慢粒白血病患者血清铜、锌、铁、镁含量及bcl-2和c-myc基因表达分析

目的 :分析慢性期慢粒白血病患者血清铜、锌、铁、镁含量与 bcl- 2、c- m yc基因表达水平的变化及其相互关系 ,为慢粒白血病发生机制研究及临床诊治提供实验依据。方法 :采用原子吸收分光光度法测定血清铜、锌、铁、镁含量 ;采用反转录 -聚合酶链式反应 (RT- PCR)及其扩增片段光密度扫描定量分析外周血白细胞中 bcl- 2、c-myc及内对照β- actin m RNA水平。结果 :与正常对照组比较 ,慢性期慢粒白血病患者血清锌及铁含量显著降低 ,血清镁含量及铜 /锌比值显著升高 ,血清铜含量升高但其差异无显著性 ;患者外周血白细胞中 bcl- 2及 c- myc m RNA水平均显著高于正常对照。结论 :慢粒白血病细胞中 bcr/ abl嵌合基因或其表达产物可致促进细胞增殖和 /或抑制细胞凋亡的相关基因表达增强 ,同时抑制锌、铁吸收和促进铜、镁的积累 ;血清铁、镁含量和铜 /锌比值反映出细胞增殖 -凋亡相关基因的表达水平 ,可能成为临床诊治慢粒白血病的重要参数。     

人乳腺癌裸鼠移植瘤的体外抗生素诱导基因治疗

 目的探讨Tet调控下体外抗生素诱导基因治疗人乳腺癌裸鼠移植瘤的可行性。方法构建人乳腺癌BALB/C裸鼠移植瘤模型,制备有感染活性的重组逆转录病毒RevTRE/HSVtk与RevTet-On。观察体外强力霉素(Dox)诱导,丙氧鸟苷(GCV)和逆转录病毒作用后移植瘤生长的变化及组织病理改变,分析其对乳腺癌裸鼠移植瘤的调控性治疗作用。结果乳腺癌裸鼠治疗后,肿瘤体积明显减小,生长受抑,生存周期延长,组间比较有显著性差异(P<0.05)。瘤体HE染色显示治疗组肿瘤局部有炎性细胞浸润和强嗜酸性细胞。RT-PCR结果显示Dox诱导后瘤体组织HSVtk表达较明显。结论通过逆转录病毒介导Tet调控,可以在体外抗生素Dox诱导下对人乳腺癌裸鼠移植瘤模型进行基因治疗,杀伤肿瘤细胞。     

RT-PCR检测慢性粒细胞白血病患者骨髓细胞集落bcr/abl mRNA的表达

采用ＲＴＰＣＲ 技术对ＣＭＬ 患者骨髓细胞１４ ｄ 的细胞集落群和部分１４ ｄ 或２８ ｄ 的单个细胞集落ｂｃｒ／ａｂｌ ｍ ＲＮＡ 表达进行分析。结果显示：所检测的骨髓细胞集落ｂｃｒ／ａｂｌ 基因的表达均呈阳性,即为ＣＭＬ 集落,与细胞遗传学分析结果一致。该方法为研究ＣＭＬ 造血前体细胞基因表达及其诊断、治疗监测提供了灵敏、有效的分析手段;并可作为研究ＣＭＬ 发病、治疗及筛选抗ＣＭＬ 药物较为理想的方法。     

哺乳动物体细胞的染色体间重组被抑制

同源重组对生物体具有正、反两方面的影响。积极的因素包括:提高了种属的多样性,改正了复制及其它损伤所致的错误等。但它也可能导致隐性基因的同型接合(homozygotization)及基因的紊乱和失调节,这种情况常见于多细胞生物体细胞发生的同源染色体间重组,以及涉及重复序列的异源染色体     

多发性骨髓瘤负性相关基因DAZAP2蛋白高效表达和纯化

目的在前期的研究中，DAZAP2基因在多发性骨髓瘤（Multiple myeloma，MM）患者中表达明显下调，可能为MM的负性基因．须进一步获得DAZAP2蛋白，制备抗体，从而在蛋白水平上研究DAZAP2的表达、结构和功能．方法将原核重组质粒pQE30－DAZAP2转化大肠杆菌，阳性菌株经1 mmol／LIPTG诱导表达目的蛋白，再经过纯化和透析结果IPTG诱导4hr时，得到大量重组目的蛋白，占可溶蛋白的20％左右，经过Ni—NTA层析柱纯化。获得分子量为17kD的DAZAP2蛋白浓度为0．97mg／m1．结论DAZAP2蛋白获得高效表达，并且建立快速简便的纯化方法，目的蛋白可以用于下一步的实验．     

东方田鼠胚胎成纤维细胞永生化细胞系的建立

目的 建立东方田鼠胚胎成纤维永生化细胞系,为全面研究东方田鼠抗日本血吸虫机制以及开展不同动物成纤维细胞间比较研究奠定基础和提供细胞实验材料.方法 运用脂质体介导的基因转染法将pSV3 neo质粒导入第3代东方田鼠胚胎成纤维细胞,经G418筛选抗性克隆并扩大培养,建立永生化细胞系;用PCR检测细胞株中SV40T基因的整合,RT-PCR鉴定SV40T基因在转染细胞中的表达;绘制东方田鼠胚胎成纤维永生化细胞生长曲线.结果 阳性细胞克隆已扩大培养并稳定传代50代,经鉴定SV40T抗原已整合到东方田鼠胚胎成纤维细胞中且稳定表达.结论 成功建立东方田鼠胚胎成纤维永生化细胞系.     

转录过程中线性和超螺旋多核小体的命运

染色质在基因表达调控中发挥十分重要的作用,了解核小体在转录中的命运,对于理解真核细胞的转录十分必要。一个重要的问题是,在转录延伸过程中,RNA聚合酶如何拷贝核小体,核小体是丢失抑或重构?     

高分辨率熔解曲线在ABO血型基因526位点单核苷酸多态性检测中的应用

目的建立高分辨率熔解(HRM)曲线检测ABO血型基因526位点单核苷酸多态性(SNP)的方法。方法随机提取35例待检血型标本的DNA,运用HRM曲线检测ABO血型基因526位点的SNP,通过PCR-DNA测序以及血型血清学试验验证HRM检测结果的准确性。结果 35例血型标本中,共检出526位点杂合子13例,纯合子22例。经测序分析和血清学试验验证13例G/C杂合中B型8例、AB型5例,22例CC纯合子中A型10例,O型12例。HRM法检测结果与测序结果及血清学结果相符。结论 HRM法是一种低成本、简便、准确的SNP检测技术,有望成为临床ABO血型基因分型的新方法。     

5′和3′末端快速扩增法克隆多发性骨髓瘤负性相关基因DAZAP2

目的在多发性骨髓瘤患者中KIAA0058基因序列表达明显下调,从正常人骨髓单个核细胞中克隆该序列全长cDNA,以期更好地研究该序列结构,获得其功能信息。方法采用末端快速扩增法(RACE),进行多轮RT-PCR后,对PCR产物进行测序、拼接、证实,与NCBI核酸数据库进行比对。结果该序列全长cDNA长度为1913bp,登陆号为AY430097,与来源于人睾丸cDNA文库的序列DAZAP2同源性高达99%以上。该序列具有较短的5′非翻译区及长的3′非翻译区,开放阅读框序列从第84位碱基至590位碱基,具有poly(A)尾。结论利用RACE法,从骨髓单个核细胞中成功克隆了DAZAP2全长cDNA。     

多发性骨髓瘤恶性相关基因MYEOV2对NIH/3T3细胞生长的影响

目的　分析多发性骨髓瘤恶性相关基因MYEOV2对NIH/ 3T3细胞生长的影响。方法　将MYEOV2基因克隆到真核表达载体pcDNA3 1( +)上 ,并将阳性重组子通过脂质体转染入NIH/ 3T3细胞中 ,G418筛选获得转染阳性克隆并用RT -PCR检测MYEOV2基因的表达。运用流式细胞分类法、细胞生长曲线分析MYEOV2基因对NIH/ 3T3细胞生长的影响。结果　成功获得转染pcDNA3 1( +) /MYEOV2的细胞阳性克隆。流式细胞分析显示转染pcDNA3 1( +) /MYEOV2、转染空载体及未转染的NIH/ 3T3细胞的S期细胞分别为 3 0 9%、2 0 1%、16 1% ,前者较后两者S期细胞增多 ,有显著性差异 (P <0 0 5 )。细胞生长曲线显示转染pcDNA3 1( +) /MYEOV2、转染空载体、未转染的NIH/ 3T3细胞的倍增时间分别为 13 6h、2 5 3h、2 7 4h ,前者细胞倍增时间较后两者缩短 ,有显著性差异 (P <0 0 5 )。结论　MYEOV2基因的表达增加促进DNA合成增加 ,细胞增殖加快 ,是多发性骨髓瘤瘤细胞恶性增殖的一个重要因素