基于小鼠子宫平滑肌收缩活性测定的桂枝茯苓胶囊质量评价研究

目的 从桂枝茯苓胶囊（Guizhi Fuling Capsules,GZFLC）临床用于治疗痛经的功效出发,探索建立基于子宫平滑肌收缩活性测定的GZFLC质量生物活性评价方法。方法 通过注射雌激素增加小鼠子宫敏感性,建立缩宫素诱导的小鼠离体子宫平滑肌收缩模型,采集给药前后小鼠子宫平滑肌的收缩频率、幅值和峰面积,以收缩峰面积为指标进行统计并对药效进行归一化处理。考察小鼠离体子宫平滑肌收缩模型的主要影响因素如雌激素注射方式与天数、缩宫素浓度、动物周龄和GZFLC前处理方法。建立GZFLC质量生物活性评价方法并进行方法学考察,测定10个批次GZFLC合格样品及2个GZFLC高温破坏样品的生物活性。结果 连续3 d ip雌激素10 mg/（kg·d）后小鼠子宫平滑肌收缩峰面积较高且收缩节律较好;最适缩宫素造模质量浓度为0.050 μg/mL;将GZFLC配制成质量浓度为0.125 g/mL的药液并超声溶解60 min有利于药效发挥;重复性考察RSD为11.298%,日内精密度RSD为12.452%,日间精密度RSD为10.438%;10批次GZFLC半数抑制浓度（half inhibitory concentration,IC₅₀）为1.526～1.631 mg/mL,高温破坏后GZFLC的IC₅₀明显增大。结论 基于子宫平滑肌收缩活性测定的GZFLC质量评价方法重复性和精密度较好,为后续GZFLC的综合质量评价标准建立提供了科学依据。     

基于大鼠非酒精性脂肪性肝炎模型优选七味脂肝颗粒的主体工艺路线

目的优选七味脂肝颗粒的主体工艺路线。方法采用高脂饲料喂养致大鼠非酒精性脂肪性肝炎模型。通过测定肝脏系数、检测各组动物血清中GOT、GPT、TG、T-CHO、HDL-C、LDL-C和IL-6水平及肝脏组织形态学观察,考察三个工艺组样品对非酒精性脂肪性肝炎大鼠的影响。结果与模型组比较,工艺3组样品能明显降低肝脏系数、GOT、GPT和TG、T-CHO、LDL-C数值(P 0.05),显著减少IL-6分泌、减轻肝细胞损伤程度(P 0.01),明显升高HDL-C的水平(P 0.05)。结论工艺3为主体工艺路线,后续可进行工艺参数优化以开发七味脂肝颗粒。     

泽泻提取物改善游离脂肪酸诱导的HepG2脂肪变性细胞模型的脂质代谢及氧化应激异常

目的 研究泽泻提取物（Alisma orientale extract,AE）及其3种主要单体成分对游离脂肪酸（free fatty acid,FFA）诱导的HepG2脂肪变性细胞模型的脂质代谢及氧化应激异常的改善作用及机制。方法 利用FFA（油酸-棕榈酸2∶1）建立稳定的HepG2脂肪变性细胞模型,CCK-8法测定AE、泽泻醇A、泽泻醇A-23-乙酸酯及泽泻醇A-24-乙酸酯对HepG2细胞的安全剂量;在FFA诱导同时给予AE（25.00、12.50、6.25 mg/L）、泽泻醇A（50.0、25.0、12.5 μmol/L）、泽泻醇A-23-乙酸酯（25.00、12.50、6.25 μmol/L）、泽泻醇A-24-乙酸酯（50.0、25.0、12.5 μmol/L）处理24 h,检测细胞内脂滴的形成情况,利用生化试剂盒测定各组细胞内三酰甘油（triglyceride,TG）、总胆固醇（total cholesterol,TC）水平,DCFH-DA检测药物对细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）生成的影响,采用试剂盒检测细胞内氧化应激关键指标丙二醛（malondialdehyde,MDA）、总谷胱甘肽（glutathione,GSH）水平以及超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性;采用Western blotting检测过氧化物酶体增殖物激活受体α（peroxisome proliferator-activated receptor α,PPARα）、PPAR共激活因子-1α（peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator-1α,PGC-1α）、下游脂肪酸氧化和胆固醇代谢相关蛋白及核因子红细胞2相关因子2/血红素加氧酶-1（nuclear factor red blood cell 2 associated factor 2/hemeoxygenase-1,Nrf2/HO-1）通路蛋白表达。结果 与对照组比较,HepG2脂肪变性细胞模型细胞内TC、TG、ROS及MDA水平显著升高（P＜0.001）,SOD活性及GSH水平降低（P＜0.01、0.001）;同时,细胞中PPARα、PGC-1α、肉碱棕榈酰转移酶1A（carnitine palmitoyl transferase 1A,CPT1A）、酰基辅酶A氧化酶1（acyl coenzyme A oxidase 1,ACOX1）、Nrf2及HO-1蛋白表达水平显著降低（P＜0.05、0.01、0.001）。与模型组比较,AE、泽泻醇A及泽泻醇A-23-乙酸酯给药组细胞内脂滴、TG和TC水平显著下降（P＜0.05、0.01、0.001）,AE、泽泻醇A及泽泻醇A-24-乙酸酯给药组细胞内ROS及MDA水平均显著降低（P＜0.05、0.001）,SOD活性和GSH水平显著升高（P＜0.05、0.01）;各给药组细胞中PPARα、PGC-1α、CPT1A、ACOX1、细胞色素P450酶7A1（cytochrome P450 enzyme 7A1,CYP7A1）、Nrf2及HO-1蛋白表达水平显著上调（P＜0.05、0.01）。结论 AE、泽泻醇A、泽泻醇A-23-乙酸酯及泽泻醇A-24-乙酸酯可以改善FFA诱导的HepG2脂肪变性细胞模型的脂质代谢及氧化应激异常,其机制可能是通过调控PPARα和Nrf2/HO-1通路,进而促进脂肪酸氧化及胆固醇代谢,抑制氧化应激。     

散结镇痛胶囊对小鼠子宫平滑肌收缩的影响及其机制研究＊

目的 研究散结镇痛胶囊（Sanjie Zhentong capsule，SJZTC）对小鼠子宫平滑肌收缩及钙离子的影响。方法 未孕小鼠皮下注射雌二醇5 mg·kg^-1，分离子宫置于装有20 mL乐氏液恒温浴槽中，给 1.0 g的负荷，待肌条自发收缩稳定后，采用加倍累加给药法（浓度分别为0.0625 mg·mL^-1、0.125 mg·mL^-1、0.25 mg·mL^-1、0.5 mg·mL^-1、1.0 mg·mL^-1），观察SJZTC对子宫自发收缩及诱导剂（PGF_2α 1 mg·L^-1、Ach 1 μM、Oxytocin 5IU·L^-1、BayK8644 1 μM）引起子宫收缩的影响。培养子宫平滑肌细胞，观察SJZTC对缩宫素引起子宫平滑肌细胞钙离子释放的影响。结果 不同浓度SJZTC均能减小子宫自发收缩及诱导剂引起子宫收缩幅值，随着浓度的增加，对子宫收缩幅值抑制作用越明显；与溶媒组比较，SJZTC不同浓度组 （0.0625 mg·mL^-1、0.125 mg·mL^-1、0.25 mg·mL^-1、0.5 mg·mL^-1、1.0 mg·mL^-1）对子宫收缩幅值的抑制率均有显著差异（P < 0.01）。与模型组比较，SJZTC能显著抑制缩宫素诱导子宫平滑肌细胞内钙离子（P < 0.05或P < 0.01）含量。结论 SJZTC对小鼠子宫平滑肌收缩具有显著抑制作用，其机制与抑制钙离子释放有关。     

桂枝茯苓胶囊对实验性子宫内膜异位症痛经作用及机制

目的：研究桂枝茯苓胶囊（GZFLC）对实验性子宫内膜异位症痛经作用机制。方法：将60只SD雌性大鼠随机分为假手术组、模型组、散结镇痛胶囊组、GZFLC高、中、低剂量组（0.54、0.27、0.14 g?kg-1）组,每组10只。每天灌胃给药,连续28 d。观察各组扭体反应,测量移植物体积并进行病理检测,采用免疫组化法检测异位灶NGF、TRPV1 蛋白的表达。结果：与模型组比较,散结镇痛胶囊组和GZFLC高、中、低剂量组大鼠扭体次数显著减少（P ＜ 0.01）,其抑制率分别为51.1%、63.2%、60.4%、47.1%。与模型组比较,散结镇痛胶囊组和GZFLC高、中、低剂量组大鼠移植物体积显著减少（P ＜ 0.01）,其抑制率分别为61.9%、66.0%、59.1%、56.6%。与模型组比较,GZFLC高、中剂量组可显著降低子宫内膜异位症痛经大鼠异位组织的病理学评分及NGF、TRPV1 蛋白的表达。结论：GZFLC对实验性子宫内膜异位症痛经具有一定治疗作用,其机制与抑制NGF、TRPV1蛋白表达相关。     

龙血通络胶囊对氧化低密度脂蛋白损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用

该文为观察龙血通络胶囊对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)致人脐静脉内皮细胞(EAhy.926细胞)损伤的保护作用。采用氧化低密度脂蛋白(100 mg·L~(-1))损伤建立体外人脐静脉内皮细胞损伤模型方法,MTT法检测龙血通络胶囊对正常细胞生长影响及对损伤细胞的保护作用,酶联免疫吸附法检测龙血通络胶囊对内皮细胞损伤后乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的影响,蛋白质印迹(WB)法检测细胞间黏附分子~(-1)(ICAM~(-1)),血管细胞黏附分子~(-1)(VCAM~(-1)),p65,p-p65,IKB,p-IKB的表达水平。结果显示,与正常对照组比较,ox-LDL损伤后EAhy.926细胞活力显著降低,细胞LDH漏出量增加(P0.01),NO含量、SOD活力均显著降低(P0.01,P0.05),细胞中MDA含量升高(P0.05),ICAM~(-1),VCAM~(-1),p-p65/p65,p-IKB/IKB等蛋白的表达量均显著升高(P0.01);与模型对照组比较,龙血通络胶囊(1,2 mg·L~(-1))对正常细胞生长无显著影响,可促进ox-LDL损伤的血管内皮细胞增殖(P0.05,P0.01),降低胞内MDA含量、减少细胞LDH释放量(P0.05),提高SOD活力及NO含量(P0.01,P0.05);可降低ICAM~(-1),VCAM~(-1),p-p65/p65,p-IKB/IKB的表达(P0.01)。结果提示龙血通络胶囊对ox-LDL所致的人脐静脉内皮细胞损伤具有明显的保护作用,说明龙血通络胶囊对动脉粥样硬化具有一定治疗作用。     

基于NLRP3/ASC/Caspase-1信号通路探讨独活醇提物对MSU诱导的痛风性关节炎的治疗作用

目的：通过体内和体外实验探讨独活醇提物(DH50)对尿酸钠(MSU)晶体诱导的痛风性关节炎的治疗作用及作用机制。方法：体内实验：将50只雄性SD大鼠,随机分为正常组、模型组、地塞米松组(DXMS,0.07 mg·kg^-1)、DH50低剂量组(DH50-D,9 mg·kg^-1)、高剂量组(DH50-G,18 mg·kg^-1)5组(n=10)。连续灌胃给药7 d,正常组和模型组给予等体积纯水,第5天向大鼠右侧踝关节注射MSU建立痛风性关节炎模型。测量造模后4、8、24、48 h的大鼠足跖容积并对关节炎症评分,苏木素-伊红(HE)染色检测大鼠滑膜组织病理形态的改变,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠滑膜组织匀浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)的含量变化,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测滑膜组织中NOD样受体蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶-1(Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、IL-1β、环氧化酶-2(COX-2)的蛋白表达情况。...     

热毒宁注射液解热镇痛作用研究

目的：探讨热毒宁注射液解热镇痛作用。方法：SD大鼠背部皮下注射酵母复制发热模型,尾静脉注射热毒宁注射液,剂量分别为10.16 g?kg-1、5.08 g?kg-1、2.54 g?kg-1,观察不同时间动物体温变化;ICR小鼠连续7日尾静脉注射热毒宁注射液,剂量分别为20.30 g?kg-1、10.15 g?kg-1、5.08 g?kg-1,采用扭体法、热板法和小鼠爪痛测试进行镇痛实验。结果：热毒宁注射液高剂量和中剂量可以明显降低发热动物的体温（P<0.05或P<0.01）,同时均可明显降低醋酸所致小鼠的扭体次数（P<0.05或P<0.01）,明显提高小鼠热板和爪痛的痛阈值（P<0.05或P<0.01）。结论：热毒宁注射液具有较好的解热镇痛作用。     

高效液相色谱法同时测定加味藿香正气软胶囊中橙皮苷、厚朴酚、和厚朴酚和甘草苷的含量

目的：建立高效液相色谱法同时测定加味藿香正气软胶囊中橙皮苷、厚朴酚、和厚朴酚和甘草苷的方法。方法：采用Kromasil C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,以水-甲醇为流动相梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,检测波长287 nm。结果：橙皮苷、厚朴酚、和厚朴酚、甘草苷分别在4.47-178.70 μg·mL-1、3.42-136.96 μg·mL-1、3.49-139.48 μg·mL-1、3.92-157.20 μg·mL-1 范围内与峰面积呈良好线性关系（r=0.999 9）,平均回收率分别为99.48%、99.05%、99.57%、99.79%。结论：该方法准确、灵敏、专属性强,为加味藿香正气软胶囊质量标准提高奠定了基础。     

加味藿香正气软胶囊对细菌性肠炎炎性因子的影响

目的：观察加味藿香正气软胶囊对细菌性肠炎大鼠炎症细胞因子的影响,探讨加味藿香正气软胶囊治疗细菌性肠炎的免疫机制。方法：70只大鼠随机分为正常组、模型组、藿香正气软胶囊组（0.324 g·kg-1）、柳氮磺吡啶肠溶片组（0.225 g·kg-1）、加味藿香正气软胶囊高、中、低剂量组（4.66、2.33、1.16 g·kg-1）,除正常组外,其他各组采用细菌菌株法复制细菌性肠炎模型。各治疗组于第3次注射后,连续灌胃给药2周,放射免疫测定法检测各组大鼠血清中IL-1β、IL-10和TNF-α含量。结果：与正常组比较,模型组大鼠血清中IL-1β和TNF-α含量均显著升高（P＜0.01）,IL-10含量显著降低（P＜0.01）;与模型组相比较,除加味藿香正气软胶囊低剂量组外,其它各组大鼠血清中IL-1β和TNF-α含量均显著降低（P＜0.01或P＜0.05）;柳氮磺吡啶肠溶片组（LDH）、加味藿香正气软胶囊高剂量组（JWG）、加味藿香正气软胶囊中剂量组（JWZ）大鼠血清中IL-10含量均显著增加（P＜0.05,P＜0.05,P＜0.01）。结论：加味藿香正气软胶囊对细菌性肠炎具有治疗作用,其机制可能与IL-10、IL-1β和TNF-α等细胞因子水平调节相关。