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目的 通过免疫组化法检测正常和实验性根尖周炎进展过程中根尖周组织整合素β1表达的分布情况及规律,探讨其在根尖周组织炎症进展中的作用。方法 取磨牙牙髓暴露不同时间(0、7、14、21、28 d)的大鼠上颌骨行整合素β1免疫组化染色,观察根尖周组织中整合素β1表达部位与表达程度。结果 整合素β1广泛表达于正常大鼠根尖周组织;牙髓暴露7~21 d,根尖周结缔组织中整合素β1呈阳性至强阳性表达,炎细胞密集区可见深棕色颗粒集聚;牙髓暴露28 d,根尖周结缔组织中整合素β1表达较弱。牙槽骨内的骨细胞、陷窝内血管、成骨细胞、破骨细胞及牙骨质细胞中整合素β1在牙髓暴露0~14 d呈强阳性表达,21 d后表达减弱。结论 整合素β1参与根尖周炎症的进展与根尖周肉芽组织形成炎症早期的骨吸收。     

构建人骨形态发生蛋白2及血管内皮生长因子165基因共表达重组腺病毒在兔骨髓基质干细胞中的表达

目的:构建人骨形态发生蛋白2及血管内皮生长因子基因共表达腺病毒并观察其在兔骨髓基质干细胞中的表达。方法:实验于2005-03/12在解放军第四军医大学唐都医院全军骨肿瘤研究所完成。①分别克隆人骨形态发生蛋白2及血管内皮生长因子基因,分别依次亚克隆至穿梭载体构建重组穿梭质粒pAdT-B2V并酶切鉴定;后经PmeI酶切线性化后与骨架质粒感受态细胞AdEasier-1Cells经电穿孔法同源重组得到腺病毒质粒pAdBMP-7并酶切鉴定。②PacI酶切线性化后的pAdBMP-7腺病毒质粒转染293细胞包装后获得复制缺陷型重组腺病毒AdBMP-7,在荧光显微镜下计算表达绿色荧光蛋白细胞个数,测定AdB2V滴度。③将AdBMP-7体外感染兔骨髓基质干细胞后,以荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达及反转录-聚合酶链反应方法鉴定外源基因的表达,以β-肌动蛋白为内参照,未感染细胞为对照。④AdB2V感染兔骨髓基质干细胞后72h以免疫细胞化学染色方法检测外源基因的表达,以未感染组为对照。结果:①酶切鉴定表明外源基因已插入到pAdTrack-CMV穿梭质粒且腺病毒重组质粒pAdBMP-7构建成功。②经293细胞包装3d后可观察到绿色荧光蛋白表达,氯化铯梯度离心法最终获得约3×109efu/L滴度的重组腺病毒。③体外感染兔骨髓基质干细胞后荧光显微镜观察及反转录-聚合酶链反应证实外源基因可在兔骨髓基质干细胞中表达,未感染组为阴性。④AdB2V感染兔骨髓基质干细胞后以免疫细胞化学染色均观察到外源基因的阳性表达,未感染组呈阴性表达。结论:成功构建人骨形态发生蛋白2及血管内皮生长因子165基因共表达重组腺病毒,证实了其在兔骨髓基质干细胞的表达,为骨再生的局部联和基因治疗打下基础。     

构建人骨形态发生蛋白2及血管内皮生长因子165基因共表达重组腺病毒在兔骨髓基质干细胞中的表达

目的：构建人骨形态发生蛋白2及血管内皮生长因子基因共表达腺病毒并观察其在兔骨髓基质干细胞中的表达。 方法：实验于2005-03／12在解放军第四军医大学唐都医院全军骨肿瘤研究所完成。①分别克隆人骨形态发生蛋白2及血管内皮生长因子基因，分别依次亚克隆至穿梭载体构建重组穿梭质粒pAdT-B2V并酶切鉴定；后经PmeI酶切线性化后与骨架质粒感受态细胞AdEasier-1 Cells经电穿孔法同源重组得到腺病毒质粒pAdBMP-7并酶切鉴定。②PacI酶切线性化后的pAdBMP-7腺病毒质粒转染293细胞包装后获得复制缺陷型重组腺病毒AdBMP-7，在荧光显微镜下计算表达绿色荧光蛋白细胞个数，测定AdB2V滴度。③将AdBMP-7体外感染兔骨髓基质干细胞后，以荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达及反转录-聚合酶链反应方法鉴定外源基因的表达，以B-肌动蛋白为内参照，未感染细胞为对照。④AdB2V感染兔骨髓基质干细胞后72h以免疫细胞化学染色方法检测外源基因的表达，以未感染组为对照。 结果：①酶切鉴定表明外源基因已插入到pAdTrack—CMV穿梭质粒且腺病毒重组质粒pAdBMP-7构建成功。②经293细胞包装3d后可观察到绿色荧光蛋白表达，氯化铯梯度离心法最终获得约3&;#215;10^9 efu／L滴度的重组腺病毒。③体外感染兔骨髓基质干细胞后荧光显微镜观察及反转录-聚合酶链反应证实外源基因可在兔骨髓基质干细胞中表达，未感染组为阴性。④AdB2V感染兔骨髓基质干细胞后以免疫细胞化学染色均观察到外源基因的阳性表达，未感染组呈阴性表达。 结论：成功构建人骨形态发生蛋白2及血管内皮生长因子165基因共表达重组腺病毒，证实了其在兔骨髓基质干细胞的表达，为骨再生的局部联和基因治疗打下基础。     

安迪粉针剂抗肿瘤作用的实验研究

目的　探讨安迪粉针剂 (简称安迪 )对小鼠移植性肿瘤的抑制作用 ,以及对其免疫功能的影响。方法　采用小鼠移植性肿瘤即艾氏腹水癌 (ECA)、肉瘤180 (S180 )、肝癌 (HCA)、Lewis肺癌模型 ,以 5 - FU为阳性对照组 ,观察 2 5 ,1 2 ,6 mg·kg-1安迪的抗肿瘤作用 ,并采用小鼠溶血素实验和小鼠迟发性变态反应实验观察安迪对荷瘤小鼠免疫功能的影响。结果　不同浓度安迪对体外 ECA肿瘤细胞的蓝染率分别为 1 0 0 % ,96 % ,89% ,6 5 %和 49% (P <0 .0 1 ) ;安迪对 S180 、HCA和 Lewis移植瘤的抑制率分别达 42 .1 %～ 5 4 .8% ,3 8.2 %～ 5 3 .5 %和42 .1 %～ 5 5 .3 % (P <0 .0 1 ) ;对小鼠腹水型 HCA的生命延长率为 1 1 0 .4%～ 1 3 6 .1 % (P <0 .0 1 ) ;与阳性对照组比较 ,安迪对荷瘤小鼠免疫功能无抑制作用。结论　安迪具有较强的抗肿瘤作用 ,且对荷瘤小鼠免疫功能无影响     

乙酰半胱氨酸及扎鲁斯特对急性肺损伤的防治作用

目的：观察乙酰半胱氨酸及扎鲁斯特对急性肺损伤的防治作用。方法：大耳白兔32只，随机分为对照组、致伤组、乙酰半胱氨酸治疗组和扎鲁司特治疗组，每组8只。致伤组经颈静脉注入脂多糖（LPS，1ml／kg）；对照组注人生理盐水（1ml／kg）；乙酰半胱氨酸治疗组在注入LPS（1ml／kg）前2min，经颈静脉注入乙酰半胱氨酸（300mg／kg）；扎鲁斯特治疗组在注入LPS（1ml／kg）前1h及0.5h，胃内注入扎鲁司特（20mg／kg）。测定各组肺动脉压、动脉血氧分压、外周血白细胞计数、肺泡灌洗液（BALF）NO2^-浓度、肺系数（肺湿重／体重）及肺湿/干比。结果：乙酰半胱氨酸组肺动脉压及NO2^-浓度与致伤组有显著差别（P〈0．05），乙酰半胱氨酸及扎鲁斯特组氧分压均较致伤组明显改善（P〈0．05），肺系数和肺湿／干比显著均低于致伤组（P〈0．05），外周血白细胞高于致伤组（P〈0．05）。结论：乙酰半胱氨酸和扎鲁斯特对兔内毒素急性肺损伤有一定的保护作用。     

Identification of a new lamin A/C mutation in a chinese family affected with atrioventricular block as the prominent phenotype

Even though mutations in LMNA have been reported in patients with typical dilated cardio-myopathy(DCM)and atrioventricular block(AVB)previously,the purpose of this study was to disclose this novel genetic abnormality in one Chinese family with the atypical phenotype of progressive AVB followed by DCM with normal QRS interval.Genome-wide linkage analysis mapped the AVB gene in this family to a marker at chromosome 1q21.2,where the LMNA gene was located.Direct DNA sequence analysis revealed a heterozygous G t...     

辛伐他汀诱导促进骨形成蛋白-7基因修饰的兔间充质干细胞的成骨转化

目的:研究辛伐他汀诱导对骨形成蛋白-7(BMP-7)基因修饰的间充质干细胞(MSCs)增殖和分化表型的影响。方法:将辛伐他汀诱导和未经诱导的兔MSCs分别转导BMP-7基因后,Westernblotting检测转导后细胞BMP-7的表达;通过观察细胞生长以及碱性磷酸酶活性和测定骨钙素含量,分析辛伐他汀诱导对BMP-7基因修饰的MSCs的增殖和分化表型的影响。结果:转导后BMP-7基因在诱导组和未诱导组MSCs中均有表达,诱导组细胞BMP-7表达量、碱性磷酸酶活性和骨钙素含量均比较未诱导组明显增高。结论:转导前辛伐他汀诱导能够促进BMP-7基因修饰的MSCs的成骨转化。     

垂枝赤桉的化学成分研究

目的：研究垂枝赤桉叶的化学成分，方法：采用各种色谱技术进行分离纯化，根据理化性质和光谱数据等进行结构鉴定。结果：分离得到了6个化合物，分别为5－羟基－4，7－二甲基氧基－6，8－二甲基黄酮（I），4，5－二羟基－7－在－6，8－二甲基黄酮（II），槲皮素（III），4，3，5，7－四羟基黄酮（IV），3β－羟基－乌索－11－烯－28，13β－内酯（V）和齐墩果酸（VI），结论：所有化合物均为首次从该植物中分得。初步药理实验表明V有一定的抗菌作用。     

不同前药联合HSV-tk自杀基因系统对喉癌细胞体外杀伤效应的比较研究

目的：观察并比较不同前药与自杀基因HSV－tk共同作用对喉癌细胞Hep-2的体外杀伤作用。方法：构建tk基因逆转录表达载体pL(tk)SN，在LipofectAMINETM2000介导下转染PA317包装细胞，G418筛选，直至出现抗性克隆，扩大培养，用NIH3T3测定病毒滴度，将重组病毒分别感染人喉癌细胞Hep-2,G418筛选出抗性克隆命名为Ｈep/tk，以RT－PCR及Southern blot检测tk基因的整合及表达。通过观察tk基因修饰细胞生长状况及比较不同前药对喉癌细胞杀伤效应以探讨不同前药作用机理。结果：RT－PCR及Southern blot分析证明tk基因在人喉癌细胞系Hep-2中有整合及表达；Hep/tk与未转基因的原肿瘤细胞相比，二者生长速度及形态结构无明显差别；在不同前药敏感性试验中，Hep/tk显示出对GCV的高敏感性，而tk阳性和tk阴性细胞均显示对ACV和BVdU相对不敏感，tk基因修饰细胞与不同比例亲本细胞混合后经GCV治疗均显示出明显旁观者效应。结论：人喉癌细胞系Hep-2对HSV－tk/GCV系统高度敏感，并且有明显的旁观者效应，可望成为喉癌基因治疗的新途径。