笔者通过查阅近年来的相关文献并结合课题组近年来的研究结果,探讨以肝细胞线粒体为靶点,采用“化痰祛瘀、健脾化浊”法防治AS的作用,进而丰富中医藏象理论内涵,为防治AS提供新的思路。     

情志致病

心理因素(情志因素)已经成为许多疾病主要病因。喜、怒、忧、思、悲、恐、惊等情志变化,过于强烈,或过于持久,超过人体调节范围,就会引起气机失调、阴阳失衡、脏腑功能紊乱,导致疾病。情志变化可导致病情转归"向愈"或恶化,即"气血冲和,百病不生。一有怫郁,诸病生焉。"治疗有重镇安神、养心安神、祛痰、祛瘀、清热泻火、补益、心理疗法、针灸及气功及多种方法联合。情志致病的研究对临床诊治有极其重大意义。