当归补血汤含药血清体外诱导耳蜗干细胞的增殖分化

目的：观察当归补血汤对耳蜗干细胞体外诱导分化的影响,并探讨浓度对其的影响。方法：分离新生大鼠Corti器的耳蜗干细胞进行细胞培养,在相差显微镜下观察细胞形态及生长状况,用Nestin免疫荧光法进行耳蜗干细胞鉴定。采用不同剂量当归补血汤进行诱导分化后,采用MyosinⅦA、P27~(KIP1)免疫荧光方法,鉴定内耳毛细胞和支持细胞,并进行细胞计数。结果：当归补血汤细胞诱导分化的内耳毛细胞和内耳支持细胞数量明显较对照组多,其中剂量为0．5 g/ml组向内耳毛细胞的分化比例最高。结论：当归补血汤可以提高耳蜗干细胞体外分化为内耳毛细胞和支持细胞的数量。其中剂量0．5 g/ml组向内耳毛细胞的分化数量较高。     

耳蜗前体细胞体外培养和诱导分化的实验研究

目的通过体外定向诱导耳蜗前体细胞分化，明确耳蜗前体细胞的位置取材，来源及增殖分化特性．建立完善的耳蜗前体细胞的培养体系。方法取耳蜗的Corti器位置，利用无血清培养和单细胞克隆技术，进行细胞培养，在相差显微镜下观察细胞形态及生长状况，并用神经巢蛋白（nestin）、溴脱氧尿嘧啶（Brdu）、MyosinⅦA、P27^KIP1等免疫荧光方法。鉴定耳蜗前体细胞和由耳蜗前体细胞分化而来的内耳毛细胞和内耳支持细胞。同时进行细胞计数。结果从新生大鼠耳蜗分离的组织．经原代和传代培养后，可获得大量未分化，悬浮生长的Nestin阳性细胞团，并具有增殖的能力，诱导分化后的细胞经免疫荧光双标实验可表达Brdu、MyosinⅦA和P27^KIP1阳性。流式细胞仪细胞计数后，发现前体细胞向内耳毛细胞诱导分化的数量较少，向支持细胞分化的较多。结论从新生大鼠耳蜗分离的细胞是具有自我更新和分化潜能的前体细胞，可诱导分化为内耳毛细胞和内耳支持细胞。     

丹参注射液促帕金森病移植神经元存活的实验研究

目的　研究丹参注射液对帕金森病移植神经元的促存活作用。方法　用神经毒剂 6羟基多巴胺 ( 6 OHDA)单侧损毁SD大鼠左侧中脑被盖腹侧区 (VTA)和黑质致密部 (SNC)建立动物模型。实验分胚鼠腹侧中脑组织 (VM)移植组、丹参注射液干预组和空白对照组。采用原位末端标记法 (TUNEL)结合流式细胞术及免疫组化方法 ,对 3组移植神经元凋亡和存活情况进行定量分析 ,观察丹参注射液对帕金森病移植神经元的促存活作用。结果　根据TUNEL、酪氨酸羟化酶 (TH)染色和流式细胞仪检测结果 ,丹参注射液干预组较VM移植组移植神经元凋亡率降低 ,凋亡细胞数减少 ,纹状体移植针道和针道周围都可见大量THir阳性细胞 ,而且THir阳性神经元数量明显增多。结论　丹参注射液对帕金森病移植神经元具有促存活作用。     

蒺藜皂苷诱导SD新生大鼠海马神经干细胞分化的实验研究

目的 探讨蒺藜皂苷对于诱导SD新生大鼠海马神经干细胞(neural stem cells, NSCs)分化的影响作用以及蒺藜皂苷培养液浓度变化对其的影响.方法 采用无血清和单克隆培养方法,将蒺藜皂苷加入离体的海马NSCs的培养液中,应用Nestin、BrdU、NF200、GFAP免疫荧光染色观察NSCs的形态及分化而来的神经元、神经胶质细胞形态,并检测由海马NSCs分化而来的细胞的数量.结果 海马NSCs在无血清培养下,可形成Nestin阳性细胞球.在诱导分化后,免疫荧光染色可见NF阳性细胞、GFAP阳性细胞,而其中20 mg/kg 蒺藜皂苷干预组海马NSCs向神经元的分化比例最高.结论 在蒺藜皂苷的作用下,海马NSCs向神经元分化的数量增多.     

老年糖尿病病人的社区健康教育

对社区32例2型糖尿病老年病人进行评估分析,了解病人对疾病相关知识掌握程度及遵医行为,根据各自特异性进行健康宣教.通过对病人健康指导,病人对糖尿病有了全面的了解和认识,并能较好地控制血糖,降低了并发症的发生,帮助树立正确的健康理念,提高生活质量.     

双根清脑颗粒对血管性痴呆模型大鼠行为学及血清超氧化物岐化酶、丙二醛、一氧化氮、一氧化氮合酶的影响

目的:观察双根清脑颗粒对血管性痴呆(VD)模型大鼠行为学,血清中超氧化物岐化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)的影响,探讨其干预VD的机制。方法:采用栓子注入法制成VD大鼠模型,给予双根清脑颗粒及脑复康ig15d,Morris水迷宫测定大鼠学习记忆能力,检测血清中的SOD,NOS活性及MDA,NO的含量。结果:与模型组比较,双根清脑颗粒组大鼠逃避潜伏期和首次穿越平台的时间明显缩短(P0.05,P0.01),中、低剂量组及脑复康组SOD活性升高,MDA含量降低(P0.05),各用药组SOD/MDA的比值均升高(P0.01)。各用药组血清NO含量降低(P0.05,P0.01),中、低剂量显著降低NOS活性(P0.01)。结论:双根清脑颗粒可显著改善VD模型大鼠的学习记忆能力,提高血清SOD活力、降低血清MDA,NO的含量及NOS活性。     

影响神经干细胞增殖分化的因素

传统认为哺乳动物和人脑神经细胞一经发育成熟即不再进行增殖、分化 ,不具备再生能力 ,只有细胞的不断退化和死亡 ,因此中枢神经系统损伤后基本上不能恢复。近年来的研究发现 ,胚胎早期脑室和脑室下区、成年脑室区、纹状体、海马齿状回、脊髓等部位神经干细胞分布广泛 ,这些神经干细胞可以分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。随着对干细胞研究的深入 ,人们已能利用无血清培养、单克隆技术及免疫荧光化学技术对干细胞进行分离、培养和纯化。深入研究脑发育过程中的神经干细胞的增殖分化机制 ,搞清神经干细胞在成年脑内增殖、分化的影…     

帕金森病大鼠移植神经元存活与白藜芦醇浓度的量效作用

目的:观察经白藜芦醇培养的胚鼠腹侧中脑组织移植至帕金森病大鼠模型脑纹状体神经元的凋亡情况,同时探讨白藜芦醇浓度的影响。方法:实验于2004-03/2006-01在南京中医药大学解剖实验室完成。①用神经毒剂6-羟基多巴胺单侧损毁SD大鼠左侧中脑被盖腹侧区和黑质致密部建立帕金森病动物模型。②实验分为白藜芦醇培养组和对照组。白藜芦醇培养组又分为3个亚组:20,40,60mg/L组,每组各9只,分别将胚鼠腹侧中脑组织预置于20,40,60mg/L白藜芦醇培养液中;对照组9只,将腹侧中脑组织预置于DMEM营养液中。③预置12h后移植至大鼠左侧纹状体尾壳核头部。④于移植后5,10,15d将动物处死,采用原位末端标记法结合流式细胞术及免疫组织化学方法对移植神经元凋亡和存活情况进行定量分析。结果:①脑纹状体组织观察酪氨酸羟化酶免疫组织化学结果:白藜芦醇培养组和对照组纹状体移植针道和针道周围都可见大量酪氨酸羟化酶阳性细胞;细胞计数显示白藜芦醇培养组的酪氨酸羟化酶阳性细胞数量较对照组多(P<0.01);白藜芦醇培养组中,40mg/L白藜芦醇组中的存活的酪氨酸羟化酶阳性细胞数量较20mg/L组和60mg/L组多([5d:(4804.77±427.37)比(3069.89±148.95),(3038.20±118.95)个/200倍视野;10d:(4608.97±274.64)比(2850.83±48.06),(2875.92±210.54)个/200倍视野;15d:(4217.42±325.93)比(2623.39±350.68),(2568.39±49.67)个/200倍视野;P<0.01]。②脑纹状体组织观察原位末端标记法结果:白藜芦醇培养组较对照组移植神经元凋亡细胞数减少;白藜芦醇培养组中,40mg/L白藜芦醇组中的凋亡细胞数量少于其他两组(P<0.01)。③脑纹状体组织流式细胞仪检测结果:白藜芦醇培养组较对照组移植神经元凋亡率降低。结论:白藜芦醇具有促移植神经元存活作用,作用效果与培养液中白藜芦醇含量有关。     

丹参注射液促帕金森病移植神经元存活的实验研究

目的 研究丹参注射液对帕金森病移植神经元的促存活作用。方法 用神经毒剂6羟基多巴胺(6-OHDA)单侧损毁SD大鼠左侧中脑被盖腹侧区(VTA)和黑质致密部(SNC)建立动物模型。实验分胚鼠腹侧中脑组织(VM)移植组、丹参注射液干预组和空白对照组。采用原位末端标记法(TUNEL)结合流式细胞术及免疫组化方法，对3组移植神经元凋亡和存活情况进行定量分析，观察丹参注射液对帕金森病移植神经元的促存活作用。结果 根据TUNEL、酪氨酸羟化酶(TH)染色和流式细胞仪检测结果，丹参注射液干预组较VM移植组移植神经元凋亡率降低，凋亡细胞数减少，纹状体移植针道和针道周围都可见大量THir阳性细胞，而且，THir阳性神经元数量明显增多。结论 丹参注射液对帕金森病移植神经元具有促存活作用。