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1.
具星爱  刘滋康  郭子宽  李占全 《中外医疗》2012,31(4):29+117-29,117
目的人骨髓间充质干细胞(hMSC)经过腺病毒介导转染肝细胞生长因子(Ad-HGF)后进行鉴定。方法密度梯度离心法分离培养原代hMSC,取第三代hMSC转染Ad-HGF。比较转染前后的细胞形态变化,流式细胞仪鉴定hMSC/Ad-HGF的表面标志物,ELISA测定培养液上清的HGF浓度。结果 HGF基因修饰前后,均为成纤维样细胞形态;流式测定hMSC/Ad-HGF与hMSC细胞表型一致;ELISA测得hMSC/Ad-HGF的培养液上清HGF浓度显著高于hMSC(P〈0.001)。结论经HGF基因修饰的hMSC,维持了原有的细胞形态及特异性细胞表型,且高表达HGF。  相似文献   
2.
目的探讨一种从骨髓血凝块中分离培养间充质干细胞的简易方法。方法采集肝素化骨髓标本7份,部分加入凝血酶以模拟血液凝固过程,并于0、8和16 h分别使用尿激酶或机械处理,分为尿激酶处理组、机械处理组、凝固未处理组及未凝固对照组。各组标本经氯化铵溶解红细胞后,分别进行成纤维细胞集落形成单位(CFU-F)和MSC传代培养。计每组CFU-F及第0、1和2代MSC数量。流式细胞仪测定细胞表型,组织化学法检测细胞体外成骨和成脂肪能力。结果尿激酶处理组样本CFU-F数平均为(33.71±23.54),接近于未凝固对照组样本(40.43±21.29)(n=7,P〉0.05),显著高于机械法处理组(13±11.91)(n=7,P〈0.01)和凝固未处理组(3.71±3.89)(n=7,P〈0.01)。储存8或16 h后的标本,各组CFU-F形成能力下降,而未凝固对照组和尿激酶处理组数量仍显著高于另外两组(P〈0.05)。标本储存不同时间进行MSC传代培养,未凝固对照组及尿激酶处理组细胞数量无明显差别,但均显著高于凝固未处理组及机械处理组。各组MSC均表达CD73和CD90,不表达CD31和CD45。经特异诱导后,各组MSC均呈现碱性磷酸酶活性,细胞内出现亲油红O染料的脂肪滴。结论对于已经凝固的骨髓标本而言,尿激酶预处理是分离培养MSC的良好途径。  相似文献   
3.
目的:观察栀子桃仁泥贴敷涌泉穴联合布洛芬治疗小儿急性上呼吸道感染发热的临床疗效。方法:将141例患儿随机分为布洛芬组、布洛芬加栀桃泥组、单纯栀桃泥组3组各47例。3组患儿的对症处理相同,布洛芬组给予布洛芬混悬滴剂口服;栀桃泥组给予栀子桃仁泥贴敷涌泉穴;布洛芬加栀桃泥组给予布洛芬混悬滴剂口服及栀子桃仁泥贴敷涌泉穴,均治疗观察3天。检测治疗前后血清白细胞介素-1β(IL-1β)、血清干扰素(IFN-α)水平,观察用药期间体温变化及有无惊厥发生,评价临床疗效。结果:退热疗效总有效率布洛芬组为76.6%,布洛芬加栀桃泥组为91.5%,栀桃泥组为72.3%,3组两两比较,布洛芬加栀桃泥组总有效率高于布洛芬组及栀桃泥组(P0.05);布洛芬组与栀桃泥组疗效相当(P0.05)。预防惊厥有效率布洛芬组为68.1%,布洛芬加栀桃泥组为87.2%,单纯栀桃泥组为74.5%,3组两两比较,布洛芬加栀桃泥组预防惊厥有效率高于布洛芬组(P0.05);栀桃泥组预防惊厥有效率与布洛芬组、布洛芬加栀桃泥组疗效相当(P0.05)。治疗后布洛芬加栀桃泥组IL-1β、IFN-α水平下降最显著,与布洛芬组、栀桃泥组比较,差异均有显著性意义(P0.05);栀桃泥组IL-1β、IFN-α水平降低次之,与布洛芬组比较,差异有显著性意义(P0.05)。结论:栀子桃仁泥贴敷涌泉穴联合布洛芬治疗小儿急性上呼吸道感染发热临床疗效确切,其退热和抗惊厥机制可能为通过降低血清IL-1β、IFN-α的含量有关。  相似文献   
4.
间充质干细胞(MSC)释放膜微囊(MV)是其促血管再生的重要机制。本研究旨在探索人骨髓MSC释放MV的适宜条件。收集5份健康人骨髓标本,分离培养并鉴定MSC。将第5代MSC分别悬浮于含10%胎牛血清或无血清的培养液中,按2×10^6/皿接种于直径为150mm的培养皿中,在低氧(1%氧浓度)或常氧条件下培养72h,每组20皿。将培养上清高速离心收获MV。计数培养后贴壁细胞,并测定MV蛋白质含量。电子显微镜观察MV的形态以鉴定MV。流式细胞术分析MV的表面标志。在脐静脉内皮细胞培养体系中,加入不同来源的MV(10μg/m1),培养72h后利用MTr实验观察细胞增殖活性。结果表明:多数Msc释放的MV直径〈100nm,在电子显微镜下呈特征性的中空膜样结构。MV表达CD29、CD44、CD73和CD105,不表达CD31和CD45。在常氧含血清、常氧无血清、低氧含血清和低氧无血清条件下,台盼蓝抵抗的贴壁细胞扩增倍数分别为4.1、1.8、5.8和3.7,计算10^8细胞释放的MV蛋白含量分别为463.48±138.74、1604.07±445.28、2389.64±476.75和3141.18±353.01μg。MTT实验表明,低氧条件下获得的MV具有更好的促内皮细胞增殖作用。结论:低氧可促进MSC释放MV,低氧和无血清培养MSC可能是制备MSC—MV的适宜条件。  相似文献   
5.
间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSC)的免疫调节、造血支持及促血管新生的功能特点,使其成为继造血干细胞之后又一个有望应用于临床的成体干细胞.有些国家已经批准MSC作为药物,用于治疗移植物抗宿主病、克隆氏病、骨关节炎等疾病;同时,数百个临床试验也在进行中,上万人已经接受了MSC治疗.然而,MSC本身及其治疗过程,都可能引起相应的毒副反应,甚至产生致命的并发症.因此,在MSC治疗某些疾病效果尚存在争议的情况下,进行这种新型细胞治疗的临床试验,应重视符合医学伦理规范的受试者知情权保护.参试者有权了解细胞治疗细节及其可能机制,潜在的风险及规避措施,其他可以采用的治疗手段及其与细胞治疗的比较等细节,以切实保护受试者权益.  相似文献   
6.
背景:间充质干细胞移植可以降低心肌梗死面积、改善心功能,目前多数认为间充质干细胞分泌生物因子起主要作用。目的:观察骨髓间充质干细胞条件培养液对过氧化氢诱导新生大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法:分离培养并鉴定骨髓间充质干细胞和新生大鼠心肌细胞,制作骨髓间充质干细胞条件培养液以及过氧化氢损伤新生大鼠心肌细胞模型,实验分为4组:对照组、模型组、骨髓间充质干细胞条件培养液组以及骨髓间充质干细胞条件培养液+PI3K抑制剂处理组。以ELISA检测乳酸脱氢酶活性和流式细胞术检测细胞凋亡率来评估新生大鼠心肌细胞损伤程度。结果与结论:模型组乳酸脱氢酶活性明显高于其余各组(P<0.01),同时骨髓间充质干细胞条件培养液+抑制剂组也高于骨髓间充质干细胞条件培养液组(P<0.01);骨髓间充质干细胞条件培养液组细胞凋亡率低于与骨髓间充质干细胞条件培养液+抑制剂组(P<0.01),并且都低于与模型组(P<0.01)。证明了骨髓间充质干细胞条件培养液抑制了过氧化氢诱导的新生大鼠心肌细胞凋亡,该作用部分是通过PI3K途径发挥的。  相似文献   
7.
在血液病的治疗方面,骨髓造血干细胞的作用早已得到公识。目前,在许多国家间充质干细胞已经被批准进入多个临床试验,用于治疗移植物抗宿主病、克罗恩氏病、肝脏纤维化和骨关节损伤等多种疾病。然而,有关体内间充质干细胞的本质、体外培养后间充质干细胞的特性变化、细胞移植后在体内的分布、间充质干细胞治疗的作用机制及其临床应用的安全性等诸多根本性的问题,必须在间充质干细胞被广泛应用之前得以明确。这里尚有多少个不确定的环节?尚有多少个需要认识的关键性问题?文章结合以上问题,对近几年间充质干细胞的研究进展进行了综述和分析。  相似文献   
8.
目的克隆人HMGBlA—box的cDNA,构建高效稳定的大肠杆菌(E.coli)表达菌株并对其诱导表达纯化.同时探讨其对间充质干细胞(Mesenchymalstemcells,MSC)的促分化作用。方法根据优选合成的HMGBl基因序列设计引物,PCR扩增目的基因片段,插入克隆载体pGEM—T并进行序列测定。重组克隆载体经BamHI和xhoI酶切.琼脂糖凝胶电泳分离目的基冈,插入含His标签的表达载体pET24a。将构建的质粒转染BL21大肠杆菌,经IPTG诱导后.SDS—PAGE观察表达量。HIS—link层析柱纯化重组人HMGBlA—box.蛋白印迹鉴定重组蛋白。将重组蛋白加入hBMSC培养体系中培养一周后,碱性磷酸酶染色检测其促MSC成骨分化作用。结果经RT—PCR扩增得到了261bD的DNA片段,经测序分析.与GenBank中报道的已知序列完全一致,构建了含融合蛋白的重组表达质粒。经诱导后细菌高表达A—boX,表达量为总蛋白的45%。经层析柱纯化后,蛋白印迹证实目的蛋白为高纯度的A—box。将A—box加入MSC培养体系中培养后,细胞活性无明显改变.但细胞碱性磷酸酶表达明显增高。结论成功构建了重组人HMGBlA—Box的表达载体.纯化的重组蛋白能有效促进MSC向成骨细胞分化。  相似文献   
9.
本研究旨在探讨人骨髓间充质干细胞(hBMMSC)对受γ射线照射小鼠造血恢复的影响。亚致死剂量(6Gy)60Co-γ射线全身照射雌性BALb/c小鼠,静脉输注不同剂量(1×105,1×106和5×106)的hBMMSC,观察注射后小鼠血常规指标、骨髓造血祖细胞集落量以及血清人TPO,SCF和G-CSF水平等动态变化。结果表明:hBMMSC输注对亚致死量照射小鼠早期死亡率无影响;与对照组比较,接受细胞治疗小鼠早期血象水平无显著增高,但在第28天外周血白细胞、红细胞、血小板计数和血红蛋白水平高于对照组,尤以大剂量组明显(P值均小于0.05);在中剂量和大剂量hBMMSC组小鼠骨髓中,单个核细胞集落形成单位总数和粒单系集落形成单位数均高于对照组(P<0.05);hBMMSC输注后第2天,ELISA法检测可在细胞治疗组小鼠血清中检测到人G-CSF和SCF,以hBMMSC高剂量组G-CSF含量为最高(P<0.01)。所有各组未检测到人TPO,治疗后第9和16天所有各组血清中均未检测到人G-CSF和SCF。结论:hBMMSC输注可加速放射损伤小鼠造血功能的恢复,其机制可能与细胞短暂分泌相关造血细胞调控因子有关。  相似文献   
10.
以17β-雌二醇为阳性对照组,观察不同浓度淫羊藿次甙Ⅱ对成骨细胞护骨素(OPG)表达的影响,结果发现20.ng/dl淫羊藿次甙Ⅱ上调成骨细胞OPGmRNA的表达,且优于阳性对照组(P<0.05),淫羊藿次甙Ⅱ也显著增加成骨细胞OPG分泌水平,20 ng/dl淫羊藿次甙Ⅱ组的促分泌活性显著优于阳性对照组,提示淫羊藿次甙Ⅱ作为淫羊藿甙在体内的主要代谢产物,在体外较低剂量即可显著促进成骨细胞OPG的表达,具有良好的抗骨质疏松作用.  相似文献   
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