类风湿关节炎患者外周血单个核细胞蛋白质组学研究

目的 运用蛋白质组学的方法,比较正常人及早期活动性类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMCs)蛋白质的差异表达,寻找RA疾病相关致病蛋白质.方法 选取9例早期活动期RA患者以及9名健康成年志愿者,用淋巴细胞分离液分离PBMCs,抽提PBMCs中的蛋白,采用同相pH梯度(IPG)双向凝胶电泳(2-DE)分离正常人及RA患者PBMCs总蛋白质.凝胶经考马斯亮蓝染色显色后,PDQuest图像分析软件进行比较分析、识别差异表达的蛋白质,对差异蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)进行鉴定,运用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法验证部分差异蛋白质.结果 获得RA患者及正常人PBMCs蛋白质双向凝胶电泳图谱,平均蛋白质点数分别为556和579,匹配率分别为89.4%和 88.5%,通过比较分析,差异表达蛋白质点数为23,选取18个点进行质谱鉴定,成功鉴定14个蛋白质,其中a-肌动蛋白、纤维蛋白素原a-链、载脂蛋白A-I(ApoA-I)等9个蛋白质点在RA中表达上调,硫氧还蛋白-2、谷胱甘肽S-转移酶等6个蛋白质点在RA中表达下调,这些差异蛋白质的功能涉及物质代谢、抗氧化、信号传导、能量产生及细胞骨架.并用RT-PCR方法验证差异蛋白质ApoA-I.其结果与上述蛋白质差异表达结果相符.结论 在RA患者PBMCs中存在着差异表达蛋白质,这些差异蛋白质可能是RA发病的内在因素.其RT-PCR结果与蛋白质差异表达相符,证明蛋白质组研究的可靠性.     

痹肿消汤干预类风湿关节炎患者外周血单个核细胞蛋白质组学研究

目的 观察痹肿消汤干预前后的早期活动性类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）患者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMCs）蛋白质的双向凝胶电泳（2-DE）图谱,并分析其差异表达的蛋白质,寻找RA疾病相关蛋白, 探讨痹肿消汤治疗类风湿关节炎可能的作用机制。 方法 18例早期活动性RA患者随机分为两组,治疗组9例口服痹肿消汤（白花蛇舌草25g 肿节风30g 丹参15g 络石藤20g 骨碎补15g 薏苡仁30g等15味中药）,对照组9例口服甲氨蝶呤（methotrexate,MTX）和普威（nimesulide tablets）,疗程均为3个月。9名健康成年人为正常对照组。健康成年人及RA患者治疗前后分别采血10mL,用淋巴细胞分离液分离单个核细胞,抽提外周血单个核细胞中的蛋白,采用固相pH梯度（IPG）2-DE分离正常人及RA患者PBMCs总蛋白质。凝胶经考染显色后, PDQuest图像分析软件进行比较分析、识别差异表达的蛋白质,对差异蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）     

脑梗死急性期、恢复期患者的腺苷酸环化酶表达及意义

目的 观察脑梗死(CI)急性期、恢复期患者的腺苷酸环化酶(AC)表达,探讨其不同病期的病理生理过程.方法 选择CI急性期、恢复期患者各30例,健康者15例,抽取三组外周血分离淋巴细胞,抽提总RNA,用RT-PCR技术检测AC表达.结果 CI急性期患者AC mRNA表达缺失,恢复期患者较健康者表达降低(P＜0.05).结论 CI缺血缺氧状态下机体抑制性激素可能占主导地位,与抑制型G蛋白耦联结合后抑制AC活性,降低细胞基础cAMP水平.