基于死亡受体途径探讨脾肾双补方对离体人早孕绒毛滋养细胞HTR-8凋亡蛋白TNF-α、Caspase-3的影响

目的:探索脾肾双补方对人早孕绒毛滋养细胞中凋亡相关蛋白TNF-α、Caspase-3表达的影响。方法:采用动物含药血清,体外分组培养HTR-8细胞48 h,采用免疫组织化学法检测各组细胞凋亡蛋白TNF-α、Caspase-3表达的情况。结果:与空白对照组比,脾肾双补方高、中剂量组HTR-8细胞凋亡蛋白TNF-α、Caspase-3的表达均降低(P 0. 05),地屈孕酮组HTR-8细胞TNF-α、Caspase-3的表达显著低于空白对照组(P 0. 01);与地屈孕酮组比,脾肾双补方高、中剂量组TNF-α、Caspase-3的表达差异无统计学意义(P0. 05);脾肾双补方高、中剂量组间TNF-α的表达差异无统计学意义(P 0. 05)。结论:脾肾双补方含药血清可以促进人早孕绒毛滋养细胞数目增加,其机制可能是:减少人早孕绒毛滋养细胞的凋亡,保护细胞存活,继而有利于早期妊娠的维持,其作用途径可能是:脾肾双补方含药血清通过降低细胞凋亡诱导蛋白TNF-α的表达,抑制死亡受体途径,减少凋亡执行蛋白Caspase-3的表达,从而抑制人早孕绒毛滋养细胞的凋亡,保护细胞存活,维持妊娠。     

《傅青主女科》从脏腑经络论治种子浅析

通过认真研读《傅青主女科》,初步对该书上卷种子十篇中傅氏审证求因论治不孕的学术特点浅析,总结出其通过求因脏腑、经络对种子的影响而对因施治的临床诊疗特色,对今后从事临床工作有一定启示。     

致石饲料致动物胆固醇结石模型造模要素及中医药防治的数据挖掘

目的:定量研究致石饲料致胆固醇结石动物模型的造模要素,为提高造模效率及评价药物有效性提供方法学参考。方法:选取1993—2016年期间研究致石饲料致胆固醇结石动物模型的文献,录入动物种别、致石饲料配方、成石率、测试指标、受试药物等重要信息,定量统计和分析造模要素。结果:常用豚鼠、小鼠、兔等动物;致石饲料常用胆固醇、脂肪等,其中豚鼠最常用的致石饲料配方为90.00%全价饲料、1%胆固醇、2%猪油、5%蔗糖和2%酪蛋白,连续喂养49 d,成石率平均为87.40%;小鼠最常用的配方为83.50%全价饲料、1%胆固醇、15%脂肪、0.5%胆酸,连续喂养45 d,成石率平均为89.48%;兔最常用的配方为98.80%全价饲料、1.2%胆固醇,连续喂养50 d,成石率平均为72.40%;犬喂食含0.3%胆固醇的致石饲料,连续42 d,成石率为100%;树鼩喂食含胆固醇20%、蔗糖20%、大油(猪油)15%、蛋黄20%、玉米粉25%的致石饲料,连续喂养42 d,成石率为100%;金黄地鼠喂食含葡萄糖74.3%、酪蛋白20%、食盐5%、维生素0.5%和氯化胆碱0.2%的致石饲料,连续21 d,成石率为50%。常测试的指标为,胆汁中TC、TBIL、LDL、BA、PL、HDL等,血清中TC、TG、TBIL、LDL、BA、HDL、CKK等。造模的同时给药,常用药物包括鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸和中药复方,涉及甘草、大黄、白芍、金钱草、柴胡、茵陈等77种药材。结论:致石饲料常用于制造胆固醇结石动物模型,但配方及其成石率差异大、成本高、耗时长,中医药有利于肝胆系统功能恢复,防止成石性胆汁的产生,评价指标主要涵盖脂质、肝功能及胆道动力学等。     

补肾化痰法经APN信号通路对肥胖PCOS大鼠GC增殖的调控研究

目的:观察补肾化痰法经APN通路对肥胖PCOS大鼠卵巢GC增殖的调节作用研究。方法:采用来曲唑加高脂建立肥胖PCOS大鼠模型,补肾化痰复方治疗后,取卵巢组织行HE染色,免疫组化法检测AdipoR1/AdipoR2表达,realtime-PCR检测GC中p38MAPK、smad1/3、CCND2的mRNA表达水平。结果:与模型对照组比较,中药高、中剂量组卵巢GC中AdipoR1/2的表达增高(P0.05);中药高、中剂量组卵巢颗粒细胞p38MAPK、smad1/3、CCND2表达量均增高(P0.05)。结论:补肾化痰法可能通过APN信号通路促进GC增殖,进而改善肥胖PCOS卵泡发育障碍,达到治疗作用。     

补肾健脾化痰法论治肥胖型PCOS伴发IR的信号转导机制研究进展

阐述补肾健脾化痰法论治肥胖型多囊卵巢综合征（PCOS）伴发胰岛素抵抗（IR）的信号转导分子机制研究进展,探讨该治法对肥胖型PCOS伴IR的作用机制,为中医妇科临床运用该治法治疗肥胖型PCOS提供研究思路。运用中医传统理论及现代信号通路文献分析脾肾亏虚、痰湿内蕴是本病伴IR的关键病机,并论证从补肾健脾化痰法论治肥胖型PCOS伴发IR方法的科学性,创新性提出运用补肾健脾化痰法论治该病信号转导分子机制的研究策略是以PI-3K/Akt信号通路与TNF-α信号通路的交互对话为靶点,探讨该治法对本病伴发IR的调控作用及产生机制。     

补肾化痰法调控肥胖型PCOS-IR的临床疗效分析

目的观察补肾化痰法对肥胖型多囊卵巢综合征伴胰岛素抵抗(PCOS-IR)患者血清性激素水平、胰岛素抵抗(IR)、体质量指数(BMI)等的影响。方法纳入符合肥胖型PCOS-IR诊断标准的患者86例,其中治疗组采用补肾化痰法干预46例,对照组采用罗格列酮干预40例,均连续口服用药3个月经周期。观察两组治疗前后中医证候积分、LH/FSH、T、FINS、BMI等相关疗效指标变化情况。结果治疗前、后的两组间及组内中医证候积分比较,差异均有统计学意义(P0.05),治疗组优于对照组;两组治疗前后组内比较,LH/FSH、T、INS0、BMI等疗效指标降低(P0.05),治疗后组间比较无统计学意义(P0.05)。结论补肾化痰法可显著改善肥胖型PCOS-IR患者的肾虚痰湿型证候,具有下调LH/FSH、T等血清性激素水平及FINS、BMI值的趋势。     

补肾活血导法改善PER“胞宫摄精成孕”的网络调控机制研究＊

目的 基于“精满则子宫易于摄精，血足则子宫易于容物”思想，通过实验研究结合网络分析、分子对接等方法，探讨补肾活血方治疗子宫内膜容受性不良（Poor endometrial receptivity，PER）的关键核心靶点及信号通路的作用机制。方法 建立肾虚血瘀-PER病证结合大鼠模型，补肾活血导法干预10天后，通过扫描电镜观察大鼠的种植期胞饮突形态；利用TCMSP数据库结合Batman数据库筛选补肾活血方中有效组分，通过Genecards、OMIM 数据库检索PER基因；筛选补肾活血方-PER共同作用靶点，导入String 数据库及 Cytoscape3.8.0软件进行可视化分析，构建PPI网络；应用Metascape数据库分别进行 GO富集分析及KEGG富集分析。采用AutoDock对补肾活血方有效组分与核心靶标蛋白进行分子对接验证，通过Western Blotting、q-PCR和ELISA检测相关关键基因蛋白或mRNA的表达水平。结果 补肾活血导法可提高PER大鼠着床率，促进胞饮突成熟。补肾活血方与PER共有130个交集靶点；String计算后应用Cytoscape中CytoNCA插件获得24个核心靶点，输入metascape平台获得相关66个生物学过程（BP）、38个分子功能（MF）、28个细胞组分（CC）和相关KEGG信号通路共113条。分子对接提示补肾活血方有效组分与关键蛋白具有良好的亲和力作用。实验研究显示补肾活血导法能够增强TNF、p-38、ESR1、PGR、IL6、1L1β等相关因子在子宫内膜组织上的表达。结论 通过网络分析结合药理实验研究发现，补肾活血导法能够有效改善PER相关指标，并通过调控IL6、IL-1β、p-38蛋白和基因表达水平，改善子宫内膜容受性进而实现“胞宫摄精成孕”。     

从“肾虚血瘀”论治子宫内膜异位症并发不孕

子宫内膜异位症(EMS)是妇科难治病、多发病,该病多并发不孕,中医认为肾虚血瘀是该病并发不孕的病机。现代西医认为异位内膜种植学说是本病的发病机制之一,血管生成是本病的重要特征,也是本病并发不孕的重要原因。导师在体现活血化瘀治法的中成药在妇科临床和实验研究证实活血化瘀治法对EMS有效的基础上运用补肾活血化瘀治疗EMS并发不孕患者取得显著临床疗效,妊娠率显著增加。故认为肾虚血瘀是EMS并发不孕的主要病因病机,也是EMS并发不孕的主要病理基础,从"肾虚血瘀"论治EMS并发不孕值得从临床和实验研究两方面深入探讨。     

胰岛素联合HCG改良法建立肥胖型PCOS动物模型评价

目的：建立并评价肥胖型多囊卵巢综合征（PCOS）大鼠模型。方法：将大鼠随机分为空白对照组、高脂模型组、胰岛素（INS）联合人绒毛膜促性腺激素（HCG）模型组和INS联合HCG加高脂乳剂模型组。通过颈背部分别皮下注射INS和HCG加高脂乳剂灌胃导形成肥胖PCOS大鼠模型。监测大鼠动情周期,测定体质量增加幅度、血清黄体生成素（LH）、卵泡刺激素（FSH）、雌二醇（E₂）、睾酮（T）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）、甘油三酯（TG）、胆固醇（TC）、空腹血糖（FPG）、空腹胰岛素（FINS）、2 h血糖、2 h INS,计算稳态模型（HOMA）指数、相关脏器指数水平和双侧卵巢HE染色。结果：INS联合HCG改良法（INS联合HCG加高脂模型组）大鼠取材时,体质量、体质量增加幅度、卵巢脏器指数、T、LH、 HOMA指数均显著高于空白对照组、高脂模型组和INS联合HCG模型组（P<0.05,P<0.01）,HDL明显降低（P<0.05,P<0.01）。INS联合HCG改良法大鼠FPG、FINS、2 h INS均极显著高于高脂模型组（P<0.01）。结论：INS联合HCG改良法诱导的动物模型是研究肥胖型PCOS发病机制的较理想动物模型之一。