稀土元素镧、铈对铁皮石斛组培苗生长影响的研究

目的 探讨添加稀土元素镧、铈对铁皮石斛组培苗以及移栽后铁皮石斛苗的生长的影响,寻找能显著促进铁皮石斛生长发育的稀土元素,以获得品质优良的铁皮石斛苗.方法 以铁皮石斛小苗为外植体,通过添加不同浓度硝酸镧、硝酸铈的培养基上进行培养,并对其性状特征、生理活性、移栽后生长状况等进行统计比较研究.结果 通过90 d的培养后,添加稀土元素组别的铁皮石斛的鲜质量、根数、株高、叶绿素含量均高于空白组,分蘖数低于空白组,而且随着硝酸镧和硝酸铈浓度的增高,铁皮石斛组培苗的鲜质量、株高、根数、叶绿素含量基本呈递增的趋势,分蘖数呈递减的趋势,硝酸铈浓度为40 mg/L时,其鲜质量、根数、株高最大,分蘖数最少;铁皮石斛移栽培养30 d后,稀土元素组比空白组中的存活率和抽芽率高,硝酸铈为40 mg/L时其生长情况最佳;一定浓度的稀土元素La 、Ce能增强铁皮石斛组培苗的T-SOD酶、CAT酶活性和根系活力,添加10.0～40.0 mg/L La3+,SOD酶活性和CAT酶活性均呈现先增后降的趋势;添加10.0～40.0 mg/L Ce3+,SOD酶活性逐渐增强,但CAT酶活性在Ce3+10～ 30.0 mg/L时逐渐增强,40.0 mg/L时又稍下降;添加10.0～40.0 mg/L La3+,根系活力呈先增后降的趋势,10～ 30.0mg/L时根系活力逐渐上升,40.0 mg/L时略有下降;添加10.0～40.0 mg/L Ce3+,根系活力逐渐上升,40.0mg/L时最高.结论 稀土元素镧、铈对铁皮石斛组培苗的生长及T-SOD酶、CAT酶活性和根系活力均有较显著的影响,本文结果为铁皮石斛组培苗的壮苗以及品质的提高提供了依据.     

HPLC法同时测定不同来源溪黄草药材中8个水溶性成分的含量

目的:建立同时测定不同品种溪黄草中咖啡酸、新西兰牡荆苷2、新西兰牡荆苷3、异夏佛塔苷、夏佛塔苷、牡荆苷、芹菜素-6,8-二-C-α-L-吡喃阿拉伯糖苷和芦丁含量的高效液相色谱法,并比较评价溪黄草各品种药材质量。方法:采用Phenomenex luna C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-0.5%甲酸水溶液梯度洗脱,流速0.8 m L·min-1,检测波长334 nm;柱温为室温(25℃)。结果:咖啡酸、新西兰牡荆苷2、新西兰牡荆苷3、异夏佛塔苷、夏佛塔苷、牡荆苷、芹菜素-6,8-二-C-α-L-吡喃阿拉伯糖苷和芦丁线性范围分别为0.09~2.28、0.13~3.11、0.06~1.38、0.18~4.54、0.08~1.97、0.07~1.71、0.06~1.49、0.05~1.31μg;平均回收率(n=6)分别为99.7%、99.5%、100.1%、99.0%、98.4%、98.4%、101.8%、99.4%,RSD分别为0.86%、1.8%、1.8%、1.7%、2.0%、1.2%、1.2%、1.4%。狭基线纹香茶菜中咖啡酸、新西兰牡荆苷2、新西兰牡荆苷3、异夏佛塔苷、夏佛塔苷、牡荆苷、芹菜素-6,8-二-C-α-L-吡喃阿拉伯糖苷和芦丁8个水溶性成分含量分别为0.63~0.33、0.88~6.20、0.44~2.41、2.37~11.19、0.75~5.53、0.76~1.83、0.45~1.78、0.00~2.45 mg·g-1,纤花线纹香茶菜中上述8个水溶性成分含量分别为0.86~3.12、0.76~6.35、0.53~1.47、2.44~11.1、1.96~5.29、0.00~1.82、0.90~5.82、0.00~2.34 mg·g-1,线纹香茶菜中上述8个水溶性成分含量分别为0.61~2.17、0.77~1.56、0.47~1.82、1.97~6.48、1.69~6.72、0.00~0.56、0.00~3.30、0.00~0.84 mg·g-1,溪黄草中上述8个水溶性成分含量分别为0.62~1.33、0.00~0.94、0.44~1.33、0.00~2.13、0.18~1.81、0.00~0.50、0.00~1.11、0.00~0.22 mg·g-1。结论:本研究所建立的方法能鉴别不同来源的溪黄草药材,可用于溪黄草药材的质量控制。     

基于ND2基因序列的燕窝DNA条形码鉴别

目的:利用DNA条形码鉴定技术,快速、准确地鉴别不同种类及产地的燕窝,为该药材的质量评价提供参考。方法:提取不同产地及品种燕窝的DNA,对烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)脱氧酶亚单位2(ND2)部分序列进行扩增和测序,利用软件MEGA6.0进行序列比对,分析变异位点,计算Kimura-2参数遗传距离,构建邻接(neighbor-joining,NJ)系统发育树。结果:NJ系统发育树显示31个官燕窝样品均与爪哇金丝燕Aerodramus fuciphagus聚为1支;1个毛燕窝样品与大金丝燕A.maximus聚为1支。但官燕窝中经细胞色素b(Cytb)鉴定生物基原为爪哇金丝燕亚种(淡腰金丝燕A.fuciphagus germani)的8个样品单独聚为1支,支持率82%,并在该段ND2序列表现为2个位点的差异,表明该段ND2序列可鉴别爪哇金丝燕的亚种。结论:ND2条形码可用于快速、准确地鉴别燕窝的生物基原。     

众生丸对H1N1流感小鼠的保护及免疫调节作用研究

目的研究众生丸对H1N1流感病毒感染小鼠的保护及免疫调节作用。方法以奥司他韦为阳性药,H1N1流感病毒滴鼻感染小鼠复制小鼠病毒性肺炎模型。比较小鼠病毒性肺炎模型的肺指数、肺组织形态学、死亡保护率、小鼠T淋巴细胞亚群和细胞因子干扰素-γ(Interferon-γ,IFN-γ)、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)的数量变化。结果与病毒对照组比较,众生丸可显著降低H1N1感染小鼠的肺指数,提高存活率,调节T细胞亚群含量,促进血清中IFN-γ和IL-10产生。结论众生丸可通过减轻炎症,调节免疫而减轻H1N1亚型流感病毒所致小鼠肺部病变,提高染毒小鼠存活率。     

32种不同产地与品种商品燕窝的DNA基源鉴定

目的：利用DNA条形码鉴定技术,快速、准确地鉴别不同种类及产地的商品燕窝,揭示其不同基源的物种差异。方法：采用试剂盒提取基因组DNA,利用PCR技术扩增Cytb序列,应用DNAStar软件进行校对拼接,采用MEGA 6.0软件对32份样品的条形码序列进行比对,构建邻接树（Neighbor-Joining tree,NJ）,并进行遗传距离分析。结果：实验所用的Cytb条形码可鉴别出燕窝的物种及亚种;收集的32个商品燕窝中,23个官燕窝的基源为爪哇金丝燕Aerodramus fuciphagus,8个官燕窝的基源为其亚种淡腰金丝燕Aerodramus fuciphagus germani,而1个毛燕窝的基源为大金丝燕Aerodramus maximus或其亚种Aerodramus maximus lowi。结论：不同来源的商品燕窝基源差异较大,利用Cytb条形码可快速、准确鉴别出燕窝基源。     

岗梅总皂苷含量测定方法建立及不同部位含量比较研究

目的:考察岗梅中皂苷的提取方法并建立不同部位中总皂苷的含量测定方法。方法:采用分光光度法测定和比较不同提取方法及不同部位中得到的总皂苷含量。以18-去氢乌苏酸为对照品,香草醛、冰醋酸和高氯酸为显色剂,在555 nm波长处测定其吸光度。结果:采用50%乙醇、回流1.5 h的方法提取较完全。18-去氢乌苏酸在20.3~121.8 ug/m L质量浓度范围内线性关系良好,回归方程Y=0.0083X-0.02,r=0.9996,平均加样回收率为98.28%,RSD%为1.92%(n=6),岗梅根、茎、叶中总皂苷的含量分别为3.93%、3.31%、3.38%。结论:分光光度法简便,准确,重现性好,可用于岗梅总皂苷的含量测定。岗梅根、茎、叶中均含有一定量的皂苷。     

不同生长期穿心莲叶中6种同工酶分析

目的:研究不同生长期穿心莲叶中6种同工酶的酶谱变化规律,为探讨同工酶与穿心莲次生代谢产物形成之间的关系奠定基础。方法:以不同生长时期的穿心莲顶端全展叶为供试材料,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)法得到穿心莲叶过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)、多酚氧化酶(PPO)、过氧化氢酶(CAT)、细胞色素氧化酶(CYT)及酯酶(EST)同工酶的电泳酶谱,对不同生长期穿心莲叶中上述6种同工酶图谱进行比较分析。结果:不同生长期穿心莲叶中6种同工酶的酶带亮度(酶活性)均随着生长时期的不同显示出明显差别,且均具有各自的主要特征酶带。POD、CYT和PPO同工酶酶谱在质(酶带数)和量(酶活性)上均表现出不同程度的差异,其酶活性在花果期显著增强,其中POD受物候期的影响最为显著;EST同工酶的酶活性也在花果期明显提高;CAT和SOD同工酶在穿心莲生长过程中相对稳定。结论:POD、EST、PPO以及CYT同工酶酶谱的变化可以明显反映不同生长期穿心莲的生长发育特异性,尤其是POD可以作为观察穿心莲生长变化以及深入研究次生代谢产物生成的一种生理指标。     

EMS诱变广金钱草突变体库的构建

目的:利用甲基磺酸乙酯(EMS)溶液诱变处理广金钱草种子,对M_1和M_2代群体单株在茎、叶、分枝等表型变异进行观察记录,并鉴定和筛选突变体。方法:以广金钱草种子为材料,用不同EMS浓度的磷酸缓冲液(0%,0.5%,0.6%,0.7%,0.8%)分别处理广金钱草种子4、8、12 h,使其发生诱变,得到半致死剂量和处理时间,再用该半致死剂量和处理时间创建突变材料,观察并统计诱变后植株表型性状的变异。结果:EMS诱变广金钱草种子的半致死剂量浓度为0.6%,处理时间为4 h。初步鉴定了M_1代658个单株和M_2代1 131个单株的形态学性状,共获得759份发生一个到多个性状变异的突变株,主要包括叶、株高、分枝数、株型以及其他性状变异。结论:初步构建了EMS诱变广金钱草突变体库,得到了对种植生产有利的变异性状,为优良品种选育提供了基本材料。     

众生丸生产过程影响因素探讨(二)

目的:探讨众生丸提取工艺过程中所存在的问题及解决方法.方法:采用HPLC测定众生丸提取工艺过程中咖啡酸、芍药苷、虎杖苷、黄芩苷的提取率,分析众生丸生产过程中提取工艺的影响因素.结果:黄芩、虎杖、赤芍等致密结构的根茎类药材应做必要的前处理,同时采用沸水投料是保证苷类成分提取率的重要条件.结论:研究结果中为众生丸大生产推广提供参考.     

ITS2序列对牛樟等樟属植物鉴定评估及聚类分析研究

目的:应用ITS2序列及其二级结构对牛樟等樟属植物进行鉴定效率评估及聚类分析研究,以期发现与牛樟亲缘关系较近的物种。方法:比较DNA提取试剂盒和改良CTAB法对牛樟等样品总DNA的提取效果;应用Bio Edit v7.0.9.0与MEGA 6.0软件将以ITS2序列进行PCR扩增的目的序列与Gen Bank中同源性较高的同属序列构建系统进化树,并应用ITS2数据库网站预测其二级结构。结果:改良CTAB法提取的DNA纯度比试剂盒稍低,但浓度较高;针对本研究中16个樟属样品,ITS2对其鉴定成功率为62.5%;基于ITS2序列的种间亲缘关系中最接近牛樟的树种为细毛樟。结论:ITS2序列作为植物鉴定条形码之一,对樟属植物鉴别率略低,可见其通用性有待考证;在对于樟属植物的聚类分析研究中,ITS2序列可结合其二级结构构型,为樟属种间遗传关系和亲缘关系鉴定提供参考。