一项关于食品中空肠弯曲菌计数方法的研究简

目的 为了了解食品中空肠弯曲菌的数量,探寻一种实用的空肠弯曲菌计数方法.方法 通过不同浓度的染菌实验,对平板计数法、MPN法和Simplate方法进行比较分析.结果 当染菌量在10 CFU/g（mL）时,MPN法中至少有1管出现了阳性,simplate也可以检出且与设定值接近.因此这两种方法的检测限均为≥10 CFU/g（mL）.平板计数法的检测限应为≥30 CFU/g（mL）,在此范围内得到的结果与设定值相差0.9 ～2.4倍,小于10倍.结论 事实上,实验室可以选用不同的方法来评价食品中空肠弯曲菌的污染情况.如果检疫过程中要求结果准确,我们建议使用MPN和Simplate方法来计数加工过的食品.对于猪肉和家禽这类高污染的畜产品,选用平板计数法计数则更便捷.     

应用LAMP技术对4种疟原虫进行属种鉴定的初步研究

摘要：目的建立对4种感染人的疟原虫虫属及定量的环介导等温扩增法（100p—mediated isothermal amplification,LAMP）基因检测方法。方法根据恶性疟原虫、三日疟原虫、卵形疟原虫、间El疟原虫的18SrRNA基因共有保守序列及LAMP技术原理,设计一套含有6条疟原虫虫属特异性引物的LAMP反应体系,产物经SYBRGreenI进行显色反应及电泳分析,观察其特征条带的情况,利用LAMP技术检测上述4种疟原虫DNA及其它12种相关寄生虫DNA评价反应特异性,利用PCR技术为参照对LAMP技术检测疟原虫虫属试验的敏感性,利用疟原虫重组质粒探索建立疟原虫LAMP定量的可能性。结果4种疟原虫LAMP产物经显色后呈绿色,经电泳后呈特征性梯状条带,阴性对照及其它相关寄生虫DNA无明显扩增,重组质粒浓度在1．42X10^4～1．42X10^9拷贝机l范围内时,反应循环阈值与模板浓度有良好的线性关系（r=0．9995）。与PCR方法相比较,建立的疟原虫虫属LAMP检测方法的敏感性是其10倍,检出限达到1．42X10^1拷N／μl。结论建立的检测疟原虫属种、数量的LAMP方法具有较高的特异性和敏感性,适合疟疾防治检测的需要。     

空肠弯曲菌hipO基因的Real-time PCR检测研究

目的建立基于新型Taqman荧光探针的荧光实时(Real-time)PCR方法用于空肠弯曲菌的筛选检测与快速鉴定。空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)是近十几年来在世界范围内广泛重视的人畜共患病原菌,可以导致人类的急性肠炎与食物中毒,并能引发格林-巴利综合征等并发症。为更好地利用分子生物学技术对空肠弯曲菌进行快速、准确的基因检测,本研究从样品增菌液与单菌落中提取细菌DNA,建立了针对空肠弯曲菌特异的hipO(hippuricase,马尿酸酶)基因的Real-time PCR方法,用于空肠弯曲菌的快速筛选检测与可疑菌落快速鉴定。试验结果表明,该方法检测细菌的灵敏度为1~10CFU,人工布菌鸡肉的检测灵敏度为1~10CFU。本研究所建立的空肠弯曲菌荧光实时PCR方法具有准确、可靠、快速的特点。     

空肠弯曲菌保存方法的比较

空肠弯曲菌是近年来在全球范围内被广泛重视的人畜共患病病原菌,该菌培养条件苛刻,菌株不易保存。为了解决保存难这一难题,此实验对七种通常用于空肠弯曲菌保存的方法,进行了详细的比较和研究。结果表明温度在-70℃适合于菌株的长期保存,温度在2℃～8℃保存时间较短,但操作简便,适用于菌株的暂时保存。     

2006-2008年江苏地区不同宿主感染空肠弯曲菌及其耐药性

目的检测2006-2008年江苏地区鸡、水禽、奶牛、丹顶鹤、猪、实验猴等标本感染空肠弯曲菌及其耐药性。方法采用APICampy System进行生化与分类鉴定,结合弯曲菌多重PCR检测方法对来自江苏地区的禽、牛、猪、猴3 010份标本,检测分离株及其耐药性。结果共检测样本3010份,402份空肠弯曲菌阳性,阳性率13.36%,其中家禽样阳性率15.83%（258/1630）;水禽10.40%（52/500）;奶牛7.65%（39/510）;猪18.75%（30/160）;猴15.00%（15/100）;丹顶鹤12.50%（10/80）;糜鹿0%（0/30）。选择不同宿主来源的108株对10大类27种抗生素高度敏感率的是：氯霉素100%、阿莫西林99.07%、阿米卡星92.59%、头孢噻肟91.67%、阿齐霉素90.74%;高度耐药率的是：头孢哌酮99.07%、复方新诺明99.07%、头孢孟多99.07%、磺胺甲基异噁唑97.22%、头孢拉丁91.67%。结果显示,108株分离株的耐药主要集中在9耐～20耐,占85.19%,猪分离株的多重耐药性较其它宿主来源分离株严重。结论江苏地区空肠弯曲菌的流行和耐药状况呈现多样化和复杂化,不同宿主来源分离株耐药性和多重耐药性存在差异。     

空肠弯曲菌检测与基因分型的研究进展

随着分子生物学技术的迅猛发展,空肠弯曲菌的基因诊断与分型方法因其敏感性、特异性、分型率和分辨力高于传统的检测方法,且操作简便、快速而备受重视。本文对空肠弯曲菌常规生化检测方法、PCR方法、RELP分型、RAPD分型、PCR-RFLP分型、核糖体分型、鞭毛蛋白基因分型、AFLP分型的进展作了综述。     

西瓜霜化学成分分析

对西瓜霜化学成分析表明,西瓜霜含有18种氨基酸。其中7种为人体必需氨基酸。另外,西瓜霜含有铁、锰、铜和镁等元素。     

布氏杆菌表面特异性多表位抗原的串联表达与免疫磁珠的初步建立

目的为获得布氏杆菌表面多表位抗原的特异性抗体,用于布氏杆菌免疫磁珠的构建。方法 从布氏杆菌3个表面蛋白中分析到特异性抗原表位,人工合成其串联基因片段并插入原核表达载体,转化至E. coli BL21(DE3),获得重组质粒pET-32a(+)-CJMEA-A,IPTG诱导后表达出30 kDa的重组蛋白,亲和层析纯化后将其进行Western blot分析、间接ELISA鉴定和兔免疫试验,制备的抗血清经亲和层析纯化后,包被成免疫磁珠并用于布氏杆菌富集。结果 表达的重组蛋白能与牛抗布氏杆菌血清反应,其抗血清与布氏杆菌发生良好反应,纯化抗体包被的免疫磁珠能特异性吸附布氏杆菌。结论 获得的布氏杆菌特异性抗体和免疫磁珠具有良好的应用前景。     

空肠弯曲菌鞭毛蛋白单克隆抗体的制备

目的为获得空肠弯曲菌鞭毛蛋白单克隆抗体,用于空肠弯曲菌的检测和研究。方法用空肠弯曲菌ATCC29428株灭活全菌作为抗原,免疫BALB/c小鼠,待抗体水平达到1∶51 200时,取脾细胞与生长良好的对数期Sp2/0进行融合。同时以粗提天然鞭毛蛋白和人工表达重组鞭毛蛋白包板,用间接ELISA方法筛选,多次克隆化培养后获得的单抗用Western blot进行生物学特性鉴定。结果获得3株持续、稳定分泌抗空肠弯曲菌鞭毛蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1G8、1G9和3F2。结论获得的空肠弯曲菌鞭毛蛋白单克隆抗体为建立空肠弯曲菌的蛋白检测及后续研究奠定基础。