气相色谱质谱联用仪定量检测内源性大麻素花生四烯乙醇胺及2-花生四烯酸甘油在胆道恶性肿瘤中的表达规律

目的探讨两种主要的内源性大麻素花生四烯乙醇胺（AEA）及2-花生四烯酸甘油（2-AG）在胆道恶性肿瘤（BTC）患者体液及肿瘤组织中的表达规律。 方法采集中山大学附属第一医院2013年12月至2014年9月收治的22例BTC患者及8例良性胆道疾病患者的外周血及胆汁，其中15例BTC患者同时收集癌巢组织及癌旁正常组织，利用氯仿/甲醇抽提法配合固相萃取，分离患者体液及组织样本中的脂质，以二甲基异丙基硅烷-咪唑对脂质进行硅烷化处理，气相色谱质谱联用仪测定AEA及2-AG的浓度。 结果与良性胆道疾病患者相比，BTC患者血浆中2-AG显著升高[180.01（140.72~283.84）nmol/L vs 42.33（25.61~148.93）nmol/L，P<0.05]，AEA浓度降低但差异无统计学意义；胆汁中AEA浓度显著降低[1.80（0.50~5.00）nmol/L vs 10.15（2.68~17.49）nmol/L，P<0.05]，2-AG浓度升高但差异无统计学意义。BTC癌巢组织与癌旁正常组织相比，AEA浓度显著降低[22.01（16.55~53.61）pmol/g vs 58.68（25.36~68.97）pmol/g，P<0.05]，2-AG显著升高[1.97（1.44~5.43）nmol/g vs 1.10（0.36~1.47）nmol/g，P<0.05]。 结论本研究建立了在BTC中定量检测AEA和2-AG两种内源性大麻素浓度的有效方法，测定AEA及2-AG在BTC患者体液及肿瘤组织中的异常表达，可作为BTC的辅助诊断。     

尼美舒利人体血药浓度的RP-HPLC测定

报道了尼美舒利人体血药浓度的ＲＰ－ＨＰＬＣ测定法。采用Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＢＤＳ Ｃ１８不锈钢色谱柱，血浆样品经乙酸乙酯抽提处理后测定。方法线性范围０．２０～２５ｍｇ／Ｌ（ｒ＝０．９９９９），平均回收率为９２．３％～９９．４％，最低检测浓度为６０ｕｇ／Ｌ。     

震颤宁治疗帕金森病的实验研究

[目的]探讨中药襄颤宁治疗帕金森氏病(PD)的药效机理。[方法]采用6-羟多巴胺(6-OHDA)纹状体两点注射法复制PD模型,观察震颤宁对大鼠旋转行为、纹状体及血液中多巴胺(DA)和高香草酸(HVA)、过氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)含量的影响。[结果]高剂量震颤宁可改善PD大鼠旋转行为,使旋转圈数较治疗前减少(P<0.05);提高大鼠全血GSH舍量(P<0.05),使GSH-PX活性显著增高(P<0.01),血清MDA含量显著降低:右侧纹状体GSH含量显著增高(P<0.01),MDA含量显著降低(P<0.01),并可增加纹状体DA含量,降低HVA/DA比值。低剂量震颤宁对PD大鼠旋转行为无明显改善(P>0.05);可降低血清MDA含量(P<0.01),而对GSH-PX活性无明显改善;并可使大鼠纹状体GSH含量增加,而对MDA含量无明显影响,对DA、HVA/DA亦无显著影响。[结论]震颤宁可能通过改善机体及纹状体的氧化应激状态和保护神经元,间接补充纹状体DA含量而改善PD症状,并呈剂量效应关系。     

膳食黑米皮抑制高脂诱导的家兔动脉粥样硬化形成及其机制的初步探讨

目的 探讨膳食黑米皮对高脂诱导的家兔动脉粥样硬化形成的影响及其作用机制。方法 24只雄性新西兰大耳白家兔,按体重随机分为3组,分别饲以正常基础饲料、高脂饲料(含96％基础饲料、0.5％胆固醇、3.5％猪油)、黑米皮饲料(含 91％基础饲料、0.5％胆固醇、3.5％猪油、5％黑米皮),实验期为 60d。用图像分析法测定各组家兔主动脉脂质斑块面积,并分析家兔氧化与抗氧化状态。结果 黑米皮实验家兔的主动脉壁斑块面积较高脂组低66%(P<0.001);黑米皮组实验家兔的主动脉壁8-ohdG含量和血清及主动脉壁中MDA水平也低于高脂组(P<0.05 );而红细胞及主动脉壁中SOD水平和血清α-生育酚含量在两个处理组之间差异无显著性。结论 膳食黑米皮可以抑制高脂诱导的家兔动脉粥样硬化形成,其机制可能与之降低机体氧化应激水平及过氧化脂质生成有关。     

二硫化碳慢性接触对儿茶酚胺类代谢的影响

采用综合累积暴露指数（ＩＣＥ），将工人接触ＣＳ２浓度和接触期限结合起来定量评价暴露强度，并检测尿中２－硫代噻唑烷－４－羧酸（ＴＴＣＡ）和儿茶酚胺类神经递质代谢产物的含量。结果显示：接触组尿中ＴＴＣＡ增高，存在剂量－效应关系；高接触组高香草酸（ＨＶＡ）和香草扁桃酸（ＶＭＡ）排泄减少。这两种儿茶酚胺代谢产物与ＣＳ２浓度及工龄虽未显示有显著意义的相关，但与ＩＣＥ及ＴＴＣＡ之间却呈现统计学上的相关关系，表明长期接触ＣＳ２对儿茶酚胺类神经递质代谢有一定的干扰作用。     

人连接蛋白Connexin26基因的克隆、表达及初步鉴定

目的研究含人连接蛋白Connexin26（Cx26）基因的真核表达载体构建及其在非洲猴肾细胞（COS-7）中获得稳定、高效表达的方法。方法提取人外周血淋巴细胞RNA，经逆转录制备成cDNA，设计特异性引物，用PCR方法从cDNA中扩增Cx26基因，将其定向插入真核表达载体pCI-neo中获得pCI-Cx26重组子-采用酶切法和测序法鉴定。用脂质体将pCI-Cx26转染COS-7细胞，经G418筛选，获得阳性克隆。用RT-PCR和SDS-PAGE检测对表达产物进行检测。结果从人外周血RNA制备而成的cDNA中可扩增出预期大小的Cx26基因片段，pCI-Cx26经双酶切测序证实构建成功。RT-PCR和SDS-PAGE检测到pCI-Cx26在COS-7细胞中获得稳定、高效表达。结论本研究成功构建了人连接蛋白Cx26基因重组真核表达载体pCI-Cx26：pCI-Cx26脂质体转染COS-7细胞，可见Cx26基因在COS-7细胞中获得稳定、高效的表达。该结果为今后进行pCI-Cx26基因治疗Cx26基因突变引起的遗传性耳聋的研究奠定了实验基础。     

大剂量吗丁啉治疗残胃功能性排空障碍8例

胃排空延迟症，也称胃无力症，是腹部手术后少见的早期并发症。胃大部分切除术后残胃功能性排空障碍，据报告发生率为3％-4％。若对本病认识不足，常易误认为吻合口或输出袢机械性梗阻而作不必要的手术探查。本院1992—2005年共发生胃大部分切除术后残胃功能性排空障碍8例，均采用大剂量吗丁啉治疗，效果良好，现报告如下。     

中链甘油三酯干预对2型糖尿病血脂和血浆游离脂肪酸的影响

目的探讨中链甘油三酯(MCT)干预对2型糖尿病(T2DM)患者体重、血脂和血浆游离脂肪酸的影响。方法以长链甘油三酯(LCT)为对照,将所有T2DM患者分为MCT组、MCT/LCT组和LCT组,在控制总能量和脂肪摄入量的基础上,3组分别连续食用100%MCT油、50%MCT油 50%LCT油和100%LCT油12周。在0、6和12周时检测血浆总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、载脂蛋白A1(ApoA1)和载脂蛋白B(ApoB)浓度以及血浆游离脂肪酸浓度。计算体质指数(BMI)、LDL/HDL、ApoA1/ApoB、总游离脂肪酸(TFFA)、长链饱和脂肪酸(LCSFA)和不饱和脂肪酸(USFA)浓度。结果在6和12周时,MCT和MCT/LCT组的体重和BMI均较LCT组低(P<0.05)。在12周时MCT/LCT组的TC水平较LCT组低(P<0.05)。与实验前相比,MCT/LCT组6和12周时的LDL-C水平均显著下降(P<0.05);与6周时相比,MCT组12周时的LDL-C水平显著下降(P<0.05)。12周时LCT组的HDL-C水平较MCT组高(P<0.05)。与MCT组相比,LCT组的LCSFA水平在6周时显著升高(P<0.05)。3组的TFFA和USFA水平差异无显著性。结论在控制总能量和脂肪摄入量的基础上,用MCT取代100%或50%的膳食油脂,患者的BMI和血脂谱得到改善,而血浆游离脂肪酸无明显变化。     

孕妇乳母二十二碳六烯酸摄入水平对母婴脂肪酸状况的影响

目的:追踪观察孕妇、乳母膳食二十二碳六稀酸(DHA)不同摄入水平对母体及婴儿血浆、红细胞膜DHA水平的影响。方法: 选取孕妇146名,在孕妇22 w、孕38 w、产后3月进行膳食调查。同时随机抽取48名及其母乳喂养婴儿出生、3月时用毛细管气相色谱法测定血浆、红细胞中DHA水平。按3次平均膳食DHA摄入量分成三组,A组14例,80 mg/d,B组22例,80～159 mg/d,C组12例,≥160 mg/d。 结果:孕妇、乳母日均DHA摄入量 为103.17±51.43 mg/d。C组母体孕38 w时血浆、红细胞、产后3月时血浆及脐血浆、脐血红细胞、婴儿3月龄时红细胞中DHA水平均显著高于A组。产后3月时A组和B组血浆 DHA水平均显著低于孕22 w时 ,而C组与孕22 w时无显著差异。结论: 摄入DHA<80 mg/d组孕妇、乳母孕38 w时血和婴儿脐血DHA不能达到摄入DHA≥160 mg/d组同等水平。孕妇、乳母DHA摄入在≥160 mg/d时,能遏制产后DHA水平的下降。     

反相高效液相色谱法测定人体血浆中表阿霉素的含量

采用反相高效液相色谱法(以柔红霉素为内标)测定血浆中表阿霉素的含量,流动相为5mmol/L H3PO4-甲醇-异丙醇-乙晴(6∶9∶7∶2,pH2.9),YWG C18不锈钢色谱柱,荧光检测波长:λex=450nm,λem=530nm.血浆中样品经氯仿-甲醇-异丙醇=5∶2∶3抽提液抽提处理后进样测定.血浆中表阿霉素的浓度在0.03～2.4mg/L范围内峰面积与柔红霉素的峰面积之比呈线性关系(r=0.9998),方法对表阿霉素的平均回收率为89%～90.7%.最低检测浓度为0.01mg/L.本法灵敏度高,线性范围大,符合临床用药的血药浓度监测和药代动力学研究的分析方法要求,并用于40例已服用表阿霉素的癌症病人的血浆药物含量的测定.