间歇性低氧诱导人脐静脉内皮细胞损伤机制研究

目的 建立人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的间歇性低氧（IH）模型,探讨IH损伤血管内皮细胞的机制。方法 通过低氧气体循环灌注低氧舱,建立HUVECs的IH模型。实验分为正常对照组（CON）,间歇性低氧（IH）2、4、6、8、10、12、14、16次循环组,IH+P38 MAPK阻断剂组（INH）以及持续性缺氧组（SH）。采用定量PCR技术（QPCR）检测细胞间黏附因子（intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1）、E选择素（E-selectin）、白介素1（interleukin -1, IL-1）、白介素6（interleukin -6,IL-6）、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor α,TNF-α）基因表达量;Western blot法检测P38 MAPK /NF-κB通路关键靶标蛋白表达量;细胞免疫荧光技术观察NF-κB P65核移位变化,同时检测细胞黏附功能。结果 （1） 与CON组比较,IH刺激下炎性反应相关因子IL-1、IL-6、TNF-α基因表达量升高（P<0.05）。（2） 与CON组比较,IH组HUVECs的p-P38 MAPK蛋白表达水平升高,NF-κB通路靶标蛋白p-IκB、NF-κB P65核蛋白表达水平均升高,而INH组变化不明显。IH组的NF-κB P65出现核移位变化。（3） 细胞黏附实验结果显示IH组人单核细胞系（human acute monocytic leukemia cell line,THP-1）与HUVECs的黏附能力较CON组增强（P<0.05）。结论 IH能够体外诱发HUVECs炎性反应,其机制与激活P38 MAPK/NF-κB信号通路相关。     

益气活血中药配伍对间歇性低氧复合胰岛素抵抗细胞模型SREBP-1c/FAS信号通路的干预效应＊

目的 研究益气活血中药单体人参皂苷Re联合川芎嗪（TMP）对间歇性低氧（IH）复合胰岛素抵抗（IR）的3T3-L1脂肪细胞模型的干预效应，并观察SREBP-1c/FAS信号通路在其中的作用。方法 实验采用IH复合IR的3T3-L1脂肪细胞模型，分别以人参皂苷Re及TMP作为干预药物，首先进行中药最优配伍浓度体外筛选，然后选择最优配伍浓度作为干预剂量，观察其对模型细胞SREBP-1c/FAS信号通路的干预效应。结果 人参皂苷Re 1 μmol·L-1联合TMP 10 μmol·L-1时，对IH条件下SREBP-1c、FAS mRNA表达水平抑制最明显。该单体配伍及Betulin能抑制IH引起的SREBP-1蛋白表达水平上调，升高IH条件下IRS-1、SOD mRNA表达水平，降低IH条件下HIF-1α mRNA表达水平。结论 人参皂苷Re与TMP体外联合作用能抑制IH对IR-3T3-L1细胞SREBP-1c/FAS通路表达水平的上调作用，且有一定的改善IR、氧化应激的效应。     

松龄血脉康对慢性间歇性低氧介导的高血压小鼠血管内皮损伤的保护作用机制研究

目的 探讨松龄血脉康对慢性间歇性低氧（CIH）介导的高血压及相关血管内皮损伤小鼠的干预效应和p38丝裂原活化蛋白激酶/核因子-κB9（p38MAPK/NF-κB）信号通路的作用。方法 按照随机数字表法将小鼠分为6组:正常组、模型组、西药对照组和低、中、高3个剂量实验组,每组10只。给药后,正常组除外的5组均予低氧动物培养箱进行CIH处理15 d;正常组、模型组予生理盐水,西药对照组灌胃予氨氯地平0.74μg·kg^-1·d^-1,低、中、高3个剂量实验组分别灌胃予松龄血脉康5.85,11.70,23.40 mg·kg^-1·d^-1。检测小鼠血压,用实时荧光定量-PCR法和蛋白质印迹法检测p38MAPK/NF-κB信号通路相关基因及与蛋白表达水平。结果 正常组、模型组、西药对照组和高剂量实验组血压分别为（123.21±4.45）,（143.51±3.06）,（119.85±3.55）,（126.71±4.65） mm Hg;这4组的磷酸化P38丝裂原活化蛋白激酶（p-p38MAPK）蛋白表达水平分别为0.4...     

补肾清肝中药配伍对间歇性低氧诱导人脐静脉内皮细胞损伤模型p38MAPK/NF-κB信号通路的干预效应研究

研究补肾清肝中药配伍对间歇性低氧致人脐静脉内皮细胞损伤模型p38MAPK/NF-κB信号通路的干预效应。实验采用改良的间歇性低氧诱导人脐静脉内皮细胞建立体外细胞损伤模型,以补肾清肝中药有效成分配伍(异钩藤碱、桃叶珊瑚苷及川芎嗪)作为干预药物,首先进行中药最优配伍浓度体外筛选,然后选择最优配伍浓度作为干预剂量,观察其对模型p38MAPK/NF-κB信号通路的干预效应。结果显示异钩藤碱、桃叶珊瑚苷及川芎嗪在0.01 mg·L~(-1)时具有最佳的体外抗炎效应。间歇性低氧组NF-κB p65入核量及p-IκB较对照组与其他各组均显著增加,同时免疫荧光染色NF-κB p65可见间歇性低氧组出现明显NF-κB p65核移位表现,内皮细胞黏附程度明显增加;与间歇性低氧组相比,p38MAPK抑制剂组及补肾清肝中药配伍组p-p38MAPK,NF-κB p65入核量及p-IκB表达量均明显较少,内皮细胞黏附明显被抑制。该研究表明,补肾清肝中药最优浓度配伍通过将抑制p38MAPK的磷酸化作为起始,继而阻断了NF-κB的核移位行为,抑制其转录功能,实现对间歇性低氧诱导血管内皮细胞损伤模型的保护效应。