越鞠甘麦大枣汤增强突触可塑性产生抗抑郁样作用＊

目的 研究越鞠甘麦大枣汤的抗抑郁样作用并分析其对小鼠海马突触可塑性的影响。方法 昆明小鼠随机分为对照组和越鞠甘麦大枣汤组，给药24 h和7 天后进行悬尾测试（Tail suspension test，TST）和强迫游泳测试（Forced swimming test，FST）。运用电生理（electrophysiological experiment）技术检测小鼠海马区Schaffe侧枝-CA1的长时程增强（long term potentiation，LTP），利用western blot方法分析海马脑区α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸受体（α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazole-propionicacid receptor，AMPAR）和N-甲基-d-天冬氨酸受体（N-methyl-D-aspartate receptor， NMDAR）相关突触蛋白的表达水平。结果 给药24 h和7天后，与对照组小鼠相比，越鞠甘麦大枣汤给药组小鼠在TST（P <0.001）和FST（P <0.01）中的不动时间均明显降低，氯胺酮在给药24 h后显示出抗抑郁作用，但到第7天不能降低小鼠不动时间，越鞠甘麦大枣汤显示出更持久的抗抑郁样作用。电生理实验中，越鞠甘麦大枣汤可增强小鼠海马区的LTP（P < 0.001）。Western blot结果显示，GluR1、NR2B以及NR1的表达水平在给药后均明显增加（P < 0.05）。结论 越鞠甘麦大枣汤可能通过增强昆明小鼠海马脑区LTP，以及增加AMPA和NMDA受体相关突触蛋白的表达水平以提高突触传递效能，从而产生抗抑郁样作用。     

中西医临床医学专业分子生物学实验教学实践

分子生物学是中西医临床医学专业学生重要的专业基础课,分子生物学实验课程是分子生物学理论课的配套课程。文章对中西医临床医学专业分子生物学实验课程设置特点及教学过程中存在的问题进行了探讨,并就实验教学总体思路和目标、教学方式和内容、考核评价体系等方面提出一些改革措施,为提高分子生物学实验的教学质量,培养中西医临床医学专业创新型人才提供参考。     

COPD伴抑郁障碍小鼠模型的建立及加味温胆汤的干预作用

目的?建立一种烟熏诱导的小鼠慢性阻塞性肺疾病（COPD）伴抑郁障碍模型,并评价加味温胆汤对COPD伴抑郁障碍小鼠的治疗作用及其机制。方法?将小鼠随机分为正常组与模型组,模型组每天烟熏4次。烟熏满15周后,测试正常组与模型组糖水消耗,观察二者气道和肺组织的病理改变等,在确认COPD伴抑郁障碍小鼠模型成功后,将模型组小鼠随机分为模型组、加味温胆汤高剂量组、加味温胆汤低剂量组及阳性药组,连续给药3周,给药结束后,测试各组小鼠的糖水消耗、悬尾不动时间,检测肺功能,并检测小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中炎症细胞数,观察气道和肺组织病理改变等。结果?与正常组相比,模型组小鼠在烟熏满15周时,体质量下降,糖水消耗比例降低,增强呼吸间歇（Penh）升高。连续给药3周后,与模型组相比,加味温胆汤组小鼠体质量增加,糖水消耗升高,悬尾不动时间减少,说明其抑郁样症状减轻;显著降低模型组小鼠吸气阻力（RI）,升高肺动态顺应性（Cdyn）;显著降低总白细胞数与中性粒细胞数;降低肺泡灌洗液以及海马组织中炎症因子等。结论?用烟熏法所建立的COPD伴抑郁障碍小鼠模型较为符合本病的病程发展及临床特征,中药复方加味温胆汤对COPD伴抑郁障碍小鼠具有疗效,能够改善其病理与功能的改变,其机制可能与降低外周及中枢炎症有关。      

加味补阳还五汤对防治动脉粥样硬化的ApoE-/-小鼠Toll样受体4及其下游主要元件的影响

目的:探究加味补阳还五汤对于载脂蛋白E基因敲除小鼠的Toll样受体4(TLR4)及髓样分化因子88(My D88),肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF-6),核转录因子-κB(NF-κB)表达的影响,讨论加味补阳还五汤对于动脉粥样硬化的防治机制。方法:将30只雄性载脂蛋白E基因敲除小鼠随机分为模型组,阿托伐他汀组,加味补阳还五汤组,每组10只,以10只C57BL/6J小鼠设空白组。除空白组正常饮食饮水外,每组给予高脂饲料喂养8周。空白组及模型组每日给与0.9%Na Cl溶液灌胃,阿托伐他汀组及加为补阳还五汤组每日以相应药物灌胃。第9周后采用生化检测方法检测血清总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),高密度脂蛋白(HDL-C)和低密度脂蛋白(LDL-C)。采用苏木素-伊红(HE)染色方法观察,并测量斑块所占管腔面积之比。以实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测TLR4及My D88,TRAF-6,NF-κB的mRNA表达;蛋白质印迹(Western blot)法测定其蛋白表达的变化。结果:血脂水平方面,与模型组比较加味补阳还五汤组与阿托伐他汀组均能降低载脂蛋白E基因敲除小鼠TC,TG,HDL-C,LDL-C水平,同时升高HDL-C水平(P0.01);镜下观察加味补阳还五汤组与阿托伐他汀组均能较模型组斑块有所减少,主动脉血管细胞排列较整齐,炎性细胞浸润减轻,小鼠的主动脉斑块在血管的占比均有不同程度地降低(P0.01)。mRNA与蛋白水平上与模型组比较加味补阳还五汤与阿托伐他汀组均能有效降低TLR4及My D88,TRAF-6,NF-κB mRNA与蛋白的表达(P0.05,P0.01)。结论:加味补阳还五汤对于AS的发生发展有预防作用,其机制可能与抑制TLR4及其下游信号转导通路主要元件有关。     

越鞠丸快速改善帕金森病抑郁的机制研究

目的：本文主要研究越鞠丸快速改善帕金森病抑郁（Depression of Parkinson’s Disease,DPD）的机制。方法：参照文献DPD亚急性造模方法,通过抑郁行为学方法如开场实验（Open Field Test,OFT）、悬尾实验（Tail Suspension Test,TST）、强迫游泳实验（Forced Swimming Test,FST）和糖水偏好实验（Sucrose Preference Test,SPT）评价越鞠丸快速起效抗抑郁的作用;同时运用PC12细胞株进行离体实验,在细胞水平基于环磷腺苷效应元件结合蛋白（cAMP Response Element Binding Protein,CREB）信号通路,探讨越鞠丸对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶离子（MPP⁺）引起神经元损伤的保护作用。结果：DPD模型小鼠在TST、FST行为测试中,不动时间较正常小鼠明显延长（P<0.01）,SPT比率明显下降（P<0.01）。越鞠丸能够减少DPD模型小鼠FST的不动时间（P<0.05）,提高SPT比率（P<0.01）,起效时间为单次给药后的第3天;MPP⁺处理的PC12细胞CREB磷酸化水平降低,与模型组比较,越鞠丸可以提高磷酸化CREB表达（P<0.01）。结论：越鞠丸能够快速改DPD,其作用机制与激活CREB信号、保护神经元有关。     

越鞠丸石油醚部位潜在的快速抗抑郁作用与BDNF、TrkB蛋白表达的上调相关北大核心CSCD

目的研究越鞠丸石油醚部位是否具有快速抗抑郁潜力,并对其有效剂量及潜在的生物学机制进行了探讨。方法将44只昆明种♂小鼠随机分成空白组(生理盐水组)、越鞠丸石油醚部位(YJ-PE)高、中、低剂量组及氯胺酮组。单次给药后30 min对昆明小鼠进行小鼠悬尾行为绝望测试。再将24只昆明种♂小鼠分成空白组、筛选出有效的越鞠丸石油醚部位低剂量组和氯胺酮组,单次给药24 h后进行小鼠悬尾行为绝望测试。利用Western blot实验分别检测给药后30 min及24 h小鼠海马区BDNF和TrkB蛋白的表达变化。结果单次给药越鞠丸石油醚部位从30 min到24 h均能对其小鼠悬尾的行为绝望行为产生抗抑郁作用。给予越鞠丸石油醚部位30 min后小鼠海马中的BDNF及其受体TrkB的表达明显上调,且这种抗抑郁的作用机制可持续到24 h。结论越鞠丸石油醚部位(低剂量)具有快速抗抑郁的药物潜力,且这种潜在的快速抗抑郁作用与BDNF及其受体TrkB的激活相关。     

越鞠丸对小鼠海马组织中NO-cGMP信号通路的影响

目的探讨越鞠丸对小鼠海马组织中一氧化氮-环磷酸鸟苷（Nitricoxide-cyclic guanosine monophosphate，NO-cGMP）信号通路的作用影响。方法单次给予越鞠丸，分别于给药12 min，24 min，30 min，3 h，24 h后，取海马组织，酶联免疫吸附法（Enzyme Linked Immunosorbent Assay，ELISA）测定各组中NO和cGMP浓度。另外，小鼠随机分组如下：空白对照组（con），L-arg组（L-arg），越鞠丸组（YJ），L-arg+越鞠丸组（L-arg+ YJ），给药30 min后进行悬尾测试（Tail Suspension Test，TST）。结果显示给予越鞠丸12 min后，NO浓度显著低于对照组（P < 0.05），而cGMP浓度也显著低于对照组（P < 0.05）。悬尾测试显示，YJ组与空白对照组相比明显减少了小鼠的不动时间（P < 0.01），而L-arg+YJ组与YJ组相比明显增加了小鼠的不动时间（P < 0.01）。结论越鞠丸通过调节NO浓度，进而调控下游cGMP浓度，激活了胞内NO-cGMP信号通路，从而起到快速抗抑郁作用。     

环孢菌素A合成酶及其遗传改造研究进展

环孢菌素A是从真菌中提取的一种新型免疫抑制剂,可选择性作用于T细胞,抑制其活化,现主要应用于器官移植时的排斥反应。环孢菌素A是由环孢菌素A合成酶通过模块指导依次合成并环化成环肽。环孢菌素家族已有2000多种,应用到免疫,抗病毒肝炎等许多领域。本文简要介绍环孢菌素A合成酶的结构及合成环孢菌素A的机制,以及对其实施遗传工程改造方面的研究进展。     

不同抑郁症模型下证候差异的品系依赖性研究

目的：疾病与证候关系的本质是中医学研究的基本问题之一。本研究基于遗传（先天禀赋）参与决定疾病证候的原理,研究小鼠品系差异对抑郁症证候的影响。方法：使用皮质酮皮下重复注射及慢性温和不可预知应激两种方式,在Balb/c和129/S1两种近交系小鼠上进行抑郁症疾病造模。对模型动物进行糖水偏好实验、悬尾实验、强迫游泳实验、新奇环境摄食抑制实验、旷场实验等行为学检测,以及对小鼠证候表型特征：皮毛状态、掌纹血色度、抓力和负重游泳实验进行检测。结果：雄性Balb/c 小鼠在两种模型中分别表现出阈下抑郁样行为和抑郁样行为,但是在抓力及掌纹血色表型上都显示气虚样证候。雄性129/S1小鼠在两种模型下都表现出抑郁样行为,从行为绝望分析表现为气郁样证候。两个品系在两种模型下皮毛评分都增加,提示此表型与气虚与气郁都有关系。结论：本研究显示抑郁症证候呈现品系依赖性,且一定程度上独立于造模方法。这为我们进一步利用如全基因组关联分析等现代技术研究病证相关性的现代生物学本质奠定了基础。     

越鞠丸合甘麦大枣汤加减对谷氨酸诱导的HT22细胞损伤模型的神经保护作用

目的:探讨越鞠丸合甘麦大枣汤加减(YJGZ)对谷氨酸诱导的小鼠海马神经元细胞系(HT22)细胞损伤的神经保护作用。方法:HT22细胞系无菌培养,以高浓度谷氨酸建立细胞损伤模型,并制备YJGZ水提液和含药血清,分为正常组,模型组,YJGZ含药血清组(1%,5%,10%),YJGZ水提液组(166 mg·L~(-1)),尼莫地平组(100μmol·L~(-1))。噻唑蓝(MTT)比色法检测各组细胞存活率;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测乳酸脱氢酶(LDH)释放率及细胞内活性氧自由基(ROS)的含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马N-甲基-D-天冬氨酸受体亚单位2B蛋白(NR2B),环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB),磷酸化CREB(p-CREB),细胞外调节蛋白激酶(ERK),磷酸化ERK(p-ERK)的蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组细胞存活率显著下降(P 0. 01),乳酸脱氢酶(LDH)释放率明显增加(P 0. 05),细胞内活性氧(ROS)水平明显增加(P 0. 05),NR2B蛋白的表达明显升高(P 0. 05),CREB,p-CREB,ERK,p-ERK蛋白表达水平明显降低(P 0. 05);与模型组比较,YJGZ水提液组和尼莫地平组均能显著提高谷氨酸模型条件下HT22细胞的存活率(P 0. 01),减少细胞损伤,减少LDH的释放率,降低细胞内ROS水平(P 0. 05,P 0. 01),降低NR2B蛋白的表达水平(P 0. 05),增加CREB,p-CREB,ERK,p-ERK蛋白的表达(P 0. 05); YJGZ含药血清组与模型组比较,HT22细胞存活率并没有提高。结论:YJGZ水提液对谷氨酸诱导的HT22细胞损伤具有显著的保护作用。