基于多重PCR技术检测蜡样芽胞杆菌3种毒素基因方法的建立及评价

目的 基于多重PCR技术,建立一种快速检测蜡样芽胞杆菌nhe、cytK和entFM 3种毒素基因的方法,并评价其效能。 方法 煮沸法提取蜡样芽胞杆菌DNA,以蜡样芽胞杆菌nhe、cytK和entFM特异性毒素基因作为靶基因,采用NCBI primer-BLAST 5.0软件设计特异性引物,优化反应体系。建立三重PCR检测体系,并检测其特异性、灵敏度和稳定性。 结果 煮沸法提取蜡样芽胞杆菌DNA,浓度为227 mg·L^－1,纯度为1.50~1.60。采用多重PCR体系同时检测蜡样芽胞杆菌3种毒素致病基因,于退火温度56 ℃时,蜡样芽胞杆菌基因引物nhe499的扩增片段为499 bp,基因引物cytK191的扩增片段为191 bp,基因引物entFM363的扩增片段为363 bp。PCR体系扩增蜡样芽胞杆菌3种毒素基因后条带清晰明亮,且无非特异性条带,与金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌均无扩增,表明蜡样芽胞杆菌基因引物nhe499、cytK191和entFM363特异性强;3种引物在同一反应体系中互不干扰。灵敏度检测,多重PCR体系最低检测限可同时达到10^－1 mg·L^－1;稳定性检测,多重PCR体系自制备起每6个月检测稳定性一致。 结论 建立的多重PCR检测体系对于蜡样芽胞杆菌nhe499、cytK191和entFM363 3种毒素基因灵敏度高、特异性强,检测结果准确稳定,检测体系具有良好稳定性,适用于快速检出蜡样芽胞杆菌的3种不同致病毒素基因。     

呼吸道真菌感染核酸胶体金试纸条快速检测方法的建立和评价

目的 采用聚合酶链式反应（PCR）技术和胶体金技术建立一种呼吸道真菌感染核酸胶体金试纸条检测方法,并对其检测效果进行评价。 方法 根据GenBank数据库选择真菌内转录间隔区（ITS）基因片段作为靶基因,应用DNAMAN软件对真菌ITS基因片段进行分析,并分别在真菌通用引物5'端用生物素（Biotin）和异硫氰酸荧光素（FITC）进行修饰标记;建立PCR体系,进行体系的最佳条件优化;确定胶体金免疫层析试纸条标记链霉亲和素的最佳标记量和质控线及检测线最佳包被物浓度,组装核酸胶体金试纸条,对试纸条的特异度、灵敏度、重复性和稳定性进行验证。 结果 水煮法提取白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌DNA,浓度为180 μg·L^－1以上,纯度为1.60~2.10;在pH 7.0条件下,每100 μL胶体金溶液中制备胶体金标记链霉亲和素最佳标记量为 3.3 μg,质控线包被Biotin化牛血清白蛋白（BSA-Biotin）浓度为2.00 g·L^－1,检测线包被抗FITC抗体浓度为1.00 g·L^－1。核酸试纸条的特异度与电泳结果一致,仅白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌出现阳性结果,与金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、乙型溶血性链球菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌和大肠埃希菌等常见呼吸道感染细菌无交叉反应。灵敏度检测,白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌的DNA浓度分别为10^－4、10^－2和10^－3 mg·L^－1时核酸试纸条仍可准确检出,而普通PCR电泳结果显示白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌最低检测浓度分别为0.01、1.00和0.10 mg·L^－1;重复性检测,在不同实验室不同操作人员对核酸试纸条进行验证,结果一致,重复性良好;稳定性检测,核酸试纸条在第6、9和12个月进行检测,结果符合预期,稳定性良好。 结论 本研究建立的呼吸道真菌感染核酸胶体金试纸条可以检测白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌等真菌,特异度和灵敏度均较高,操作简便且快速。     

滇白珠叶油抗菌活性的实验研究

目的:探索民族药滇白珠叶油的抗菌活性。方法:利用药物浓度稀释培养对照观察法确定最小抗菌浓度。结果:滇白珠叶油有类似水扬酸甲酯的抗菌作用,对大肠杆菌的抗菌浓度为0.3125%,对金黄色葡萄球菌的抗菌浓度为5%。结论:滇白珠叶油对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有抗菌作用,但对前者的抗菌效果是后者的16倍。     

羽毛角蛋白酶摇瓶发酵及其生化特性的研究

目的：使羽毛角蛋白产生角蛋白酶，并测定其在最适条件下的酶活力。方法：采用弗氏链霉菌Streplomyces fradiae val．s-22I Tu摇瓶发酵产生角蛋白酶和Foiln试剂法测定酶活力。结果：弗氏链霉菌S-221变种中能够分解羽毛中的角蛋白产生角蛋白酶，酶活力为254．24U，且在pH9．5～9．0之间活力最强。结论：羽毛中的角蛋白可以通过微生物的深层发酵培养产生活性较强的角蛋白酶。     

野黄桂叶油抗菌活性的实验研究

目的：观察川产野黄桂叶油的抗菌活性。方法：应用药物浓度稀释培养对照观察法确定最小抗菌浓度。结果：野黄桂叶油有类似中药丁香油的抗菌作用，对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抗菌浓度均为0．63％。结论：野黄桂叶油对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌有抗菌作用，且有类似中药丁香油的作用，其效果是含有多种抗菌化学成分综合作用的结果。     

浅析相近学科教育资源的共享

通过对西南交通大学近年来创办的生物工程系和药学院所开设的生物工程、生物信息、制药工程和中药学本科专业涉及的课程体系和实验室建设的分析,探索同一院校中相近学科教育资源共享的必要性和可能性,提出院系专业整合,共享教育资源,降低教育成本,提高教育效率的办学模式的建议。     

大叶桉黄酮类化合物的分析及抑菌活性的研究

目的：分析大叶桉Eucalyptus robusta．Sm干燥叶中黄酮类化合物的含量，并研究其抗菌的生物活性。方法：采用紫外分光光度法测定含量，粗提物通过聚酰胺柱分离总黄酮Flavoinds，在平板培养基上比较黄酮类化合物与土霉素Oxytetracycline抑制大肠杆菌Escherichia—coil、金黄色葡萄球菌Staphylocccus aureus、蜡样芽孢杆菌Bacterium cactus的活性。结果：总黄酮含量为0．903％，提取率为4．306％，抑菌活性明显优于土霉素。结论：该植物叶作为类抗生素饲料添加剂的开发具有较高的实用及经济价值。     

阿立哌唑治疗首发精神分裂症的临床观察

目的了解阿立哌唑对首发精神分裂症患者的疗效与耐受性。方法用阿立哌唑治疗56例首发精神分裂症（包括分裂样精神障碍）患者6周,采用阳性与阴性症状量表（PANSS）、副反应量表（TESS）评定疗效及不良反应。结果56例患者治疗后,临床显效率为82.14%,有效率达94.64%,治疗前后患者的PANSS减分率间差别有显著性意义（P〈0.01）,不良反应主要有轻度的锥体外系症状（EPS）、头痛、失眠、焦虑等,患者的血糖、血脂、体重治疗前后间差别均无显著性意义（P〉0.05）。结论阿立哌唑治疗首发精神分裂症患者疗效肯定,不良反应少,依从性较好。     

急性主动脉夹层围术期急性肺损伤与炎性细胞因子的相关性研究

目的:观察急性Stanford A型主动脉夹层(以下简称急性A型夹层)患者围术期急性肺损伤(ALI)及其与炎性细胞因子的相关性。方法:收集北京安贞医院2013年01月至2013年12月,急性主动脉夹层患者40例围术期临床资料,包括患者在全身麻醉、深低温停循环(DHCA)下行孙氏手术(主动脉弓替换及象鼻支架置入术)。分别于术前、麻醉诱导后、手术结束前、手术结束后,入ICU 6小时各时点计算氧合指数(PaO2/FiO2)、肺泡动脉氧分压差(P(A-a)DO2)。测定各时点血清样本IL-6、IL-8、IL-10和TNF-α浓度。结果:17例患者术前PaO2/FiO2<300mm Hg(1mm Hg=0.133k Pa),符合ALI诊断标准。随时间延长患者血清IL-6、IL-8、TNF-α浓度呈逐渐增加趋势,血清IL-10浓度呈逐渐降低趋势,差异均有统计学意义(P<0.05)。IL-6(r=-0.829,P<0.01)、IL-8(r=-0.701,P<0.01)与PaO2/FiO2呈负性相关性;IL-10与PaO2/FiO2呈正性相关性(r=0.410,P<0.05)。结论:急性A型夹层患者术前即可发生ALI。随着围术期进程的发展,肺损伤程度呈现逐渐加重趋势。急性A型夹层患者血清IL-6、IL-8及IL-10浓度变化与ALI密切相关,提示急性A型夹层患者机体炎症和抑制感染平衡的失调是导致围术期发生ALI的重要内在因素。     

双侧创伤性乳糜胸1例治疗体会

创伤性乳糜胸是一种较为少见的胸部急症,双侧创伤性乳糜胸更为少见。本文就1例双侧创伤性乳糜胸进行报道及相关文献复习,交流治疗经验,以提高创伤性乳糜胸的诊治水平。