UPLC同时测定海南粗榧中3种三尖杉生物碱类化合物

目的:海南粗榧中主要活性成分为以三尖杉碱为母核的三尖杉酯类生物碱,该研究利用超高压液相色谱(UPLC)建立一种同时测定三尖杉碱、三尖杉酯碱、高三尖杉酯碱3种化合物含量的检测方法,分析海南粗榧不同组织样品中3种生物碱的代谢分布。方法:选用Agilent 1290Ⅱ型超高压液相色谱仪,Agilent Infinitylab EC-C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,2.7μm),流动相甲醇-20 mmol·L~(-1)碳酸铵水溶液,梯度洗脱,洗脱流速0.8 m L·min~(-1),检测波长291 nm,进样量5μL,柱温30℃。结果:在上述色谱条件下,色谱图基线平稳,各目标化合物峰型漂亮,分离度好。同时,对照品线性回归结果表明3种三尖杉生物碱含量与峰面积呈良好的线性关系,方法学考察实验结果表明仪器精密度、方法重复性及回收率均符合定量测定方法要求。结论:该方法具有较好的精密度、稳定性和重复性,且该方法检测时间短,12 min可以完成海南粗榧样品中3种三尖杉酯类生物碱的定量检测,操作简单快速、结果准确可靠,可以用于海南粗榧中三尖杉碱、三尖杉酯碱和高三尖杉酯碱的检测分析和质量控制,为深入研究海南粗榧中三尖杉酯类生物碱的代谢累积和时空分布等工作奠定方法学基础,同时也为海南粗榧的药用价值评价提供理论依据。     

GC-MS联用技术分析海南粗榧中三尖杉生物碱类化合物

目的:建立海南粗榧中三尖杉生物碱类化合物的GC-MS分析方法。方法:采用HP-5毛细管色谱柱(30 m×0.25 mm,0.25μm),程序升温,进样口温度:280℃;离子源温度:230℃;四极杆温度:150℃;电离方式:电子轰击离子化(EI源);电子能量:70 eV,离子检测模式扫描范围m/z:50～550。结果:该方法能够同时测定海南粗榧中3种三尖杉生物碱类化合物的含量,同时方法学考察结果符合相关规定。结论:该方法专属性好、灵敏度高、操作简单、结果准确可靠,可为海南粗榧中三尖杉生物碱类化合物的定性定量分析提供参考。     

洋常春藤皂苷类化合物代谢累积规律研究

目的以洋常春藤Hedera helix 1年生扦插苗为材料,通过检测不同部位及1年生长周期内4种常春藤皂苷类化合物(α-常春藤皂苷、常春藤皂苷C、常春藤皂苷B和常春藤皂苷D)的量,分析洋常春藤皂苷类化合物代谢累积规律,以期为确定药用洋常春藤原料的合理采收时间提供理论依据。方法实验通过合理设计洋常春藤材料的采样方法,采用HPLC法测定常春藤皂苷类化合物量。结果洋常春藤不同部位皂苷类化合物量测定结果为老叶新叶茎根,并且在一年的生长周期内,不同常春藤皂苷类化合物在不同采样部位中的动态累积规律均有所不同。结论洋常春藤叶片和茎均可作为高质量药用原料的采收部位,且叶片的最适宜采收时期为3月份开始的生长发育期,而茎的适宜采收时期则可以从3月份开始的生长发育期持续到低温休眠开始前的11月份。     

洋常春藤及其栽培品种的HPLC-UV指纹图谱和质量评价研究

目的通过建立洋常春藤及其栽培品种中皂苷类化合物的HPLC-UV指纹图谱,采用聚类分析和主成分分析方法进行统计学分析研究,同时结合标定化合物的测定,以期为常春藤属植物的药用质量评价提供参考。方法 Unitary C18色谱柱(250mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈(A)-0.2%磷酸水溶液(B);二元高压梯度洗脱;检测波长205 nm;体积流量1 m L/min;进样量20μL;柱温25℃。结果采用"中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2004A)"标定了17份常春藤属样品的12个共有指纹峰,计算其相似度在0.715~0.992;通过聚类分析和主成分分析结果初步判断洋常春藤的综合药用质量要优于其他品种。结论建立的方法能够成功应用于筛选高质量的常春藤原料以及进行洋常春藤及其栽培品种药材的质量评价与控制,同时可为制定洋常春藤及其栽培品种药用质量评价研究提供新的参考依据。     

洋常春藤鲨烯合成酶基因HhSS的克隆与表达分析

目的克隆获得洋常春藤Hedera helix鲨烯合成酶基因(HhSS)cDNA全长序列并进行生物信息学分析及表达分析。方法根据洋常春藤转录组数据信息设计引物,通过RACE克隆方法获得HhSS基因序列;采用DNAMAN、PROTPARAM、TMHMM、PSORT、Scan Prosite、SOPMA、SWISS-MODEL等生物信息学工具分析序列信息及编码蛋白的理化特性、结构域等特征;通过实时荧光定量PCR(q RT-PCR)技术进行HhSS基因的检测分析。结果 RACE克隆获得HhSS(Gen Bank登录号KX056078)基因cDNA序列全长1 889 bp,包含一个从248~1 477 bp的完整开放阅读框(ORF)以及247 bp的5’非编码区(5’UTR)和412 bp的3’非编码区(3’UTR)。该基因编码409个氨基酸,相对分子质量为46 800,等电点为5.68。HhSS蛋白具有植物SS蛋白的特征结构域和跨膜区,与刺五加、人参等同科植物亲缘关系较近。qRT-PCR结果表明洋常春藤叶片中HhSS基因的相对表达量与常春藤皂苷含量存在正相关性。结论洋常春藤HhSS基因的成功克隆及表达分析研究,为阐明HhSS基因在常春藤皂苷生物合成途径中的作用及代谢调控研究提供理论依据和技术基础。