丹参功能基因组学研究I——cDNA芯片的构建

目的：构建丹参cDNA芯片，为基因表达谱研究提供条件。方法：采用CTAB法提取丹参根总RNA，采用Pharmacia公司Quichprep^TM Micro mRNA PurifiCation Kit分离mRNA后，通过在cDNA分子两端加上EcoR I／Not I接头，在T4多核苷酸激酶的作用下磷酸化，与表达载体λZAP Express Predigested Vector连接，然后用包装蛋白在体外包装连接产物，感染E．coli XLl-Blue MRF’构建成cDNA文库。挑取分离良好的噬菌斑进行PCR扩增，经过电泳检测、纯化、再次电泳检测后得到的克隆用于芯片点制。以丹参actin基因作为阳性对照，不含DNA的点样液和PolyA为阴性对照。结果：cDNA文库插入片段长度为500～2500bp。共得到4 354个克隆用于芯片点制。单色荧光（Cy3）杂交显示，阳性对照均出现杂交信号，阴性点没有杂交信号。整张芯片背景清晰，漏点少，杂交点为完整的圆形，芯片质量完好。结论：该芯片的制作为首张有关道地药材的cDNA芯片，为丹参功能基因组的研究提供了强有力的工具。     

高特异性PCR方法鉴别乌梢蛇及其混淆品

目的 建立一种简便、准确的乌梢蛇药材DNA分子标记鉴别方法.方法 根据乌梢蛇及10种常见混淆品线粒体12SrRNA基因序列,设计一对专用于乌梢蛇的鉴别引物HWL-1和HWH-1,用不同的复性温度PCR扩增,确立特异性反应条件,并利用此方法鉴别从市场上购买的各种乌梢蛇药材.结果 PCR结果是在65℃复性温度下,正品乌梢蛇得到约320 bp的扩增带,而混淆品在同样的条件下无扩增带.为检验该方法的准确性,对市售乌梢蛇炮制品随机选取13块进行PCR鉴别验证,其中正品9块,混淆品4块,检出率达100%.结论 所设计的鉴别引物对正品乌梢蛇有高度的特异性.PCR方法稳定性高,同种不同个体间的种内差异对鉴定结果无影响.本方法简单、准确、快速、灵敏度高、重现性好.     

朝鲜红参中人参皂苷类成分含量测定及指纹图谱研究

目的:建立可同时测定朝鲜红参中人参皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Re、Rg15种成分含量和指纹图谱的HPLC方法。方法:采用DiscoveryC18(4.6×250mm,5μm)柱,流动相为水(A)-乙腈(B)梯度洗脱;流速1.0ml min-1,柱温为25℃,检测波长为203nm,并用计算机辅助相似性评价系统对指纹图谱进行了相似度分析。结果:朝鲜红参中人参皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Re、Rg1的线性范围分别为1.077~5.385μg,1.046~5.230μg,0.0953~0.4765μg,1.018~5.090μg,0.973~4.865μg,相关系数分别为0.9999,0.9999,0.9995,0.9995,0.9996。人参皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Re、Rg1平均回收率分别为96.55%、101.4%、99.08%、99.92%、96.00%;RSD分别为1.6%、1.2%、1.5%、1.2%、1.3%。不同规格的朝鲜红参之间及朝鲜红参与国产红参都具有较好的相关性。结论:该方法重复性好,可以用来同时测定朝鲜红参中人参皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Re、Rg1五种成分的含量,14批不同规格的朝鲜红参中人参皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Re和Rg15种成分含量存在差异,但总体而言,朝鲜红参与国产红参在人参皂苷含量和指纹图谱上无明显差异。     

蕲蛇及其混淆品高特异性PCR鉴别

目的：建立一种准确、简便的蕲蛇药材DNA分子标记鉴别方法。方法：用Cytb通用引物对蕲蛇及7种常见混淆品PCR扩增后进行测序，依其序列间差异设计一对专用于中药材蕲蛇的鉴别引物HQSL-1和HQSH-1。用不同的复性温度PCR扩增，确立特异性反应条件。探讨适合中药材动物药的分子标记种类。结果：PCR扩增结果是在50℃复性温度下，正品蕲蛇均得到约220bp的扩增带，而混淆品在同样的条件下无扩增带。结论：所设计的鉴别引物对正品蕲蛇有高度的特异性。PCR方法重复性高，同种不同个体间的种内差异对鉴定结果不会有影响。本方法简单、准确、快速。     

中韩两国参类产品贸易竞争力对比研究

人参是中国的名贵中药材之一,具有悠久的使用历史,素有"百草之王"称号。以人参为代表的参类产品在世界各国享有盛誉,被广泛的应用于食品、药品、保健品、化妆品等的生产。中国与韩国均为参类产业大国,对两国的参类产品出口竞争力进行对比分析有助于改进中国参类产业。该文研究海关数据和COMTRADE数据库参类产品贸易相关数据,对中韩两国参类出口的竞争力进行了分析。结果发现,韩国参类产品的竞争力高于中国,韩国参类出口量仅占中国15%,贸易额却与中国相当。在此基础上,本文进一步探讨了中国参类产业发展应注意的问题。     

高特异性PCR方法鉴别乌梢蛇及其混淆品

 目的建立一种简便、准确的乌梢蛇药材DNA分子标记鉴别方法。方法根据乌梢蛇及10种常见混淆品线粒体12SrRNA基因序列,设计一对专用于乌梢蛇的鉴别引物HWL-1和HWH-1,用不同的复性温度PCR扩增,确立特异性反应条件,并利用此方法鉴别从市场上购买的各种乌梢蛇药材。结果PCR结果是在65℃复性温度下,正品乌梢蛇得到约320 bp的扩增带,而混淆品在同样的条件下无扩增带。为检验该方法的准确性,对市售乌梢蛇炮制品随机选取13块进行PCR鉴别验证,其中正品9块,混淆品4块,检出率达100%。结论所设计的鉴别引物对正品乌梢蛇有高度的特异性。PCR方法稳定性高,同种不同个体间的种内差异对鉴定结果无影响。本方法简单、准确、快速、灵敏度高、重现性好。