健脾消癌方对结肠癌外泌体诱导HFL1活化成CAFs的影响

目的:探讨健脾消癌方对人结肠癌细胞(HCT116)来源外泌体诱导正常人胚肺成纤维细胞(HFL1)向肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)活化的影响。方法:以13.1 g·kg~(-1)的健脾消癌方灌胃SD大鼠以制备含药血清,采取超高速离心法分别提取含10%无外泌体血清培养的HCT116细胞外泌体及含20%健脾消癌方含药血清培养的HCT116细胞外泌体,纳米颗粒跟踪分析仪(Zetaview)检测外泌体的粒径分布,蛋白免疫印迹法(Western blot)鉴定外泌体的标志蛋白凋亡转接基因2互作蛋白X(Alix),热休克蛋白70(HSP70),肿瘤易感基因101蛋白(TSG101),荧光显微镜观察HFL1对细胞膜染色试剂盒(PKH67)标记的外泌体的摄取情况;将HFL1细胞分6组:空白组,转化生长因子-β1(TGF-β1)组,TGF-β1联合HCT116外泌体2 mg·L~(-1)组,TGF-β1联合HCT116外泌体4 mg·L~(-1)组,TGF-β1联合健脾消癌方外泌体2 mg·L~(-1)组,TGF-β1联合健脾消癌方外泌体4 mg·L~(-1)组,均干预48 h,Western blot和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)分别测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白和mRNA的表达水平。结果:Zetaview检测粒径分布主要集中在50～100 nm,结合标志蛋白Alix,HSP70和TSG101的表达证实其为外泌体,HFL1细胞与外泌体共孵育后,荧光显微镜下可看到大量外泌体被HFL1细胞所摄取;与空白组比较,TGF-β1组和TGF-β1联合HCT116外泌体组的α-SMA蛋白及mRNA表达水平升高(P0.05);与TGF-β1联合HCT116外泌体组比较,TGF-β1联合健脾消癌方外泌体组的α-SMA蛋白及mRNA水平下降(P0.01)。结论:人结肠癌细胞外泌体联合TGF-β1可诱导HFL1活化成CAFs,健脾消癌方可通过影响α-SMA的表达水平而降低HFL1的活化能力从而达到拮抗结肠癌肺转移的作用。     

肺复康对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长及E-cadherin、Vimentin和TGF-β表达的影响

目的 研究肺复康对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长及癌、癌旁组织中上皮-间质转化(EMT)相关因子E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和转化生长因子-β(TGF-β)表达的影响.方法 40只小鼠随机分为肺复康组(17.2 g生药/kg)、5-Fu组(25 mg/kg)、Lewis肺癌模型组、正常组.检测肿瘤体积、肿瘤质量以及癌、癌旁组织中E-cadherin、Vimentin和TGF-β的蛋白表达情况.结果 与模型组相比,肺复康组肿瘤体积减小(P＜0.01),肿瘤质量降低(P＜0.01);肺复康组抑瘤率为36％.与正常组比较,模型组癌及癌旁组织E-cadherin表达降低(P＜0.01),Vimentin、TGF-β表达升高(P＜0.01);与模型组癌及癌旁组织相比,肺复康组癌及癌旁组织E-cadherin表达升高(P＜0.01),而Vimentin、TGF-β无显著性差异(P＞0.05).结论 肺复康对Lewis肺癌小鼠肿瘤的生长具有一定的抑制作用;并能上调E-cadherin的表达,从而促进肿瘤细胞间的同质粘附而抑制肿瘤的侵袭、转移.     

健脾解毒活血法对脾胃湿热型幽门螺杆菌性胃炎小鼠胃部炎症的影响研究

目的:探讨健脾解毒活血法组方对脾胃湿热型幽门螺杆菌(Hp)相关性胃炎模型小鼠胃部炎症的影响。方法:以40只SPF级昆明种小鼠为实验对象,随机取10只作为空白组,剩余30只采用Hp菌液灌胃法建立脾胃湿热型Hp相关性胃炎小鼠模型,造模成功后,将其分为模型组、奥美拉唑钠组和中药组各10只。奥美拉唑钠组灌胃奥美拉唑钠混悬液10mg/kg体质量,中药组灌胃健脾解毒活血方药液18g/kg体质量,模型组灌胃同等量的0.9%氯化钠注射液,均每天1次,连续给药14d。观察各组血清白介素-1β(IL-1β)、胃泌素(GAS)以及胃组织Hp的感染情况。结果:模型组小鼠血清IL-1β、GAS的含量较空白组明显升高(P0.01,P0.05);与模型组比较,中药组和奥美拉唑钠组血清IL-1β显著降低(P0.05),但GAS则无明显差异。模型组小鼠胃组织Hp感染数较空白组明显增加;与模型组比较,中药组和奥美拉唑钠组胃组织Hp感染数显著降低(P0.05)。结论:健脾解毒活血方对IL-1β及Hp感染数有明显改善作用,但对GAS则没有明显影响。     

外泌体在大肠癌中的研究进展

大肠癌是发病率最高的消化道恶性肿瘤之一,总体5年生存率不高,且近年来随着饮食结构等的改变,大肠癌在我国发病率逐年上升,严重威胁着人类生命健康,故研究大肠癌发生、发展的机制及有效防治方法有重大意义。外泌体是一类由细胞分泌的直径约30~100 nm的有被小泡,表面携带特定分子,可通过受体-配体结合方式或通过内吞作用被内在化,或与靶细胞膜融合,将囊泡中的物质释放至靶细胞胞液中,诱导靶细胞生理状态发生改变,在细胞与细胞间的交流中发挥重要作用。在肿瘤组织中,外泌体作为肿瘤微环境的重要组成部分,可通过促进肿瘤新生血管形成、促使结直肠癌细胞上皮-间质转化、引导肿瘤细胞器官特异性转移、诱导结直肠癌细胞耐药及参与抗肿瘤免疫效应等影响结直肠癌的发展,对结直肠癌外泌体进行深入研究,有利于寻找防治结直肠癌的有效方法。同时,由于外泌体自身通常包含多种特异性分子,有望作为理想的肿瘤标志物用于结直肠癌的诊断及预后判断。中医药治疗以"整体观念"和"辨证论治"为基本原则,可通过多环节、多途径、多靶点起效,在降低大肠癌的复发转移率、改善大肠癌患者预后方面发挥着重要作用,已成为我国大肠癌综合治疗的重要组成部分。外泌体对大肠癌发生、发展过程影响的广泛性,与中医药防治大肠癌的多环节、多途径、多靶点性相契合,以其为切入点,或许可更全面地研究中医药防治大肠癌的作用机制。     

臭牡丹提取物对H22荷瘤小鼠体内抑瘤作用及对相关蛋白表达的影响

目的 研究臭牡丹提取物对H22实体移植瘤的抑制作用及与B淋巴细胞瘤/白血病-2（Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bax）表达的相关性。方法 皮下接种H22瘤株建立小鼠H22实体移植瘤模型。60只荷瘤鼠随机分为模型组、5-氟尿嘧啶（5-Fu）组和臭牡丹高、中、低剂量（2.18、1.09、0.55 g/kg）组,每组12只,各组分别给予生理盐水、5-Fu（25 mg/kg,1次/d）及不同浓度的臭牡丹提取物干预。连续给药14 d后处死,检测小鼠体质量变化、抑瘤率及脾脏和胸腺指数;Western blot法检测Bcl-2和Bax蛋白的表达水平。结果 与模型组比较,臭牡丹高、中剂量组小鼠的肿瘤质量均显著降低（P<0.01）,胸腺和脾脏指数显著增加（P<0.05）;同时Bax蛋白的表达水平显著上调,Bcl-2蛋白的表达显著降低（P<0.01）。结论 臭牡丹提取物能够抑制H22实体移植瘤生长,其机制可能与上调Bax/Bcl-2比值和免疫调节有关。     

银杏舒通液改善血液系统的研究

银杏舒通液系银杏叶、何首乌等精制而成,临床证明其有滋阴补肾、舒肝通脉之功效。本研究表明其对甲亢阴虚型大鼠血液cAMP、BUN、CR升高具有明显的抑制作用,并使其被抑制的体重增长恢复正常;能改善大鼠血液流变学各项指标,具有明显的活血通脉作用。1　实验材料1.1　药物与试剂　银杏舒通液由湖南省中医药研究院提供,批号950701;(8-H3)cAMP由北京原子能科学研究院提供,批号950604。1.2　动物　SD系清洁级大鼠,雌雄各半,体重180～220g,由湖南省中医药研究院实验动物中心提供。2　方法与结果2.1　对阴虚型大鼠血液生化的影响　将大鼠随机…     

保肺饮对肺癌细胞EMT的作用及机制研究

目的:探讨保肺饮调控HGF逆转A549细胞EMT的作用及机制。方法:体外培养A549细胞,运用Western Blot方法检测保肺饮作用于A549细胞后对HGF、E-cadherin、vimentin蛋白表达的影响。结果:Western Blot结果显示不同剂量保肺饮作用下细胞E-cadherin表达增加,HGF、vimentin的表达降低,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论:保肺饮能通过下调HGF的表达逆转A549细胞EMT进程。     

健脾消癌方干预结肠癌细胞外泌体MIF调控肝Kupffer细胞TGF-β1表达的研究

目的 通过细胞实验研究健脾消癌方干预结肠癌细胞外泌体(CT26-exo)中巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)对肝Kupffer细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响.方法 采用CT26-exo干预肝Kupffer细胞,反转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肝Kupffer细胞中TGF-β1 mRNA表达;进一步采用小干扰核糖核酸(siRNA)干扰技术敲低CT26细胞MIF基因表达后,用其外泌体干预Kupffer细胞,RT-PCR及酶联免疫吸附测定(ELISA)检测Kupffer细胞TGF-β1表达;用不同浓度的健脾消癌方含药血清干预后,采用RT-PCR及蛋白免疫印迹法(WB)检测CT26细胞及其外泌体中MIF表达;用含药血清干预后的CT26-exo干预Kupffer细胞,RT-PCR及ELISA检测Kupffer细胞TGF-β1表达量.结果 CT26-exo干预后,小鼠Kupffer细胞TGF-β1 mRNA表达升高(P<0.05);敲低CT26细胞MIF基因表达后,其外泌体对Kupffer细胞中TGF-β1的上调作用减弱(P<0.05);20％的健脾消癌方含药血清可降低CT26细胞及其外泌体中MIF表达(P<0.05),且可降低CT26-exo对Kupffer细胞中TGF-β1的上调作用(P<0.05).结论 结肠癌细胞外泌体可通过MIF上调肝Kupffer细胞中TGF-β1表达;健脾消癌方含药血清可通过抑制结肠癌细胞外泌体中MIF表达降低肝Kupffer细胞TGF-β1表达.     

芪连结肠宁片健脾止泻作用研究

目的：研究芪连结肠宁片的健脾止泻作用。方法：利用小鼠腹泻模型、小鼠肠推进试验、兔在体肠运动试验,观察给药后腹泻模型小鼠8h内开始排黑粪的时间及黑粪数量、脾虚模型小鼠的炭末推进率、兔在体肠的收缩频率及幅度。结果：芪连结肠宁片能延长小鼠灌胃大黄后黑粪排出的时间,减少黑粪排出数量;改善脾虚型小鼠肠推进率增高的症状;降低家兔空肠收缩频率与收缩幅度。结论：芪连结肠宁片具有较好的健脾止泻作甩。     

绞股蓝皂甙对胶原蛋白含量的影响的研究

绞股蓝Gynostemma Pentapbyllum (Thunb)Makino系葫芦科绞股蓝属(Gynos temmaBl)植物。国内外学者对其化学成分和药理作用进行了系统研究,发现它有抗疲劳、抗炎、抗溃疡、延长细胞寿命、防治糖皮质激素副作用、抗过氧化脂质、抑制肿瘤生长、延