柴胡加龙骨牡蛎汤对抑郁大鼠海马组织PI3K/Akt/GSK3β/β-catenin信号通路的影响

目的:探讨柴胡加龙骨牡蛎汤对抑郁大鼠海马组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/糖原合成酶激酶3β(GSK3β)/β-链环蛋白(β-catenin)信号通路的影响。方法:健康SD大鼠120只,随机取20只作为正常组,另100只大鼠用于制备慢性不可预见性温和应激(CUMS)抑郁模型。再将CUMS抑郁大鼠随机分为模型组,柴胡加龙骨牡蛎汤低、中、高剂量组,氟西汀组,每组20只。柴胡加龙骨牡蛎汤低、中、高剂量组分别灌胃3.25,6.5,13 g·kg~(-1);氟西汀组灌胃盐酸氟西汀10 mg·kg~(-1);正常组和模型组灌胃等量生理盐水;1次/d,共干预21 d。应用糖水偏好和强迫游泳实验评估抑郁行为,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠大脑海马组织中PI3K,Akt,GSK3β以及β-catenin蛋白水平及其磷酸化水平。结果:给药21 d后,与正常组比较,模型组糖水偏好显著下降(P0.01);强迫游泳不动时间显著延长(P0.01);PI3K,p-PI3K p110,p-PI3K p85蛋白水平均显著降低(P0.01);Akt,p-Akt Thr308,p-Akt Ser473,p-GSK3βSer9,β-catenin水平均显著降低(P0.01);GSK3β,p-GSK3β Tyr216水平明显升高(P0.05,P0.01)。与模型组比较,柴胡加龙骨牡蛎汤中、高组大鼠糖水偏好显著增加(P0.01);强迫游泳不动时间显著缩短(P0.01);PI3K总蛋白,PI3K p110和PI3K p85亚基蛋白磷酸化水平均显著增高(P0.01);p-Akt Thr308和p-Akt Ser473水平均显著升高(P0.01);p-GSK3β Ser9,β-catenin水平显著增高(P0.01),而GSK3β,p-GSK3β Tyr216水平却明显降低(P0.05)。结论:柴胡加龙骨牡蛎汤通过提高大鼠海马组织PI3K蛋白水平及活性,激活Akt,抑制GSK3β活性,阻止β-catenin降解,即提高大鼠海马组织PI3K/Akt信号通路活性,保护海马神经元。     

酸枣仁汤加味对抑郁大鼠海马谷氨酸受体表达的影响

目的:观察酸枣仁汤加味对慢性束缚应激抑郁大鼠海马谷氨酸受体表达的影响,探讨其基于谷氨酸受体的抗抑郁机制。方法:将60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、酸枣仁汤加味低、中、高剂量组、氯胺酮组,每组10只。除正常组外,其余各组采用慢性束缚应激(CRS)制备大鼠抑郁模型,酸枣仁汤加味低、中、高剂量组分别灌胃酸枣仁汤加味6,12,24 g·kg~(-1),氯胺酮组腹腔注射氯胺酮15 mg·kg~(-1),正常组和模型组灌胃等体积生理盐水,1次/d,给药干预21 d。采用Morris水迷宫和新奇摄食实验评价大鼠的抑郁行为;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马组织NMDAR1,NMDAR2A,NMDAR2B,GluR1,mGluR1,CaMKⅡα和CaMKⅡβ蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组新奇摄食时间及逃避潜伏期显著延长(P0.01),空间探索时间显著缩短(P0.01);模型组大鼠海马组织NMDAR1,NMDAR2A,NMDAR2B,mGluR1和CaMKⅡβ表达水平均显著升高(P0.01);而GluR1,CaMKⅡα水平均显著降低(P0.01)。与模型组比较,酸枣仁汤加味中、高剂量组新奇摄食时间、逃避潜伏期显著缩短(P0.01),空间探索时间显著延长(P0.01);酸枣仁汤加味中、高剂量组NMDAR1,NMDAR2A,NMDAR2B,mGluR1和CaMKⅡβ蛋白表达水平均显著降低(P0.01);而GluR1,CaMKⅡα蛋白表达显著增高(P0.01)。结论:酸枣仁汤加味可显著改善慢性抑郁大鼠行为学,其机制可能与下调NMDAR2A,NMDAR2B,mGluR1和CaMKⅡβ表达水平,上调GluR1和CaMKⅡα表达有关。     

基于Midkine/Notch2/Hey1信号通路探讨二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病大鼠的抗炎作用

目的 探讨二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠肺组织中肝素结合因子（Midkine）/跨膜受体蛋白（Notch2）/Hey1信号通路中的影响及其抗炎的分子机制。方法 60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、二陈汤加味低、中、高剂量组（5、10、20 g·kg^-1·d^-1）和γ-分泌酶抑制剂组（Notch1通路抑制剂,DAPT）,每组10只。以烟熏联合脂多糖（LPS）法制备COPD大鼠模型。二陈汤加味各干预组灌胃（ig）给药;DAPT组ig DAPT（0.02 g·kg^-1）;正常组及模型组ig等体积生理盐水。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中Midkine、中性粒细胞趋化因子-1（CINC-1）、大鼠巨噬细胞来源趋化因子（MDC）、大鼠CXC趋化因子5（CXCL5）、中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）和核转录因子-κB（NF-κB）p65的含量;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测肺组织中Midkine、Notch2和Hey1 mRNA表达;免疫组化（IHC）检测大鼠肺组织中Midkine、Notch2和Hey1蛋白表达。结果 与正常组比较,模型组BALF中Midkine、CINC-1、MDC、CXCL5、NE和NF-κB p65含量均显著升高（P<0.01）;肺组织Midkine、Notch2和Hey1 mRNA和蛋白表达均显著增加（P<0.01）。与模型组比较,二陈汤加味中、高剂量组和DAPT组BALF中Midkine、CINC-1、MDC、CXCL5和NF-κB p65含量均显著减少（P<0.01）;Midkine、Notch2和Hey1 mRNA表达显著下降（P<0.01）。结论 二陈汤加味对COPD有抗炎作用。其机制可能是通过下调Midkine、Notch2和Hey1 mRNA表达,抑制Midkine、CINC-1、MDC、CXCL5释放有关。     

柴胡加龙骨牡蛎汤对抑郁大鼠海马NLRP3通路的免疫调节作用

目的 探讨柴胡加龙骨牡蛎汤对抑郁大鼠海马NOD样受体蛋白3（NLRP3）炎症小体通路的作用及其机制。方法 60只雄性SD大鼠随机平均分为6组，分别为正常组、模型组、柴胡加龙骨牡蛎汤高、中、低剂量组，NLRP3抑制剂（MCC950）组。除正常组外，其余采用孤养联合慢性不可预见性应激（CUMS） 21 d，制备抑郁大鼠模型。柴胡加龙骨牡蛎汤高、中、低组分别灌胃13，6.5，3.25 g·kg^-1柴胡加龙骨牡蛎汤溶液，MCC950组腹腔注射1 mg·kg^-1，正常组、模型组灌胃等体积生理盐水，给药21 d期间持续追加造模。采用糖水偏好实验（SPT）和新奇摄食实验评价大鼠的抑郁行为，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测海马组织匀浆中白细胞介素-1β（IL-1β）和IL-18含量，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组大鼠海马中NLRP3，凋亡相关微粒蛋白（ASC）及半胱氨酸天门冬氨酸蛋白水解酶-1（Caspase-1）蛋白表达。结果 与正常组比较，模型组糖水偏好率显著降低（P<0.01），新奇摄食时间显著延长（P<0.01）；海马组织中NLRP3，ASC，Caspase-1蛋白表达显著增强（P<0.01），IL-1β和IL-18水平显著升高（P<0.01）。与模型组比较，柴胡加龙骨牡蛎汤高、中组糖水偏好率显著提高（P<0.01），新奇摄食时间显著缩短（P<0.01）；海马中NLRP3，ASC，Caspase-1蛋白表达明显减弱（P<0.05，P<0.01），IL-1β和IL-18水平显著降低（P<0.01）。结论 柴胡加龙骨牡蛎汤可减轻CUMS诱导的抑郁行为，其机制可能与抑制NLRP3炎症小体通路有关。     

酸枣仁汤联合氟西汀治疗肝郁血虚型抑郁症伴失眠的临床观察

目的 观察酸枣仁汤联合氟西汀治疗肝郁血虚型抑郁症伴失眠患者的临床疗效。方法 将120例肝郁血虚型抑郁伴失眠患者随机平均分为观察组与对照组，每组60例，对照组口服盐酸氟西汀胶囊（百忧解），观察组用酸枣仁汤联合盐酸氟西汀，两组疗程均为8周。用汉密尔顿抑郁量表（HAMD），日常生活能力量表（ADL）和匹兹堡睡眠质量指数量表（PSQI）评估临床疗效；ELISA法测定血浆中5-羟色胺（5-HT），去甲肾上腺素（NE），脑源性神经营养因子（BDNF），胶质细胞源性神经营养因子（GDNF），神经元特异性烯醇化酶（NSE）和S100β水平。结果 治疗8周后，与同组治疗前比较，观察组的HAMD和PSQI评分均显著下降（P<0.01）；ADL显著提高（P<0.01）；血浆5-HT，NE，GDNF和BDNF均显著增高（P<0.01）。治疗后，与对照组比较，观察组总有效率显著升高（P<0.01），HAMD评分和PSQI均显著降低（P<0.01），ADL评分显著升高（P<0.01）；血浆5-HT，NE，BDNF和GDNF水平均显著增高（P<0.01），而NSE和S100β水平均显著降低（P<0.01）。结论 酸枣仁汤联合氟西汀治疗肝郁血虚型抑郁症伴失眠的疗效优于单用氟西汀。其机制可能酸枣仁汤对氟西汀增加单胺类神经递质有协同作用，并与促进BDNF和GDNF的分泌，增加对神经细胞的保护有关。     

仲景方药辨治抑郁症研究进展

抑郁症是一种情感精神障碍性疾病,与单胺类神经递质代谢异常、免疫炎症反应、神经内分泌紊乱等诸多发病因素有关,具有高致残率和高复发率的特点,严重危害人类健康,为患者及其家庭带来了巨大的经济负担。目前临床上常用的抗抑郁药物主要有单胺氧化酶抑制剂、三环类抗抑郁药、选择性5-羟色胺(5-HT)再摄取抑制剂,长期服用引起心血管、泌尿、消化功能异常等不良反应。中医药多靶点、多途径、多机制的作用方式在抑郁症的治疗与康复过程中发挥了极大的作用,同时中药以其副作用小、用药依从性好等优点逐渐成为抗抑郁药研发的热点。尤其是用药精专、组方严谨的仲景方药在治疗抑郁症方面具有独特优势,数千年来已被无数医家在临床上应用于治疗各种类型的抑郁症,疗效确切。近年来,围绕仲景方药治疗抑郁症的临床研究、实验研究和药理学研究不断扩展和深化。该文将从柴胡类方、栀子类方和其他方3个方面揭示仲景方药辨治抑郁症的用药规律,着重体现在对方剂组成、病因病机和主治症状的探讨。其次,整合归类了仲景方药在抑郁症治疗方面的经验,主要从临床研究和药理研究2个方面进行阐述。进而概括了近年来仲景方药治疗抑郁症的研究角度和进展程度,以期能够挖掘、传承和发展仲景方药及为多角度、多思路地治疗抑郁症提供经验和借鉴。     

四逆散对抑郁大鼠BDNF/TrkB，5-HT/5-HT1AR及HPA轴的影响

目的 观察四逆散对抑郁大鼠脑神经营养因子（BDNF）/酪氨酸激酶受体B（TrkB），5-羟色胺（5-HT）/5-HT1A受体（5-HT1AR）及下丘脑-垂体-肾上腺（HPA）轴的影响，探讨四逆散基于BDNF/TrKB，5-HT/5-HT1AR及HPA轴的抗抑郁作用机制。方法 120只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、四逆散低、中、高剂量组和氟西汀组，每组20只。除正常组外，其余5组连续21 d采用孤养结合慢性温和不可预知性刺激法（CUMS）制备抑郁大鼠模型。四逆散低、中、高剂量组分别灌胃（ig）四逆散（1.25，2.5，5）g·kg^-1，氟西汀组ig盐酸氟西汀0.01 g·kg^-1，正常组和模型组ig等体积生理盐水，每日1次，持续干预21 d。干预期间，各造模组大鼠均继续给予刺激。通过糖水偏好和旷场实验评估CUMS模型大鼠抑郁状态；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血浆促肾上腺皮质激素释放激素（CRH），促肾上腺皮质激素（ACTH），皮质酮（CORT）及海马匀浆中BDNF，5-HT水平；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测海马TrKB，5-HT1AR，糖皮质激素受体（GR）和盐皮质激素受体（MR）mRNA表达；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测海马TrKB，5-HT1AR，GR，MR蛋白表达水平；苏木素-伊红（HE）染色观察海马组织形态学变化。结果 与正常组比较，模型组大鼠糖水偏好率显著下降（P<0.01），旷场实验中水平得分和垂直得分显著降低（P<0.01），血浆CRH，ACTH，CORT含量显著升高（P<0.01），海马BDNF，5-HT含量显著降低（P<0.01），海马TrKB，5-HT1AR和GR mRNA及蛋白表达水平显著降低（P<0.01），MR mRNA及蛋白表达水平显著升高（P<0.01），HE染色结果显示海马神经元结构损伤。与模型组比较，四逆散低、中、高剂量组和氟西汀组糖水偏好率显著升高（P<0.01），旷场实验中水平得分和垂直得分明显升高（P<0.05，P<0.01），血浆CRH，ACTH，CORT含量明显降低（P<0.05，P<0.01），海马BDNF，5-HT含量明显升高（P<0.05，P<0.01），海马TrKB，5-HT1AR和GR mRNA及蛋白表达水平明显升高（P<0.05，P<0.01），MR mRNA及蛋白表达水平明显降低（P<0.05，P<0.01），HE染色结果显示海马神经元结构明显复原。结论 四逆散具有显著的抗抑郁作用，其机制可能与升高大鼠海马BDNF，5-HT含量，上调TrKB，5-HT1AR和GR mRNA及蛋白表达水平，下调MR mRNA及蛋白表达水平，抑制HPA轴亢进，增强海马组织神经元的再生和修复相关。     

小柴胡汤加味对慢性束缚抑郁模型大鼠海马谷氨酸转运体EAATs，VGLUTs表达的影响

目的:观察小柴胡汤加味对慢性束缚抑郁模型大鼠海马谷氨酸膜转运体(EAATs)及囊泡转运体(VGLUTs)表达的影响,探讨小柴胡汤加味基于谷氨酸转运的抗抑郁机制。方法:120只SD大鼠随机分为正常组、模型组、小柴胡汤加味组低、中、高剂量组、利鲁唑组,每组20只。除正常组外,其余各组采用束缚应激制备大鼠抑郁模型,小柴胡汤加味低、中、高剂量组分别灌胃(ig)小柴胡汤加味6.5,13,26 g·kg~(-1);利鲁唑组腹腔注射利鲁唑20 mg·kg~(-1);正常组和模型组ig等量生理盐水;1次/d,共干预21 d。采用强迫游泳实验(FST)和悬尾实验(TST)评价大鼠的抑郁行为;采用高效液相色谱法(HPLC)检测海马组织中谷氨酸含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠海马中EAAT1,EAAT2和EAAT3 mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马组织EAAT1,EAAT2,EAAT3,VGLUT1,VGLUT2蛋白表达;用尼氏染色法观察大鼠海马神经元形态,免疫组化(IHC)检测海马CA1区EAAT1,EAAT2和NeuN蛋白在神经细胞中的定位表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠悬尾和强迫游泳不动时间均显著延长(P0.01),海马内EAAT1,EAAT2,EAAT3 mRNA和蛋白表达均显著下降(P0.01),VGLUT1和NeuN蛋白表达均显著降低(P0.01);而谷氨酸水平和VGLUT2表达均显著增高(P0.01)。与模型组比较,小柴胡汤加味中、高剂量组大鼠悬尾和强迫游泳不动时间明显缩短(P0.05,P0.01),海马内EAAT1,EAAT2和EAAT3mRNA和蛋白表达量均显著增加(P0.01),VGLUT1和NeuN蛋白表达均显著增强(P0.01),谷氨酸水平和VGLUT2表达显著回降(P0.01),海马神经元结构明显复原。结论:小柴胡汤加味有明显的抗抑郁作用,其机制可能与其上调大鼠海马内EAAT1,EAAT2,EAAT3基因和VGLUT1蛋白表达。     

二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病大鼠TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响

目的:观察二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核转录因子-κB(NF-κB)通路及相关分子的影响,探讨二陈汤加味对COPD抗炎作用的分子机制。方法:将40只SD大鼠随机平均分为正常组、模型组、二陈汤加味组和EVP4593(NF-κB抑制剂)组。以香烟烟雾联合气管滴注脂多糖(LPS)方法制备COPD大鼠模型。二陈汤加味组以10 g·kg~(-1)灌胃(ig),EVP4593组皮下注射1 mg·kg~(-1),正常组、模型组ig等量生理盐水,连续干预14 d。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清高迁移率族蛋白B1(HMGB1),趋化因子(CXCL)-2,CXCL-3和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测肺匀浆中TLR4,MyD88,NF-κB p65 mRNA及蛋白表达水平,免疫组化(IHC)检测TLR4,MyD88,磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)在大鼠肺组织中的定位表达。结果:与正常组比较,模型组肺匀浆中TLR4,MyD88,NF-κB p65 mRNA及蛋白表达均显著增加(P0.01),HMGB1,CXCL-2,CXCL-3和MCP-1含量显著升高(P0.01)。与模型组比较,二陈汤加味组TLR4,MyD88,NF-κB p65mRNA及其蛋白表达均显著减弱(P0.05,P0.01),HMGB1,CXCL-2,CXCL-3和MCP-1含量显著降低(P0.05,P0.01)。结论:二陈汤加味对COPD有抗炎作用,其机制可能与抑制TLR4/MyD88/NF-κB通路相关信号分子基因的表达,以及减少HMGB1,CXCL-2,CXCL-3和MCP-1的释放有关。     

二陈汤加味通过HMGB1/RAGE/NF-κB信号通路对COPD大鼠细支气管炎症的影响

目的：观测二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠细支气管中高迁移率族蛋白1(HMGB1)/晚期糖基化终产物受体(RAGE)/核转录因子-κB(NF-κB)通路中关键分子表达的影响,探讨二陈汤加味通过HMGB1/RAGE/NF-κB信号通路对COPD细支气管炎症的作用及分子机制。方法：60只SD大鼠随机分为6组：正常组、模型组、二陈汤加味低、中、高剂量组(5、10、20 g·kg^-1)和丙酮酸乙酯(EP)组(HMGB1抑制剂),每组10只。以烟熏联合气管滴注脂多糖的方法制备COPD大鼠模型。二陈汤加味各干预组灌胃(ig)给药,并腹腔注射林格溶液4 mL;EP组ig等体积生理盐水,并腹腔注射EP(0.04 g·kg^-1);正常组和模型组等体积生理盐水ig、并等体积林格溶液腹腔注射,连续干预21 d。酶联免疫吸附测定法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中HMGB1、趋化因子CXCL1和CXCL2、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)的含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime PCR)检测肺组织中HMGB1、RAGE和NF-κB p65 ...