实时细胞分析法建立小肠上皮细胞生长实验模型

目的利用实时细胞分析仪,并以表皮生长因子(EGF)为促进细胞生长的工具药,观察EGF在不同培养条件下对细胞生长的影响,为建立IEC-6细胞生长(增殖)药理实验模型提供参考。方法以1×10~4/孔的密度将细胞接种于E-Plate 16板,并以含10%血清DMEM培养24 h,换成无血清DMEM培养(即血清饥饿)20 h后,观察不同培养条件对细胞生长的影响及EGF的药效。结果 (1)10%血清时,EGF组(1、10、100μg·L^-1)给药24、48、72 h后,细胞生长指数与空白组比较均P>0.05,提示含10%血清培养不能反映EGF的药效;(2)0%血清时,EGF(1、10μg·L^-1)对无血清培养所致的细胞生长抑制有改善作用,但不能使其恢复正常水平(给药24、48、72 h后,EGF组与5%血清空白组比较均P<0.01),提示无血清培养不能反映EGF的药效;(3)0%、0.5%、1%血清可对细胞生长产生不同影响,其中0.5%血清既不会对细胞生长产生明显抑制,也不会由于促进细胞生长时间较长而不利于反映EGF药效;(4)0.5%血清时,EGF各剂量组给药24、48、72 h后,均能促进细胞生长(细胞指数与空白组比较均P<0.01),提示0.5%血清培养条件下可较好反映EGF药效;(5)重复验证了0.5%血清时EGF(10μg·L^-1)促进细胞生长的药效。结论在实时细胞分析仪建立IEC-6细胞生长(增殖)药理实验模型的参考方案:细胞以含10%血清DMEM培养24 h,再以无血清DMEM培养(即血清饥饿)20 h,然后加受试药,并以含0.5%血清培养48~72 h,可观察其对细胞生长(增殖)影响的药效。     

柠檬酸所致酸负荷对唾液分泌影响的研究

目的考察柠檬酸所致酸负荷对唾液分泌相关指标的影响,以优化柠檬酸负荷方法。方法采集10例健康者第1~90秒(负荷前)、第91~120秒(负荷时)的唾液及第121~210秒(负荷后)的唾液;另混合负荷时和负荷后的唾液进行指标检测。各组均检测唾液淀粉酶(sAA)活性、pH值、唾液流率、总蛋白浓度,并比较各指标酸负荷前后的比值。结果 (1)负荷后sAA活性、唾液pH值和总蛋白浓度较负荷前明显增高,且负荷后与负荷前的比值均大于1;(2)但有柠檬酸混合时,sAA活性、唾液pH值、总蛋白浓度均较酸负荷前、后反而降低,其比值均小于1。结论柠檬酸本身明显影响酸负荷唾液分泌结果,建议将酸负荷时的唾液分开处理分析。     

胸腔积液患者血清和胸液CYFRA21-1检测的意义

20 0 0年 9月至 2 0 0 2年 6月 ,我们检测了 33例恶性胸腔积液患者和 2 4例结核性胸腔积液患者的血清和胸液 CYFRA2 1 - 1水平 ,以探讨 CYFRA2 1 - 1检测对于两种胸腔积液鉴别诊断的价值。1　资料与方法1 .1　临床资料　恶性胸腔积液组 33例 ,均为肺癌病例。男 2 8例 ,女 5例 ;年龄 47～ 68岁。均经纤维支气管镜活检病理或胸腔积液细胞学诊断证实。其中鳞癌1 4例 ,腺癌 1 6例 ,小细胞癌 3例。结核性胸腔积液组 2 4例 ,男 1 8例 ,女 6例 ;年龄 35～ 66岁。其中 1 4例胸腔穿刺抽液 PCR查见结核菌 ,其余 1 0例根据临床表现、胸液性质、系…     

胃宁合剂抗炎镇痛的药效学及急性毒性实验研究

目的 :探讨胃宁合剂抗炎镇痛的作用机制。方法 :检测胃宁合剂对冰乙酸致痛扭体小鼠的影响 ;对热板致痛小鼠的影响 ;对小鼠毛细血管通透性增高的影响 ;测小鼠一日最大耐受量。结果 :胃宁合剂对冰乙酸致痛扭体小鼠及热板致痛小鼠均有镇痛作用 ;能抑制小鼠腹腔注射冰乙酸所致的毛细血管通透性增高 ,有抗急性炎症作用 ;一日最大耐受量相当于临床用量的 12 0倍 ,提示临床用量在安全范围。结论 :胃宁合剂有抗炎、镇痛作用 ,与该方临床功效相符 ;临床用量在安全范围     

染色体驱动蛋白KIF4A稳定低表达胃癌细胞系的构建及鉴定

目的 构建稳定低表达染色体驱动蛋白KIF4A的胃癌细胞系,观察KIF4A低表达细胞的有丝分裂期纺锤体中央区的形成.方法 针对人类驱动蛋白KIF4A mRNA的编码区设计特异性siRNA序列,构建KIF4A短发夹RNA（shRNA）表达质粒pGPU-GFP-KIF4A.将质粒转染胃癌细胞SGC-7901,经过G418筛选获得稳定低表达KIF4A的细胞株.使用蛋白免疫印迹方法鉴定细胞株内KIF4A蛋白的敲降效果,并通过细胞免疫荧光染色法观察细胞纺锤体中央区的形成.结果 成功获得了3株不同水平稳定低表达KIF4A的SGC-7901细胞株（SGC-shKIF4A）和稳定表达无意义shRNA的对照细胞（SGC-shNC）;同时,与对照细胞SGC-shNC相比,SGC-shKIF4A细胞中有丝分裂纺锤体中央区延长,并随KIF4A蛋白表达水平的降低而增加.结论 成功构建了不同水平稳定低表达KIF4A蛋白的胃癌细胞SGC-shKIF4A,为进一步研究驱动蛋白分子KIF4A的功能及其在胃癌发生发展过程中的作用奠定基础.     

水从天上来

世上有种最温柔也最具震撼力的东西,那就是——悲悯。不知道该怎样形容这种情感,它是那么的旷世,仿佛来自天上的水;它又是那么的尘世,伴着人的血脉不息运行。它是上天在人的灵魂中植下的一方净土,培育纯净而慈悲的花朵。少年时,住在一户院落内,院落的门口左侧挂着一块白底黑字的长牌“:李殊如诊所”。字是隶书,端雅干净,像虽已迟暮仍面目清秀的李殊如大夫。她是解放前同济医科大学毕业的,医术精湛,但不知为何终生未婚,据说身世复杂,她也从未向人提过只言片语,只是安静行医。她的房间如同其人,朴素但有拂不去的神秘,白的墙壁、白的床单、白纸糊的窗户,没有任何色彩的点缀,却有让人不敢多探的光华。她很少言笑,但并不威严,眼神中总有善解的温情。有次一个无理取闹的病家吵上门来,为拖赖诊资与药费谎说病人病情更重了,李殊如并不争辩,只是看看病家浅浅一笑,说:是吗,那就不必付费了。转身,她配过一副药,递与病家“,要不要再试试?”病家红了脸,迟疑地接过药急急地走了。那一笑,是我在白色的诊所里感受到的最初的悲悯。里面有对窘迫的理解,对人性的宽容,对自我的尊重。从此我觉得悲悯应该是白色的,微微透着天的蓝光。一个有悲悯心的人,是幸运的,因为悲悯在某种程度上能...     

胃酸直接滴定法在新药临床药理研究中的应用

胃酸分泌与消化性溃疡病、慢性胃炎、返流性食管炎、消化不良等疾病有密切的关系。临床使用先进方法监测胃酸分泌可以协助诊断和指导治疗用药。某些治疗消化性溃疡和胃泌素瘤的药物如组织胺第2(H_2)受体拮抗剂、生长抑制素、氢—钾离子ATP酶抑制剂等,在临床药理研究中,采用24小时胃酸连续监测、胃内酸度直接滴定(Intragastric titration,IGT)等方法检测胃酸分泌,是评价新药临床疗效的主要指标之一。现将我们进行的一些有关试验结果报告如下。     

脾阳虚大鼠模型建立及理中汤疗效观察

目的 建立适用于中医"证"研究及中药药理学研究的脾阳虚大鼠模型.方法 给予大鼠每日游泳、隔日注射利血平、隔日灌胃番泻叶3周,以建立脾阳虚模型,第4周～第6周灌胃温阳健脾方药理中汤,以其治疗结果 验证造模效果.结果 造模期间模型大鼠出现活动减少、嗜卧、畏冷蜷缩、便溏,毛色枯槁不荣等脾阳虚症状,与正常大鼠相比,体温、体重、摄食量、尿D-木糖排泄率等均有显著性差异,但病理切片未发现明显差异;6周后理中汤组与正常组比较各指标差异无显著性,但自然恢复组与正常组比较差异有显著性.结论 利血平合劳倦过度/寒凉泄下法建立的脾阳虚大鼠模型一般症状和生化指标都与脾阳虚患者临床表现基本相符,用此法建立的脾阳虚大鼠模型可为脾阳虚"证"本质研究及相关方药研究提供参考.     

延胡索和延胡索乙素对大鼠胃泌酸的抑制作用

本文采用在体胃灌流方法探讨延胡索和延胡索乙素(dl-THP)对大鼠胃泌酸功能的影响,并与西咪替丁(CM)比较dl-THP的相对效力。延胡索水煎液以量效方式抑制大鼠胃基础及组胺(His)诱导泌酸,持续作用时间约6 h。dl-THP对基础和His刺激泌酸也呈剂量依赖性抑制,IC_so分别是10~(-4.457)和10~(-4.713)mol/kg;相对效力是CM的1.39(基础泌酸)和0.33倍(诱导泌酸);时效反应比延胡索水煎液稍短。     

CR1409拮抗缩胆囊素升高细胞内Ca~(2+)的作用

CR1409是一种新合成的缩胆囊素(CCK)受体拮抗剂。本文使用荧光指示剂Fura-2作为细胞内钙离子的探测物,在离体的大白鼠胰腺细胞研究OR1409对CCK引起细胞内钙离子浓度升高的拮抗作用。结果表明:10μmol/L CR1409完全抑制1nmol/L CCK的作用,半效抑制浓度为0.37μmol/L,比另一种拮抗剂双丁酰环鸟嘌呤核苷(db cGMP)强100倍。随着CR1409浓度的递增,使CCK升高细胞内钙离子浓度的量效曲线右移,根据Schild方法计算,pA_2值为6.93(r=0.992)。CR1409对氯氨甲酰胆碱和蛙皮素无拮抗作用。实验结果证明CR1409是一种效力较强的、特异性的和竞争性的CCK受体拮抗剂。